1、名稱解釋細胞培養（動物細胞培養）：動物細胞培養是指將動物活體體內取出的組織用機械或消化的方法分散成單細胞懸液，然后放在類似于體內生存環境的體外環境中，進行孵育培養，使其生存、生長并維持其結構與功能的方法。組織培養：從生物體內取出活的組織（多只組織塊）在體外進行培養的方法。有時泛指所有的體外培養。器官培養：是將活體內的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在體外進行培養的方法。合成培養基：根據細胞生存所需物質的種類和數量，用人工方法模擬合成的、配方恒定的培養基。無血清培養基：由基礎培養基和替代血清的補充因子（生長因子和激素、結合蛋白等）組成。完全培養基：在合成培養基里添加血清后的培養基。

2、接觸抑制：體外培養的細胞在貼附底物上連接成片、相互接觸后失去運動的現象。無限細胞系：細胞株傳代至50 代后又出現細胞生長停滯狀態，只有部分細胞由于遺傳物質的改變，使其在培養條件下可以無限制傳代，這種傳代細胞為細胞系。去分化（脫分化）：細胞在體外不可逆地失去原有特性。注意：去分化不意味分化能力完全喪失！在適當調節信號刺激下仍能表現出分化特性。但分化能力會隨培養時間延長而逐漸喪失。不適應：各種分化細胞，在體外培養時逐漸失去各自的形態與功能特征，表現出某種趨同性。原因：培養條件變化使分化發生阻抑細胞分裂指數（MI）:是指細胞群中每1000個細胞中的分裂相數量細胞群體倍增時間：是指培養物中細胞數量翻倍

3、的時間。原代培養：從機體取出后立即培養的細胞為原代細胞。培養的第 1 代細胞與傳10 代以內的細胞稱為原代細胞培養。傳代培養：將原代細胞從培養瓶中取出，配制成細胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養瓶中繼續培養，稱為傳代培養。1）體外培養細胞，其生長方式主要有貼壁生長和懸浮生長兩種，分別稱為貼壁細胞和懸浮細胞。2）一般可將貼壁細胞生長的體外培養細胞大體分為成纖維細胞型、上皮細胞型、游走細胞型、多行細胞型四種類型，最常見的為前兩種。3）體外培養細胞的主要生長特點：貼附生長接觸抑制密度依賴性培養細胞分化狀態的變化：去分化（脫分化）不適應1、細胞培養的基本要求有哪些和工作方法要求： 1 ）培養前準備2

4、 ）操作間消毒 3）洗手和著裝4）火焰消毒培養前的準備的基本要求：培養基的選擇和無菌配制動物細胞培養用液的類型、配制和無菌處理方法： 1 ）操作程序規范2）試劑設備專人負責3 ）培養用品定點存放2、平衡鹽溶液（BBS）：（1 ）成分：無機鹽和葡萄糖，少量酚紅。（ 2）作用：維持滲透壓、緩沖和調節酸堿度（3）常用：Hanks液、PBS等消化液（ 1）作用：分散組織或細胞團。 2 ）常用：胰蛋白酶消化液、膠原酶消化液、 EDTA-2Na 液、蝸牛酶等2、消化液中的胰蛋白酶消化液、膠原酶消化液、 EDTA-2Na 液作用的原理是什么？胰蛋白酶消化液主要作用是水解細胞之間的蛋白質，使細胞相互分離。ED

5、TA-2Na 液：是一種化學螯合劑，其溶液又稱Versen 液，對細胞有一定的離解的作用。 EDTA-2Na 液的主要作用是通過結合（螯合）細胞間質中的二價陽離子從而破壞細胞之間的細胞連接。達到分散細胞的目的。膠原酶溶液：膠原酶是從細胞中提取的一種酶，對膠原組織和細胞間質有較強的消化作用，而對培養細胞一般不產生損傷，常在上皮類細胞原代培養時用來離散細胞與膠原組織。3、1）天然培養基：定義：主要指來自動物體液或利用組織分離提取的一類培養基，如血漿、血清、淋巴液、雞胚浸出液等。優點：含有豐富的營養物質，滲透壓、pH等也與體內環境相似，培養效果好。缺點：成分復雜，批間差異大，易被支原體污染。2）合成

