1、骨折延遲愈合患者血轉化生長因子         08-07-17 14:40:00     編輯：studa20          作者：許世宏，孫占勝，周東生，穆衛東摘要：目的  研究骨折延遲愈合患者外周血中轉化生長因子(transforming growth factor，TGF)1表達水平的變化趨勢，并與正常愈合患者進行對比。方法  共60 例骨折延遲愈合患者，

2、取其在骨折后1年內不同時間的外周血標本作為實驗組；另取60 例骨折后正常愈合的患者作為對照組。通過免疫酶標法分別檢測骨折后1、2、4、8、12、24、36、48、60周，各組患者外周血中TGF1表達水平的變化趨勢，并比較實驗組與對照組之間的差異。另檢測30 例骨不連患者在手術前后及最終愈合時，外周血中TGF1的水平。結果  骨折2周后，各組患者的外周血TGF1水平都有顯著升高(P0.01)。在24周間，實驗組患者的TGF1水平急劇下降，又回到正常水平；而對照組患者的外周血TGF1仍維持在較高的水平，是實驗組的1.2倍(P0.01)。對照組TGF1水平直至骨折后8周時，才回落至正常水平

3、。術前骨不連患者外周血TGF1水平與正常人無差異，術后2周TGF1水平迅速上升(P0.01)，維持到4周時逐步下降，直到最終愈合時又回落到正常值。結論  骨折患者外周血TGF1水平于較早期下降是骨折延遲愈合的一個重要指標。TGF1在骨折愈合過程中起關鍵作用，骨不連患者術后愈合與外周血TGF1也有密切聯系。關鍵詞：延遲愈合；骨不連；骨折愈合；轉化生長因子1Alterations in Serum Level of TGF1 in Patients with Delayed Fracture HealingAbstract：Objective  To determine the

4、 alterations in serum level of TGF1 from patients with delayed fracture healing in comparison with those from normal healing.Methods  All the 60 patients with delayed fracture healing were recruited as expimental group(Exp)and their peripheral blood samples were collected over a period of 1 yea

5、rs following a standardized time schedule.Another 60 patients with normal healing were recruited as control group(Ctrl).The serum levels of TGF1 at 1，2，4，8，12，24，36，48，60 weeks after trauma were measured using enzyme immunoassays and compared between the 2 groups.TGF1 in 30 patients with nonunion Wa

6、s assayed pre，postoperation and after healing.Results  Serum levels of TGF1 increased significantly 2 weeks after fracture in both groups(P0.01).During 2 to 4 weeks after trauma，TGF1 declined dramatically in Exp group to the reference value；but it still maintained at a relatively higher level i

7、n Ctrl group，about 1.2fold higher than Exp group(P0.01).TGF1 in Ctrl group did not return to the reference value until 8 weeks after trauma.Preoperation，TGF13 1 in the patients with nonunion was similar to normal people.There was a significant increase 2 weeks postoperation(P0.01)，and a decrease 4 w

8、eeks postoperation.Conclusion  Decline of serum concentration of TGF1 occurred earlier in patients with delayed fracture healing，which indicated that TGF1 plays a critical role in fracture healing.It also seems dependent on sufficient availability of TGF1 for patients with nonunion during conso

9、lidation phase.Key words：delayed union；nonunion；fracture healing；TGF1    骨折愈合的生理過程不同于身體其他部位的組織再生，它最終需要重建骨折處的組織結構，使其恢復原有的生物學特征和功能，這一過程有部分類似于胚胎發育中的骨生成階段1。近年來，隨著免疫組織化學和基因表達等各方面的研究進展，發現在骨折愈合時必須有各種生化因子的參與，其中包括細胞因子、蛋白酶和血管形成因子2。在本研究中，我們通過對比骨折正常愈合和延遲愈合患者，以及骨不連患者手術前后外周血中轉化生長因子(transforming gro

10、wth factor，TGF)1表達水平的差異，希望由此闡明外周血TGF1水平與骨折愈合狀況的相關性，以及TGF1在骨折愈合過程所起的作用。1  材料與方法1.1  一般資料  選取60 例骨折延遲愈合患者，男41 例，女19 例，年齡2563 歲；60 例骨折后正常愈合的患者作為對照組，男38 例，女22 例，年齡2159 歲。入選者均為四肢長骨骨折，并去除了多處創傷、明顯軟組織損傷和開放性骨折的病例，2組患者入院治療時的體征無顯著性差異。由于體內TGF1的表達水平還會受到其他因素的影響，因此我們選取的所有患者均未伴有肝腎功能異常、心血管疾病、惡性腫瘤或嚴重感染

11、等。骨折治療后的前3個月，患者每2周檢查1次；后3個月每月檢查1次。30 例骨不連患者也選取了四肢長骨的骨不連，男17 例，女13 例，年齡2768 歲。行手術治療，術中切新斷端，取髂骨植骨，采用帶血管骨膜瓣移植，并聯合常規鋼板、髓內釘內固定或外固定架固定。28 例患者在術后6個月內臨床愈合，未出現感染、錯位、內固定斷裂等并發癥；2 例延遲至術后1年愈合。1.2  血樣采集  骨折正常愈合的患者作為對照組，取其骨折后l、2、4、8、12、24、36、48、60周的外周血樣品；對于骨折延遲愈合患者，待其愈合后，仍然持續收集外周血樣品至骨折后1年，作為實驗組。骨不連患者在術前、

12、術后2、4、8周和最終愈合時，取外周血樣品。血樣采集時，取患者清晨空腹靜脈血，肝素抗凝，分離血清，加入抑肽酶防止蛋白降解，置于80冷凍保存。1.3  ELISA法檢測TGF1的表達水平  以TGF1的ELISA試劑盒(RD Systems)檢測各組血清樣品中TGF1的含量，檢測過程按照試劑盒所附操作手冊的步驟進行。檢測前以1 molL的HCl進行酸化，將樣品中的所有TGF1分子完全轉換為具有生物活性的成熟肽形式，確保檢出血樣中所有的TGF1分子。隨后比較實驗組與對照組患者血清中TGF1表達水平和變化趨勢的差異，以及骨不連患者在手術前、后及最終愈合時，血清中TGF1水平的變化

13、情況。1.4  統計學方法  所有實驗均重復3次，數據以±s表示，t檢驗和OneWay ANOVA方法對實驗結果進行統計學處理，P0.05表示差異具有顯著性意義。2  結    果2.1  骨折患者外周血中TGF1的表達水平  如圖1所示，各組患者骨折后1、2、4、8、12、24、36、48、60周時，外周血中TGF1的表達水平。骨折發生早期(14周)，在對照組骨折正常愈合的患者中，外周血的TGF1水平始終顯著高于實驗組的骨折愈合延遲患者(P0.01)。發生骨折的前2周，各組患者的外周血TGF1水平都有顯著升高(P0.01)。但在24周間，實驗組患者的TGF1水平急劇下降，又基本回復到一般情況下的正常狀態；而對照組患者的外周血TGF1仍維持在較高的水平，是實驗組的1.2倍(P0.01)。直至骨折后8周時，對照組TGF1水平才回落至正常水平。  圖1  骨折正常愈合與延遲愈合患者外周血TGF1水平的比較略2.2  骨不連患者外周血中TGF1的表達水平  骨不連患者在手術前，外周血TGF1水平與正常人無差異，術后2周TGF1水平迅速上升(P0.01)，維持到4周時逐步下降，直到8