1、生物學(xué)案擴(kuò)充資料專題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題專題一 微生物的實驗室培養(yǎng)一、微生物：原核生物界：例如細(xì)菌、藍(lán)藻 真菌界：例如酵母菌 原生生物界：例如草履蟲、變形蟲、衣藻 病毒：例如艾滋病病毒、SARS病毒二、細(xì)胞質(zhì)：核糖體：蛋白質(zhì)的合成場所。質(zhì)粒：小型環(huán)狀DNA，含有抗藥性基因、固氮基因、抗生素生成基因。三、菌落的定義：是單個或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖，形成肉眼可見具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體。思考1、培養(yǎng)乳酸桿菌時需要添加什么特殊物質(zhì)？ 維生素培養(yǎng)霉菌時需要將培養(yǎng)基pH調(diào)節(jié)為什么條件？ 酸性培養(yǎng)細(xì)菌時需要將pH調(diào)節(jié)為什么條件？ 中性或微堿性四、生長因子定義：某些微生物正常生長代謝過程中

2、必須從培養(yǎng)基中吸收的微量有機(jī)小分子，如某些氨基酸、堿基、維生素等。（并不是所有微生物培養(yǎng)時都需要外源添加生長因子）五、獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵（目的）是：防止外來雜菌的入侵六、滅菌的方法：灼燒滅菌法：用于接種環(huán)、接種針、試管的滅菌。干熱滅菌法：用于玻璃器皿等耐熱器具的滅菌。高壓蒸汽滅菌法：用于培養(yǎng)基、無菌水等的滅菌。 七、平板冷凝后，為什么要將平板倒置？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。八、在作第二次及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條

3、末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。九、比較平板劃線法與稀釋涂布平板法平板劃線法：定義：通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。如何進(jìn)行無菌操作？ 對接種環(huán)、瓶(皿)口及時進(jìn)行灼燒滅菌； 迅速進(jìn)行操作； 將劃線后的平板倒置。稀釋涂布平板法：定義：將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋后，分別涂布到固體培養(yǎng)基表面。稀釋度足夠高時，能培養(yǎng)出單個菌落。2 如何進(jìn)行無菌操作？對涂布器、瓶(皿)口及時進(jìn)行灼燒滅菌； 吸管頭不要接觸任何物體； 迅速進(jìn)行操作。思考2、培養(yǎng)12h和

4、24h后，觀察到的實驗結(jié)果相同嗎？如果不同，請分析產(chǎn)生差異的原因。答：培養(yǎng)12h和24h后的菌落大小不同（相同、不同）；菌落分布位置相同（相同、不同）。原因是時間越長，菌落中細(xì)菌繁殖越多，菌落體積越大；菌落的位置不動，但菌落數(shù)增多。生物學(xué)案擴(kuò)充資料專題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題2 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)一、常見的一些選擇培養(yǎng)基：加入青霉素的培養(yǎng)基，分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基，分離金黃色葡萄球菌不加碳源（有機(jī)物）的無碳培養(yǎng)基，分離自養(yǎng)型的微生物不加氮源的無氮培養(yǎng)基，分離自生固氮菌二、顯微鏡直接計數(shù)法：缺點：不能區(qū)分死菌與活菌；不適于對運(yùn)動細(xì)菌的計數(shù)；需要相對高的細(xì)菌濃

5、度；思考1、利用稀釋涂布平板法成功統(tǒng)計菌落數(shù)目的關(guān)鍵是什么？ 恰當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)三、 設(shè)計對照實驗組應(yīng)遵循：單一因素不同（自變量惟一）； 其他因素（無關(guān)變量）相同且最適；觀察并記錄實驗結(jié)果（因變量）。思考2、如何設(shè)置對照實驗排除培養(yǎng)基被雜菌污染？ 答：將未稀釋涂布的空白平板與進(jìn)行了稀釋涂布的平板放在相同且適宜的條件下培養(yǎng)，觀察是否有菌落生長。四、鑒別培養(yǎng)基實例：分解尿素的細(xì)菌使加入了酚紅的以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基變紅。五、鑒別培養(yǎng)基實例：大腸桿菌在伊紅美籃培養(yǎng)基上形成黑色菌落。生物學(xué)案擴(kuò)充資料IV1、課題2是將土樣制成細(xì)菌稀釋液，直接涂布在以尿素為惟一氮源的選擇培養(yǎng)基上，分離得到菌落2、由于生物與

6、環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對提高。3、將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對聚集（實際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境）；一般應(yīng)將紙埋于深約10cm左右腐殖土壤中。4、（1）選擇培養(yǎng)基未加入凝固劑（瓊脂）是液體培養(yǎng)基；鑒別培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基。 （2）有選擇性；通過加入纖維素作為主要的碳源，選擇出能分解纖維素的微生物。（3）配制不含纖維素含其他碳源的培養(yǎng)基，用稀釋涂布平板法培養(yǎng)纖維素分解菌，觀察是否有菌落形成。5、方法一：缺點是操作繁瑣，加入剛果紅溶液會使菌落之間發(fā)生混雜；優(yōu)點是這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用。方法二：缺點是由于纖維素、瓊脂和土豆汁中都含有淀粉類物質(zhì)，可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應(yīng)；優(yōu)點是操作簡便，不存在菌落混雜問題。6、在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用。選擇培養(yǎng)基：允許特定種類的微生物生長、同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)