6、培養基：根據細胞生存所需物質的種類和數量，用人工方法模擬合成的，配方恒定的培養基。成分：氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助物質。優點：標準化生產，組分和含量固定。成本低。缺點：缺少某些成分，不能促進細胞增殖生長。3）完全培養基；定義：在合成培養基里添加血清后的培養基。細胞生長培養基：常用培養基，血清含量高，10-20%。維持培養基：維持細胞不死或緩慢生長，血清含量低 ，2-5%。4）無血清培養基：定義：由基礎培養基和替代血清的補充因子（生長因子和激素、結合蛋白等）組成。用途：用于研究細胞生長因子、單克隆抗體制備、細胞分泌產物研究等。優點：保證實驗結果的準確性、可重復性和穩定性，減

7、少細胞污染，簡化提純和鑒定等程序。3、完全培養基中各成分的作用是什么？合成培養基（基礎培養基）的成分只能維持細胞生存血清：常用牛血清，含有促進細胞增殖的各種生長因子和其他多種有利于細胞生存的物質。一定量的抗生素：防止污染4、體外培養細胞與體內培養細胞的差異都有哪些？5、論述培養細胞的一代生存期可分為幾個階段及其特點？培養細胞的“一代生存期”，是指從細胞接種后到再次傳代培養之前的這一段時間，它與細胞世代或倍增時間不同。可分為潛伏期、指數生長期、停滯期（平頂期）1 .潛伏期特點：1）細胞適應新環境的恢復期（包括懸浮期、貼壁期、潛伏期三個時期）2）可有運動活動，基本無增殖，少見分裂相。2 .指數生長

8、期特點：1）細胞增殖最旺盛的時期，細胞數量呈指數生長，是實驗研究和生產的主要階段。2）用細胞分裂指數和細胞群體倍增時間表示。3 .停滯期特點：特點：細胞數量不再增加，仍有代謝活動6、動物細胞培養具有一系列優點：可簡化細胞的生長環境。在細胞存活的基礎上獨立研究細胞生命活動、逐項研究細胞生存條件和細胞功能。能夠方便地控制實驗因素。研究某種實驗因素對細胞的生物學作用，只需在培養液中有針對性地加入或者刪除這種成分。易于觀測實驗結果。利用細胞培養技術研究細胞的生命活動規律，可以很方便地采用各種實驗技術和方法來 觀察、檢測和記錄。可供研究的細胞種類極其廣泛。可同時提供大量均一性較好的細胞群，降低實驗成本。

9、能夠進行大規模生物制品的生產。包括酶、單克隆抗體以及多種疫苗等生物制品或者基因工程產品。2、動物細胞培養的缺點：體外培養的動物細胞對營養的要求較高。動物細胞生長緩慢，對環境條件要求嚴格。體外培養的細胞與體內生長的細胞存在或多或少的差異。（形態和功能的差異）7 .動物細胞培養實驗室有哪幾個部分組成？理想的培養實驗室可分為：準備室、緩沖室(與培養室相連的消毒房間，作為隔離培養室與外面非消毒房間的 緩沖地帶)、培養室(一間或幾間)，普通實驗室、辦公室。8 .論述細胞培養的生長特點。培養細胞生命期：指細胞在培養中持續增殖和生長的時間。包括三個階段：原代培養期、傳代培養期、衰退 期。1 .原代培養期 (

10、也稱初代培養，即從體內取出組織接種培養到第一次傳代階段，一般持續1 4周)特點：二倍體，細胞分裂次數少，異質性，獨立生存性差。用途：藥物測試，疫苗制備等。2 .傳代培養期(定義：原代細胞接種到兩個或以上的器皿繼續進行培養標志進入傳代培養期)特點：細胞分裂增殖旺盛，去分化，在全生命期中此期的持續時間最長，傳代10-50次。3 .衰退期(定義：傳代培養一定代數后，細胞生命活動明顯減弱，增殖很慢或不增殖，直至衰退死亡的時期。) 細胞特點：細胞形態輪廓增強，色澤變暗，細胞質內出現暗的顆粒樣結構及空泡狀結構，胞質突起回縮，最后 衰退凋亡。9 .論述玻璃制品清洗步驟10、論述動物細胞培養技術的應用1 .在

11、生物學領域基礎研究中的應用(1)在細胞生物學上的應用(2)在遺傳學上的應用染色體分析，雜交育種。(3)在胚胎學上的應用通過體外培養卵母細胞，進行體外受精、胚胎分割和移植(4)在病毒學上的應用培養細胞為病毒的增殖提供場所。研究細胞的形態、結構、生長發育、細胞營養、代謝以及病變等微觀過程。(5)在藥理學領域的應用藥品、食品添加劑等對機體的毒性及其產生不良影響的安全性調查。(許多致 畸、致癌物質加入動物細胞培養液后，培養細胞會發生染色體結構和數目的變異。)2 .在臨床醫學上的應用(1)用于遺傳疾病和先天畸型的產前診斷用羊膜穿刺技術獲得胎兒細胞，培養后進行染色體分析，診斷胎兒是否患有遺傳性疾病或先天畸

