1、第六章 蛋白質和 DNA 技術 第一節 蛋白質的提取和分離1 下列關于蛋白質的分離方法的敘述，錯誤的是（）A. 分離主要是根據蛋白質以及蛋白質與其他物質之間的理化性質的差異進行的B. 透析技術可去除小分子化合物雜質，原理是不同分子所攜帶凈電荷不同C. 通過控制離心速率可使分子大小、 密度不同的蛋白質沉降分層， 從而分離不同的蛋 白質D. 不同的物質在同一電場中的泳動速度不同，因此可用電泳法分離蛋白質2離心技術是分離蛋白質的方法之一， 在這一過程中蛋白質會分層， 這一現象與蛋白 質的何種性質有關？（）A 酸堿性B.所帶電荷多少C.分子大小和密度D.種類3下列有關電泳現象的敘述，錯誤的是（）A.

2、相同蛋白質的溶液，經過同一個電場電泳后，會在支持物凝膠上形成相同的帶紋B. 不同蛋白質的混合溶液，經過同一個電場電泳后，會在支持物凝膠上形成不同的帶每一種帶紋一定不是一種蛋白質下列關于聚丙烯酰胺凝膠電泳的敘述，錯誤的是（A.B.是最早使用的電泳技術是區帶電泳的一種C.D.5.A.C.6.凝膠上層加濃縮膠可提高分離效果蘭 A、1、分離血清蛋白質可以得到電泳過程中，什么樣的分子遷移速度最快？（VVr /纖維狀、大分子B.纖維狀、小分子球狀、大分子D.球狀、小分子在血清蛋白的提取和分離過程中，所使用的染色液是（20 種以上的組分）A. 新制血清 5 卩 LB. 質量濃度為 0.4 g/mL 的蔗糖溶

3、液C. 質量分數為 0.05%的考馬斯亮藍侶0染色液D. 質量分數為 0.1%的溴酚藍指示劑7.下面說法不正確的是（）A. 分離膠和濃縮膠單獨存在時具有神經毒性，應避免接觸皮膚B. 電泳需要支持物，常用的是聚丙烯酰胺凝膠C. 電泳是指帶電粒子在電場的作用下發生遷移的過程C.每一種帶紋可能就是一種蛋白質D.4.3D.蛋白質是兩性電解質，不帶電荷&電泳法分離蛋白質時，應保證凝膠的 pH ()A.不斷降低B.不斷升高C.先降低后升高D.不變且適宜9.下面說法不正確的是()A.在一定范圍內， 緩沖溶液能夠抵制外界的酸、堿對溶液pH 的影響，維持 pH 基本不 變B. 緩沖溶液通常由 12 種緩

4、沖劑溶解于水中配制而成C. 電泳是指帶電粒子在電場的作用下發生遷移的過程1D. 透析袋能使大分子自由進出，而將小分子保留在袋內10 .有一混合蛋白質溶液，各種蛋白質的 pH 分別為 4.5、5.2、6.6、7.2，電泳時欲使 其中三種泳向正極，緩沖液的 pH 應該是()A. 2.0B. 5.0C. 6.0D. 7.011.下列關于“血清蛋白的提取和分離”的活動順序正確的是()染色電泳點樣脫色制干膠板A.B.C.D.12 .各種動物血清內乳酸脫氫酶同工酶的組成是不同的。可以通過比較各種動物乳酸脫氫酶同工酶差異的大小來判斷動物之間親緣關系的遠近。下列各種實驗方法中，不能采用的方法是()A. 測乳酸

5、脫氫酶同工酶的氨基酸序列B. 測控制乳酸脫氫酶同工酶合成的基因堿基序列C. 用電泳法比較各種動物乳酸脫氫酶同工酶的電泳帶VKA一D. 檢測不同動物的乳酸脫氫酶同工酶的 pH13 .下圖為某些氨基酸在 pH= 6 時進行電泳的結果，請回答下列問題。原點o CZD o(+)、/(-)谷氨酸 繳氨酸、丙氨酸、蘇氨酸 賴氨酸4(1)_ 由圖示可知，pH= 6 時帶正電荷的氨基酸是 _，帶負電荷的氨基酸是 _ 。請說明理由：_。(2)假設谷氨酸和賴氨酸所帶電荷數相同，它們到達兩極的速度一樣嗎？_，為什么？ _5（3）若把氨基酸換成蛋白質，會出現什么現象?14.我們可以選用豬、牛、羊或其他脊椎動物的血液進

6、行實驗，來提取和分離血紅蛋白。根據材料回答下列問題。（1）實驗前取新鮮血液， 要在采血器中預先加入檸檬酸鈉，取血回來，馬上進行離心,收集血紅蛋白溶液。加入檸檬酸鈉的目的是 _（2）在對樣品進行處理時，主要包括紅細胞的洗滌、血紅蛋白的釋放、分離血紅蛋白溶液、透析等步驟。其中透析技術的原理是 _（3）同學甲利用瓊脂糖凝膠電泳技術將得到的蛋白質進行分離，在電泳過程中，影響蛋白質遷移速率的因素包括蛋白質分子的 _以及分子的 _、形狀等。（4）SDS 凝膠電泳主要取決于蛋白質分子量的大小，與電荷無關。圖一、圖二分別是某同學利用同一種樣品分離得到的結果，則圖二中與圖一中蛋白質P 對應的是_陰極-點樣處圖一

