1、外排泵抑制劑對銅綠假單胞菌耐藥性的影響外排泵抑制劑對銅綠假單胞菌耐藥性的影響專業(yè)：基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)專業(yè)：基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)學(xué)號：學(xué)號：20112637姓名：田菁菁姓名：田菁菁 前 言 銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa(Pseudomonas aeruginosa，Pa)Pa)為臨床上最常見的引起嚴(yán)重醫(yī)院感染的條件致為臨床上最常見的引起嚴(yán)重醫(yī)院感染的條件致病菌，主要感染醫(yī)院內(nèi)免疫力低下患者，其高度病菌，主要感染醫(yī)院內(nèi)免疫力低下患者，其高度耐藥和多重耐藥性使得治療成為一大難題。隨著耐藥和多重耐藥性使得治療成為一大難題。隨著碳青霉烯類、氟喹諾酮類抗菌藥物臨床應(yīng)用的日碳青霉烯類

2、、氟喹諾酮類抗菌藥物臨床應(yīng)用的日益廣泛，銅綠假單胞菌對這兩類抗菌藥物的耐藥益廣泛，銅綠假單胞菌對這兩類抗菌藥物的耐藥率也逐漸上升，目前國內(nèi)外大量研究發(fā)現(xiàn)，其耐率也逐漸上升，目前國內(nèi)外大量研究發(fā)現(xiàn)，其耐藥與主動外排泵的過度表達有關(guān)。藥與主動外排泵的過度表達有關(guān)。細菌的耐藥機制細菌的耐藥機制1 1、產(chǎn)生滅活酶、產(chǎn)生滅活酶, ,使抗菌藥物失活或結(jié)構(gòu)改變。使抗菌藥物失活或結(jié)構(gòu)改變。2 2、改變細菌細胞壁的通透性、改變細菌細胞壁的通透性, ,使抗菌藥物不能進使抗菌藥物不能進入菌體內(nèi)。入菌體內(nèi)。3 3、細菌體內(nèi)抗菌藥物作用的靶位結(jié)構(gòu)改變、細菌體內(nèi)抗菌藥物作用的靶位結(jié)構(gòu)改變, ,使之使之不能與抗菌藥物合。不

3、能與抗菌藥物合。4 4、形成代謝拮抗劑與藥物爭奪靶酶。、形成代謝拮抗劑與藥物爭奪靶酶。5 5、通過、通過主動外排主動外排作用作用, ,將藥物排出菌體外。將藥物排出菌體外。6 6、細菌分泌細胞外多糖蛋白復(fù)合物將自身包繞、細菌分泌細胞外多糖蛋白復(fù)合物將自身包繞形成細菌生物被膜。形成細菌生物被膜。 外排泵抑制劑（外排泵抑制劑（EPIs) 外排泵抑制劑外排泵抑制劑(EPIs)(EPIs)不僅可以抑制耐藥細菌對不僅可以抑制耐藥細菌對藥物的外排藥物的外排, ,恢復(fù)其對藥物的敏感性恢復(fù)其對藥物的敏感性, ,提高耐藥細提高耐藥細菌的臨床治療效果菌的臨床治療效果, ,而且在改善某些藥物的藥動學(xué)而且在改善某些藥物

4、的藥動學(xué)特性特性( (如提高口服藥物的吸收如提高口服藥物的吸收, ,降低肝、腎清除率降低肝、腎清除率) )方面也有廣泛的用途。方面也有廣泛的用途。 外排泵抑制劑（外排泵抑制劑（EPIs)EPIs)的作用機制分為的作用機制分為: : (1) (1)干擾外排泵組裝干擾外排泵組裝; ; (2) (2)阻斷外排泵能量來源阻斷外排泵能量來源; ; (3) (3)阻礙底物通過外排通道阻礙底物通過外排通道; ; (4) (4)機制未知。機制未知。材料和方法材料和方法菌菌 株株 30 30株銅綠假單胞菌來源于株銅綠假單胞菌來源于某醫(yī)院臨床標(biāo)本，剔除重復(fù)菌某醫(yī)院臨床標(biāo)本，剔除重復(fù)菌株。經(jīng)梅里埃株。經(jīng)梅里埃Vit

5、ek-32Vitek-32型細菌型細菌鑒定系統(tǒng)鑒定。質(zhì)控菌株為銅鑒定系統(tǒng)鑒定。質(zhì)控菌株為銅綠假單胞菌綠假單胞菌ATCC27853ATCC27853。藥品和試劑藥品和試劑 亞胺培南亞胺培南(IMP)(IMP)、美羅培南、美羅培南(MEP)(MEP)，購于沈陽制藥有限公司；購于沈陽制藥有限公司； 環(huán)丙沙星環(huán)丙沙星(CPLX)(CPLX)及左氧氟沙星及左氧氟沙星(LVLX)(LVLX)，購于深圳生物制品檢定所；，購于深圳生物制品檢定所； PANPAN、奧美拉唑、奧美拉唑、MHMH瓊脂培養(yǎng)基，瓊脂培養(yǎng)基，購于美國購于美國SigmaSigma公司。公司。瓊脂對倍稀釋法瓊脂對倍稀釋法 培養(yǎng)基制備使用培養(yǎng)基

