1、番茄紅素對烏拉坦誘導(dǎo)小鼠肺癌的影響         【摘要】  目的研究番茄紅素對烏拉坦誘導(dǎo)小鼠肺癌的影響。 方法以烏拉坦(1 000 mg/kg )1次腹腔注射誘導(dǎo)小鼠肺腫瘤，用番茄紅素喂養(yǎng)小鼠18周，觀察腫瘤發(fā)生率, 檢測小鼠血清和肺組織中超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(GST)的活性及丙二醛(MDA)、白細(xì)胞介素2（IL2）與腫瘤壞死因子(TNF)含量。結(jié)果番茄紅素對烏拉坦誘導(dǎo)小鼠肺癌形成后SOD，CAT的活性及IL2與TNF含量有回升作用, 并能阻止與癌變相應(yīng)的G

2、ST活性及MDA含量的增高，降低腫瘤發(fā)生率。結(jié)論 番茄紅素對烏拉坦誘導(dǎo)的小鼠肺癌有預(yù)防作用，主要機(jī)制可能與其抗氧化和免疫調(diào)節(jié)作用有關(guān)。 【關(guān)鍵詞】  番茄紅素； 烏拉坦； 肺癌Effect of Lycopene on Lung Carcinogenesis Induced by UrethaneAbstract：ObjectiveTo study the effect of lycopene on lung carcinogenesis induced by urethane. MethodsThe mouse lung carcinoma was induced by intra

3、peritioneal urethane 1 000 mg/kg . The animals were treated with lycopene for 18 weeks to investigate the rate of tumor formation.The activities of SOD,CAT,GST and the contents of MDA,IL2 and TNF in serum and in lung homogenate were tested.ResultsLycopene could increase the activities of SOD and CAT

4、, increase the content of IL2 and TNF, prevent GST and MDA from increasing, reduce the rate of carcinogenesis.Conclusion Lycopene can prevent lung carcinogenesis induced by urethane, which might be related to its antioxidantion and immune-regulation .Key words：Lycopene;   Urethane; &#

5、160; Lung Carcinogenesis   番茄紅素（lycopene，Ly）為開鏈?zhǔn)讲伙柡皖惡}卜素，廣泛分布于各種植物中，其中在番茄成熟果實(shí)中含量較高，每100 g可達(dá)314 mg1?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證實(shí)，番茄紅素具有抗氧化、清除自由基、促進(jìn)細(xì)胞間連接與傳導(dǎo)、抗衰老等多種生理功能2。有研究表明，人類某些惡性腫瘤的發(fā)病率與膳食中番茄紅素水平存在著密切的關(guān)系。因此，人們預(yù)測，番茄紅素可能是一種很有效的膳食抗癌成分3。為驗(yàn)證番茄紅素是否有確切的防癌作用，我們觀察了番茄紅素對烏拉坦誘導(dǎo)小鼠肺癌的影響。1  器材1.1  試劑  烏拉坦（上?；?/p>

6、學(xué)試劑廠產(chǎn)品，批號030412）。SOD，CAT，GST及MDA試劑盒（南京建成生物技術(shù)研究所）。TNF及IL2  ELISA 測定試劑盒（華美生物工程公司）。纖維素酶，無錫生物制劑廠。其他試劑均為分析純。1.2   動(dòng)物昆明種小鼠，雄性，體重2023 g（河南醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心,動(dòng)物合格證號:醫(yī)動(dòng)字第410115號）；小鼠肺癌瘤株，河南大學(xué)藥學(xué)院細(xì)胞室提供。1.3   儀器  旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀和自動(dòng)純水蒸餾器，上海亞榮生化儀器廠；超聲波發(fā)生器，昆山市超聲儀器有限公司；721分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠；550型酶標(biāo)儀，BioRAD。1.4&#

7、160; 受試藥物的制備新鮮番茄適量，組織搗碎機(jī)打漿，按每1 000 g果實(shí)加入800 ml乙醇和250 g硫酸銨，振蕩5 min，放置10 min后分相，除去果肉以外的上下相，按每1 000 g果肉加入5 g纖維素酶混合，45作用30 min，按每1 000 g果肉加入乙醇1 000 ml ,40W超聲30 min，離心除去果肉，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)乙醇，真空干燥得到番茄紅素。高效液相法測得含量為14.2 mg/100 g果肉，純度大于99%。用時(shí)以0.5%CMCNa溶液溶解，加少量吐溫制成混懸液，用于小鼠灌胃給藥。2  方法2.1  腫瘤模型  取接種8 d生長良好的小鼠

