1、補肝養髓方對老年性癡呆模型皮質神經元 RNA 和 Nissl 體的定量研究         09-08-04 08:43:00     作者：李明 陳曼茵 吳正治    編輯：studa20【摘要】  目的：探討補肝養髓方對自發老年性癡呆模型皮質神經元 RNA 和 Nissl 體的影響。方法：從 21 月齡昆明種小鼠篩選出自發老年性癡呆（記憶障礙）鼠，隨機分為 4 組即空白對照組（老年性癡呆組）、西藥對照組、補肝養髓小劑量組、

2、 補肝養髓大劑量組、另設老年學習記憶正常組（老年正常組）。用跳臺實驗檢測學習記憶成績；腦組織冰凍切片，細胞化學方法顯示大腦皮質神經元內 RNA 和 Nissl 體，全自動顯微圖像分析系統定量檢測相關腦區 RNA 和 Nissl 體含量。結果：補肝養髓方能顯著改善自發老年性癡呆模型小鼠的學習記憶障礙，并明顯增高大腦皮質錐體細胞的 RNA 和 Nissl 體含量，而且其作用呈現出一定的量效關系。結論：補肝養髓方改善自發老年性癡呆模型學習記憶障礙的機理可能與促進調節其大腦皮質的 RNA 代謝，改善學習記憶關鍵腦區的神經元結構有關。 【關鍵詞】  老年性癡呆；補肝養髓方；RNA；Nissl

3、體；大腦皮質；小鼠    Abstract Objective  To  investigate  the  effects  of  Bugan  Yangsui  formula  on  the  RNA  and  Nissl  Bodies of  cerebral  cortex  neuron  in  aged  dementia  mice

4、.    Methods     Spontaneous  aged  dementia  mice  were  screened  out from  21  months  old  Kunming  mice  and  then  were  divided  randomly  into  4  groups,  n

5、amely  control,  westernmedicine,  lower  dosage  Bugan  Yangsui  formula  and  higher  dosage  Bugan  Yangsui  formula  group.  In addition, normal  aged  mice  group  was  also  set.  Brai

6、n  tissue  was  made  to  frozen  section.  Using  cytochemistry  method  to show  RNA  and  Nissl  body,  and  using  automatic  micro-image  analysis  system  to  determine  quantitat

7、ively.  Results     Bugan  Yangsui  formula  could  improve  the  impairment  of  learning  and  memory  in  spontaneous  aged  dementia  mice,  and  it  could  significantly 

8、 improve  the  RNA  metabolism  of  cerebral  cortex  neurons  as  well  as enhance  the  content  of  Nissl  bodies  in  a  dose-dependent  manner.     Conclusion   

9、0; Bugan  Yangsui  formula  could  remarkably  promote  the  RNA  metabolism  and  improve  the  structure  of  neurons  relevant  to  learning  and  memory  in  spontaneous  aged  deme

10、ntia  mice.    Key  Words    Aaged  dementia;  Bugan  Yangsui  formula;  RNA;  Nissl  body;  Cerebral  cortex;  Mouse    RNA 是細胞內重要的生物大分子，通過指導和調控細胞內蛋白質的生物合成調控著細胞的新陳代謝1，老年性癡呆患者 RNA 代謝異常2；而 Nissl 體

11、是神經元內蛋白質合成的場所，其數量與細胞代謝水平有關3。因此，本研究觀察了補肝養髓方對老年性癡呆小鼠皮質神經元內 RNA 和 Nissl 體含量的影響。    1    材料與方法    1.1    自發老年性癡呆小鼠的篩選及分組給藥    雄性昆明種小鼠，13 月齡，購自中山醫科大學實驗動物中心。飼養至 21 月齡，按國際通用標準和方法從老齡動物中篩選自發老年性癡呆學習記憶障礙小鼠4-6。    將篩選出的老年性

12、癡呆鼠 52 只隨機分為 4 組，分別為空白對照組、西藥對照組、補肝養髓小劑量組、補肝養髓大劑量組，每組 13 只，另以 13 只篩選出的老年學習記憶正常鼠作為正常對照組。西藥對照組給以 Hydergine 0.6 mg/kg，補肝養髓小、大劑量組分別予正交優化的補肝養髓方 6.80 g/kg 及 20.41 g/kg，以上均研配成 0.5 mL 液體灌胃給藥，連續 60 d，正常對照組和老年性癡呆組均灌以等量雙蒸水。    1.2    學習記憶功能檢測    給藥觀察第 59 天，灌胃 1 h 后進行

13、跳臺訓練，第 60 天給藥 1 h 后用 MR-921 型小鼠跳臺實驗自動記錄儀以跳臺試驗檢測學習和記憶成績。    1.3    相關腦區 RNA 及 Nissl 體定性定量檢測    給藥觀察及學習記憶檢測結束后，每組隨機取小鼠 8 只，經 1% 戊巴比妥納（40 mg/kg 體重，腹腔注射）麻醉下開胸，左心室主動脈插管結扎，生理鹽水 50 mL 沖洗，續以冷的多聚甲醛戊二醛灌注固定液（含 4% 多聚甲醛、0.05% 戊二醛、0.1 mol/L 磷酸緩沖液 pH 7.27.4）灌注固定，取大腦于灌注液

14、中后固定 2 h（4），然后入 20% 蔗糖緩沖液（0.1 mol/L，pH 7.4）中 4 24 h。AO 冰凍切片機冠狀連續切片，片厚 30   m，切片收集于 0.1 mol/L PBS 中待用。    對照片用 Rnase 液（8 mg Rnase 溶于 10 mL 雙蒸水）37 消化 1 h 再入染液。    定量分析采用 LM ZEISS Axiotron 研究型顯微鏡、JVC KY-F30B3-CCD Variocam 冷凍攝錄儀及Kontron IBAS 2.0 全自動圖像分析儀（Automatic Image