12、型。(2)用于癌癥的早期診斷和預防通過培養淋巴細胞，對其染色體進行對比分析檢測出易患癌癥的病人，進行及早的預防和治療。(3)用于臨床治療目前已有將正常骨髓細胞經大量培養后植入患造血障礙癥患者體內進行治療的報道。(4)用于藥物效應的檢測檢測的藥物具有組織特異性時，可選用相應的細胞，如檢測治療肝病的藥物可選用肝細胞、檢測抗癌藥物可選用癌細胞。3 .在動物育種上的應用新品種的培育可大大縮短育種進程，且更加經濟有效。胚胎干細胞的研究成果和克隆羊多莉的 問世為動物遺傳育種開辟了一條新途徑。4 .在生物制品生產上的應用用動物細胞可生產的生物制品有各類疫苗、干擾素、激素、酶、生長因子、病毒殺蟲劑、單克隆抗體

13、等。11、血清種類：人血清、牛血清、馬血清等。成分：基本營養物、激素、生長因子、結合蛋白、貼壁和擴展因子等。標準：透明，淡黃色，無沉淀物，無細菌、支原體、病毒污染。使用：逐步解凍，熱滅活，10%濃度，超低溫保存。牛血清又分胎牛血清和小牛血清，它們的區別胎牛血清是從母牛剖腹取出的胎牛中分離出來的血清，對許多細胞系均有促進生長作用，主要用于細胞株的保藏及特殊嬌貴細胞株的體外培養，但價格昂貴。小牛血清是從剛出生但尚未哺乳的小牛分離出來的血清。12 、細胞傳代方法貼壁細胞的消化法傳代步驟（ 1）吸出或倒掉瓶內的舊培養液。（ 2）加入適量的消化液消化。（ 3）鏡檢，發現細胞質回縮，細胞間隙增大后，應立即

14、終止消化。（ 4）吹打瓶壁細胞，制成細胞懸液。（ 5）計數，接種到新的培養瓶。懸浮細胞多采用離心法傳代將細胞連同培養液一并轉移到離心管內， 800-1000rpm 離心 5min, 然后取出上清，加入新的培養液到離心管內，用吸管吹打使之形成細胞懸液，然后傳代接種。13 、培養細胞的觀察和檢測技術1）培養液觀察培養液的顏色和透明度的變化。正常培養液pH介于7.27.4之間，呈桃紅色、清亮透明。培養中細胞代謝產生的酸性產物會使培養液pH 值下降，引起顏色變淺變黃。23天或34天換液一次。2）細胞生長狀況倒置顯微鏡觀察。原代細胞培養中最先可見從組織塊中邊緣“長出”細胞。成纖維細胞是最易生長的細胞。細

15、胞長滿瓶底80% 應及時傳代。3、細胞形狀變化生長良好的細胞：透明度大，折光性強，輪廓不清。細胞生長狀態不良的細胞：輪廓增強，細胞折光性變弱，邊緣不齊，胞質中出現空泡、脂滴、顆粒狀物質，細胞之間空隙增大，細胞表面及周圍出現絲絮狀物。采取措施：換液、排污、廢棄。4、微生物污染細菌污染：培養液渾濁、漂浮菌絲。支原體污染：生長減緩、胞質顆粒增多、培養液不變混。細胞交叉污染。化學物質污染。14 、去分化和不適應的區別“去分化”不可逆（染色體變化）。“不適應”可重新誘導（培養條件變化）關于去分化需要注意：去分化并不意味著完全返回胚胎時期的原始細胞狀態。如：高度分化的神經細胞和心肌細胞已經喪失的增生活性不

16、可能恢復，但已經具備的生物電活動特性不會完全失去。可重新表現出分化特點。 如：把表皮細胞放在氣液界面上培養，可分化成含大量角蛋白絲的角質細胞 、內皮細胞，但，這種能力會隨著培養時間延長逐漸喪失。15 、谷氨酰胺在培養基中的主要作用？配液時應該注意哪些問題？作用：在細胞代謝中有重要作用，是細胞合成核酸和蛋白質必需氨基酸，（在缺少時，細胞生長不良死亡）配液時：由于谷氨酰胺在溶液中很不穩定，應置于-20 度冰箱中保存，在使用前加入培養液內。已含谷氨酰胺的培養液在 4 度冰箱中儲存 2 周以上時，還應重新加入原來的谷氨酰胺。第二章1、細胞冷凍的原理是什么細胞凍存的原則：慢凍快融2 ）加冷凍保護劑（常用