8、腋下瘤塊，用生理鹽水研磨成細(xì)胞勻漿，以6#針頭吸取細(xì)胞液，調(diào)細(xì)胞數(shù)為5×106/ml，按0.2 ml/只接種于小鼠右側(cè)腋窩皮下，制成腫瘤模型4。2.2  研究方案將70只雌性昆明小鼠分為3組：模型對照組30只：造模后常規(guī)喂養(yǎng)；番茄紅素組30只：造模后ig番茄紅素10 mg/kg；正常對照組10只：不造模型，平行飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)第1天，模型對照組和番茄紅素組小鼠均ip烏拉坦1000  mg/kg 1次，第2周開始給予番茄紅素，1次/d，5次/周。第18周予小鼠腹主動(dòng)脈放血，取血清-80保存；同時(shí)取小鼠肺臟，先觀察有無腫瘤生成（如有，記錄腫瘤個(gè)數(shù)，并用游標(biāo)卡尺測量腫瘤長徑a

9、與寬徑b, 按腫瘤=0.4×a×b計(jì)算大?。?，隨后將肺臟在液氮中研碎，加二重蒸餾水勻漿后取離心上清80保存，用于檢測SOD，CAT，GST的活性及MDA，IL2和TNF含量。2.3  測定方法SOD，CAT，GST的活性及MDA ，IL2與TNF含量均按試劑盒說明進(jìn)行，其中SOD，CAT，GST及MDA用比色法測定；IL2與TNF用ELISA方法測定, 所有比色均在96孔酶標(biāo)板中由550型酶標(biāo)儀完成。2.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)處理文中結(jié)果均以±s表示，組間差異采用單因素方差分析，通過SPSS11.0完成。P0.05, 表示有顯著性差異；P0.01, 表示

10、有非常顯著性差異。         3  結(jié)果3.1  番茄紅素對烏拉坦誘導(dǎo)小鼠肺癌形成中SOD，CAT的活性及IL2與TNF含量的影響與正常對照組比較，模型對照組血清及肺臟組織中SOD，CAT的活性有非常顯著的差異（P0.01），IL2與TNF含量有顯著差異（P0.05），說明模型對照組血清及肺臟組織中SOD，CAT的活性及IL2與TNF均明顯降低，番茄紅素組與正常對照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05）；與模型對照組比較，番茄紅素組血清和肺組織中SOD，CAT的活性有顯著差異（P0.05），IL-2

11、與TNF的含量有非常顯著的差異（P0.01），說明番茄紅素可提高血清和肺組織中SOD，CAT的活性，使IL2與TNF含量回升。結(jié)果見表1。表1  番茄紅素對烏拉坦誘導(dǎo)小鼠肺癌形成中血清及肺臟SOD，CAT的活性及IL2與TNF含量的影響（略）與模型對照組比較， *P0.05， *P0.01；與正常對照組比較，#P0.05，#P0.013.2  番茄紅素對烏拉坦誘導(dǎo)小鼠肺癌形成過程中GST活性及MDA含量的影響與正常對照組比較，模型對照組血清及肺臟組織中GST活性有非常顯著的差異（P0.01），MDA含量顯著差異（P0.05），說明模型對照組血清及肺臟組織中GST活性及MDA

12、含量均明顯升高，番茄紅素與正常對照組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與模型對照組比較，番茄紅素組血清及肺臟組織中GST活性有顯著差異（P0.05），MDA含量有非常顯著的差異（P0.01），說明番茄紅素對血清和肺組織中GST活性及MDA含量均有降低作用（見表2）。表2  番茄紅素對烏拉坦誘導(dǎo)小鼠肺癌形成中血清及肺臟GST活性及MDA含量的影響（略）與模型對照組比較，  *P0.05， *P0.01；與正常對照組比較， #P0.05  #P0.013.3  番茄紅素對烏拉坦誘導(dǎo)小鼠肺癌形成率的影響與模型對照組比較，番茄紅素組腫瘤發(fā)生率下降，腫瘤個(gè)數(shù)有顯著性差異（P0.05）