7、 SDS 凝膠電泳結果圖二SpephadexG75，凝膠色譜分離結果6參考答案1.解析：透析技術分離蛋白質是因為蛋白質分子大，不能透過半透膜。答案：B2.解析：根據蛋白質之間或蛋白質與其他分子之間在分子大小和密度上的不同，采用 離心技術，使其分層而分離。答案：C3.解析：不同蛋白質的混合溶液，在經過同一個電場電泳后，會在支持物凝膠上形成 不同的帶紋，每一種帶紋可能是一種蛋白質，也可能是多種蛋白質，還須洗脫確定。答案：D4.解析：聚丙烯酰胺凝膠電泳是最近開始使用的。答案：A5.解析：電泳就是利用了連續分離樣品中各種分子帶電性質的差異以及分子本身的大 小、形狀的不同。一般來說，球形分子比纖維狀分子

8、易移動，小分子比大分子易移動。答案：D、仁Y6.解析：染色液用質量分數為 0.05%的考馬斯亮藍 R250染色液。答案：C7.解析：蛋白質是兩性電解質，在一定pH 條件下帶有電荷。答案：D&解析：pH 的變化會使蛋白質的電泳速度發生改變，因此，為了使蛋白質勻速遷移，/應保證凝膠的 pH 不變且適宜，可用緩沖溶液穩定pH。答案：D9.解析：透析袋一般是用硝酸纖維素（又叫玻璃紙）制成的。透析袋能使小分子自由 進出，而將大分子保留在袋內。透析可以除去樣品中相對分子質量較小的雜質。答案：D*/U/10.解析：在緩沖液的 pH 為 7.0 的溶液中，pH 分別為 4.5、5.2、6.6 的蛋白質

9、均帶負 電荷，在電泳時移向正極。答案：D11 解析：血清蛋白的提取和分離的過程，第一步是用微量加樣器吸取樣品加到電泳樣品槽的膠面上，即點樣。第二步是打開電泳儀的電源，進行電泳。第三步是用考馬斯亮藍 R250染液進行染色。第四步是用醋酸溶液脫色。第五步是將已脫色的凝膠板浸泡后，自然干 燥即獲得血清蛋白的電泳7譜帶。答案：D12.解析：生物是由共同的原始祖先進化而來的。各種生物之間具有或近或遠的親緣關系。親緣關系越近，則其對應的基因的堿基序列相似程度就越高，而基因控制蛋白質的合成，故其對應的蛋白質的氨基酸序列相似程度也高。因此，可以采用測定基因或蛋白質序列的方法進行判斷。若蛋白質的相似程度高，則進

10、行電泳時，電泳帶的相似程度也高。不同動物的 乳酸脫氫酶同工酶組成雖不同，但不能說明其pH 就一定不同。答案：D13.解析：氨基酸是一種兩性電解質，在一定pH 條件下帶電荷，作為帶電粒子，氨基酸向與其自身所帶電荷相反的電極運動，即向正極運動的氨基酸帶負電荷，向負極運動的氨基酸帶正電荷，在原點不動的氨基酸， 所帶正電荷和負電荷相等。蛋白質也是一種兩性電解質。答案：（1）賴氨酸 谷氨酸 氨基酸是一種兩性電解質，在一定pH 條件下帶電荷，作為帶電粒子，在進行電泳時氨基酸向與其自身所帶電荷相反的電極方向運動（2）不一樣 進行電泳時，若氨基酸帶相同的電荷數，相對分子質量越小，則移動越 快。由于兩者相對分子

11、質量不相等，因此到達兩極的速度不同（3）蛋白質同氨基酸一樣， 在一定 pH 條件下帶電荷，也會向與其自身所帶電荷相反的 電極方向運動14.解析： （1）加入檸檬酸鈉的目的是防止血液凝固。（2）透析的原理是小分子可以透出透析袋（半透膜），而大分子不能通過。（3）電泳時，影響蛋白質遷移速率的因素有蛋白質分子的帶電性質及分子的大小、形狀等。（4） SDS 凝膠電泳主要取決于蛋白質分子量的大小，與電荷無關，同時加樣在“-”極，通電后，樣品蛋白質向“ + ”極移動，分子量相對小的，移動距離大，因此從圖一的電泳結果分析，P 比 N M 移向“ + ”距離大，符合圖二中的丙。答案：（1）防止血液凝固（2 ）小分子可以透出透析袋（半透膜），而大分子不能通過教師可從教材入手導入本節，也可以列舉其他實例，說明蛋白質提取和分離的重要性。8電泳技術廣泛應用于生化實驗，在分離酶、蛋白質、核酸等生物大分子方面具有較高的分辨率。教師可以通過一個簡單的實驗使學生理解電泳現象，比如在盛有紅褐色Fe （OH3膠體的 U 形管的兩個管口，各插入一個電極。通直流電后，發現陰極附近的顏色逐漸變深， 陽極附近的顏色逐漸變淺。這表明 Fe（OH3膠體粒子帶正電荷，在電場作用下向陰極移動。這種在外