6、制備使用MHMH瓊脂，按商品說明書進行配制，瓊脂，按商品說明書進行配制，pH7.2-7.4pH7.2-7.4。 含藥瓊脂平板制備：根據(jù)實驗設(shè)計，將已倍比稀釋的含藥瓊脂平板制備：根據(jù)實驗設(shè)計，將已倍比稀釋的不同濃度的抗菌藥物分別加入已加熱溶解，并在不同濃度的抗菌藥物分別加入已加熱溶解，并在45-45-5050水浴中平衡的水浴中平衡的MHMH瓊脂中，充分混勻傾倒滅菌平皿，瓊脂中，充分混勻傾倒滅菌平皿，瓊脂厚度瓊脂厚度3-4mm3-4mm。配制好的含藥瓊脂平板應(yīng)裝入密封塑。配制好的含藥瓊脂平板應(yīng)裝入密封塑料袋中，置料袋中，置2-82-8冰箱可貯存冰箱可貯存5 5天。天。 接種物制備與接種制備濃度相當(dāng)

7、于接種物制備與接種制備濃度相當(dāng)于0.50.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)比濁管麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)比濁管的菌懸液，再的菌懸液，再110110稀釋，以多點接種器吸取制備好菌稀釋，以多點接種器吸取制備好菌液（約液（約1-2l1-2l）接種于瓊脂平板表面，每點菌數(shù)約為）接種于瓊脂平板表面，每點菌數(shù)約為104CFU104CFU，形成直徑為，形成直徑為5-8mm5-8mm的菌斑。接種好后置的菌斑。接種好后置3535孵孵育育16-20h16-20h，觀察結(jié)果。，觀察結(jié)果。試驗分組試驗分組生長對照組：生長對照組： 制備僅含外排泵抑制劑制備僅含外排泵抑制劑(EPIs) PAN(EPIs) PAN和奧美和奧美拉唑的培養(yǎng)基。拉唑的培養(yǎng)基。實驗組

8、：實驗組： PANPAN與亞胺培南與亞胺培南(IMP)(IMP)、美羅培南、美羅培南(MEP)(MEP)聯(lián)合聯(lián)合時為時為40g/mL40g/mL，與環(huán)丙沙星，與環(huán)丙沙星(CPLX)(CPLX)及左氧氟及左氧氟沙星沙星(LVLX)(LVLX)時為時為20g/mL20g/mL； 奧美拉唑與亞胺培南奧美拉唑與亞胺培南(IMP)(IMP)、美羅培南、美羅培南(MEP)(MEP)、環(huán)丙沙星環(huán)丙沙星(CPLX)(CPLX)及左氧氟沙星及左氧氟沙星(LVLX)(LVLX)聯(lián)合時聯(lián)合時均為均為20g/mL20g/mL。結(jié)果判斷方法結(jié)果判斷方法 將平板置于暗色、無反光物體表面上判斷試驗終點，按照美國臨床實驗室標(biāo)

9、準(zhǔn)化協(xié)會（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）推薦方法測定并讀取結(jié)果。以抑制細菌生長的最低藥物濃度為MIC。比較應(yīng)用EPI前后菌株對4種抗菌藥物MIC值的變化，MIC降低為原值的1/4或更低則判斷為外排泵陽性株。 結(jié)果和討論結(jié)果和討論預(yù)測結(jié)果預(yù)測結(jié)果1. PAN1. PAN對碳青霉烯類、氟喹諾酮類抗菌藥物抗菌對碳青霉烯類、氟喹諾酮類抗菌藥物抗菌活性的影響活性的影響 PAN濃度為40g/mL時，能明顯增強碳青霉烯類對銅綠假單胞菌的抗菌活性，PAN濃度為20g/mL時，即能明顯增強氟喹諾酮類對銅綠假單胞菌的抗菌活性。2.2.奧美拉唑?qū)μ?/p>

10、青霉烯類、氟喹諾酮類抗菌藥物抗奧美拉唑?qū)μ记嗝瓜╊悺⒎Z酮類抗菌藥物抗菌活性的影響菌活性的影響 奧美拉唑20g/mL時，對碳青霉烯類、氟喹諾酮類的抗菌活性影響均較小 討論分析討論分析 PAN PAN即即MC-207110MC-207110是通過結(jié)合外排泵相應(yīng)位是通過結(jié)合外排泵相應(yīng)位點以阻止其他底物與該位點的結(jié)合，減少藥物的點以阻止其他底物與該位點的結(jié)合，減少藥物的外排。外排。PANPAN除了能抑制銅綠假單胞菌除了能抑制銅綠假單胞菌RNDRND型外排型外排泵，還可抑制其他一些革蘭陰性菌的泵，還可抑制其他一些革蘭陰性菌的RNDRND型外排泵，型外排泵，如沙門菌屬、大腸埃希菌、產(chǎn)氣腸桿菌、肺炎克如沙門菌屬、大腸埃希菌、產(chǎn)氣腸桿菌、肺炎克雷伯菌等。雷伯菌等。 奧美拉唑為奧美拉唑為H+-K+-ATPH+-K+-ATP酶酶( (又稱質(zhì)子泵又稱質(zhì)子泵) )抑制抑制劑，通過破壞跨膜電化學(xué)梯度，從而阻斷外排泵劑，通過破壞跨膜電化學(xué)梯度，從而阻斷外排泵能量來源，影響藥物的外排。能量來源，影響藥物的外排。AeschKmannAeschKmann等已證等已證明它可以抑制金葡菌明它可以抑制金葡菌NorANorA外排泵，可使外排泵，可使NorANorA高表高表達株的諾氟沙星、環(huán)丙沙星和左氧氟沙星達株的諾氟沙星、環(huán)丙沙星和左氧氟沙星MICMIC降低降低至原值的至原值的1/4-1/81/4-