13、，腫瘤大小有非常顯著的差異（P0.01），說明番茄紅素可以降低腫瘤發(fā)生率，抑制腫瘤的生長（見表3）。表3  番茄紅素對烏拉坦誘導(dǎo)小鼠肺癌形成的影響（略）與模型對照組比較，  *P0.05，*P0.014  討論   番茄紅素為鮮紅顏色的天然類胡蘿卜素，其抗氧化性是維生素E的100倍，是-胡蘿卜素的2倍，因此成為保健食品研究的熱點(diǎn)5。烏拉坦對小鼠有致肺癌作用，其特點(diǎn)為不影響動(dòng)物飲食和體重，無劑量蓄積作用6。我們用烏拉坦誘導(dǎo)小鼠肺癌模型，研究番茄紅素對腫瘤發(fā)生的影響，發(fā)現(xiàn)番茄紅素可以降低腫瘤發(fā)生率，使瘤體數(shù)量減少，體積縮小，表明番茄紅素有確切的預(yù)防

14、的腫瘤發(fā)生及抑制腫瘤生長的作用。番茄紅素有免疫調(diào)節(jié)作用，能增加自發(fā)性乳腺癌小鼠體內(nèi)T細(xì)胞亞群CD+4，提高CD+4CD+8比率，使異常T淋巴細(xì)胞變異，恢復(fù)正常7，這可能是其阻止腫瘤發(fā)生、抑制腫瘤生長的重要原因之一。在本研究中番茄紅素升高小鼠血清及肺臟IL-2與TNF-含量，降低GST活性及MDA含量，結(jié)合番茄紅素有誘導(dǎo)一些腫瘤細(xì)胞凋亡的報(bào)道8，我們推測番茄紅素的防癌抗癌作用可能是其調(diào)節(jié)機(jī)體自身的微環(huán)境、不利于腫瘤發(fā)展所致。   自由基的誘癌、促癌及致癌作用已被公認(rèn)，其產(chǎn)生和消除失衡與腫瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切9。SOD，CAT，GST屬于體內(nèi)消除自由基和脂質(zhì)過氧化物的酶類,它們

15、與體內(nèi)其他酶類及抗氧化劑組成一個(gè)自由基的防御系統(tǒng),以清除過多的自由基10。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，番茄紅素在烏拉坦誘導(dǎo)小鼠肺癌形成中對SOD，CAT的活性有回升作用, 并能阻止與癌變相應(yīng)的GST活性及MDA含量的增高，再次驗(yàn)證了我們對番茄紅素通過調(diào)節(jié)機(jī)體自身的微環(huán)境及防癌抗癌作用的推測。   我國是番茄生產(chǎn)大國，番茄紅素因其自身獨(dú)特的保健功能逐漸得到人們的認(rèn)可。在目前人們越來越注重綠色、健康的情況下，以抗氧化、防衰老為先導(dǎo)，將其定位于防癌、抗癌的天然保健食品來開發(fā)，將具有廣闊的市場前景?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 許文玲，李 雁，王雪霞，等.番茄紅素的提取及生理功能的研究J.農(nóng)產(chǎn)

16、品加工學(xué)刊，2006，70 (7)：4.2 謝佳樂，張甫生，羅雪雅，等.番茄紅素的生物學(xué)功能及制取方法J.食品與藥品，2006，8（8）：15.3 王偉華，韓占江，番茄紅素的功能性質(zhì)及其應(yīng)用的研究J.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2006，18(1)：139.4 舒振波，操海萍.反應(yīng)停、紫衫醇對Lewis肺癌小鼠的抑制作用J.實(shí)用腫瘤雜志，2003，18（5）：379.5 楊艷暉，常 東，潘*，等.番茄紅素對小鼠抗疲勞和抗氧化作用J.中國臨床營養(yǎng)雜志，2006，14（3）：141.6 Terry W. Moodya, Julius Leytona, Farah Ziaa et al. Thymosina

17、1 is chemopreventive for lung adenoma formation in A/J miceJ.Cancer Letters , 2000,155(2) :121.7 潘喜華，仲偉鑒，肖 萍，等.番茄紅素調(diào)節(jié)免疫作用及機(jī)制研究J.上海預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2006，18（6）：261.8 張衛(wèi)國 ，謝國建 ，劉先軍，等.番茄紅素對胃癌細(xì)胞SGC7901生長的抑制作用J.中國藥理學(xué)通報(bào)，2005，21(3)：292.9 Jayne Sierens , John A. Hartley , Maeli J. Campbell et al. Effect of phytoestrogen and antioxidant supplementation on oxidative DNA damage assessed using the comet assayJ.Mutation Research , 2001, 485 (2)：169.10 Estra