17、：甘油或二甲基亞砜（ DMSO） ）主要原因： 1）冷凍速度過快，細胞內水分結冰形成冰晶，造成細胞膜和細胞器的破壞引起細胞死亡。冷卻速度越快，冰晶損傷越大。2）細胞懸浮在溶液中，隨著溫度的下降，細胞外部的水分會先結冰，從而使得未結冰的溶液中電解質的濃度升高。如果將細胞暴露在這樣高溶質的溶液中且時間過長，細胞膜上脂質會受到損壞，細胞便發生滲漏。冷凍保護劑作用機理： 1）冷凍保護劑易同溶液中水分子結合，從而降低冰點，減少冰晶的形成；2）通過其摩爾濃度降低未結冰溶液中電解質的濃度，使細胞免受溶質的損傷，細胞得以在超低溫條件下保存。2、復蘇原理復蘇時融解細胞速度要快，使之迅速通過細胞最易受損的 -50

18、 度，這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損害，以防止細胞內形成冰晶引起細胞死亡。3、細胞復蘇的過程將恒溫水浴箱的溫度調至3740 C。從液氮中取出凍存小管，立即投入3740 c溫水中快速晃動，直至凍存液完全融解。要在 12min內完成復溫。將細胞凍存懸液移入離心管，加入約 5m1培養液，輕輕吹勻。將細胞懸液經 8001000 r/min 離心5min。棄上清液。給細胞沉淀物加入完全培養液，輕輕吹吸均勻。將細胞懸液移入培養瓶內，加培養液37 C、5%CO2培養。4、細胞活性檢查1. 染色法：使損傷或死亡細胞著色。結晶紫、臺盼藍、苯

19、胺黑等。2.四嚏鹽（MTT）比色法：活細胞可沉淀四嚏鹽并形成藍紫色結晶，再用 DMSO溶解結晶物，溶液顏色的深淺與所含的甲躦量成正比。用酶標儀在 5 7 0nm 波長處測定其吸光度OD 值，可間接反映活細胞數。第三章1、原代細胞培養常用組織塊培養法和消化培養法。2、組織塊培養法定義：組織塊培養是即將組織剪切成小塊后，接種于培養瓶培養的方法。基本方法：將剪成的小組織團塊接種于培養瓶（或皿）中，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。特點：操作簡便，組織塊易損傷，細胞生長緩慢，適于組織量少的原代培養。基本過程：取材修剪沖洗；剪成 1mm3左右的小塊；移入培養瓶；

20、間距 5mm分布組織小塊；翻轉培養瓶37 c靜止2-4h ;翻正培養瓶培養；原代細胞培養。3、消化培養法定義：利用組織消化分散法將細胞間質物質去除，使細胞分散，形成懸液培養的方法。特點：容易獲得大量細胞，生長速度快，適于培養大量組織，但步驟繁瑣，易污染，實驗費用高。過程：消化分離法消化細胞、鏡檢；發現組織已分散成細胞團或單個細胞，終止消化，篩網過濾，大塊繼續消化；過濾的消化液，低速離心，加培養液，細胞計數后，接入培養瓶。4、原代取材的基本要求（ 1）無菌取材：嚴格無菌操作。（ 2）取材器械鋒利：防止機械損傷。（ 3）及時培養：可培養液4暫存。（ 4）去除無用組織，避免干燥。（ 5）營養豐富：添

21、加10% 血清。（ 6）采用易培養組織：組織類型、分化程度、年齡等。（ 7）作好記錄：來源等信息及標本要保留。5、組織材料的分離1） 細胞懸液的分離方法來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，可采用離心法分離。一般采用50001000r/min 的低速離心510 分鐘。2）組織材料的分離方法 可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。1. 機械分散法方法 : 注射針芯擠壓法。 特點 : 簡便、快速, 但對組織機械損傷大，而且細胞分散效果差 , 適用于處理纖維成分少的軟組織。2. 剪切分散法利用剪切法將組織剪切成 1 平方毫米的小塊。3. 消化分離法定義：消化法是結合生化和化學手段把已剪切成較小體

22、積的組織進一步分散的方法。 種類：胰蛋白酶法、膠原酶法、 EDTA 法。6、應用體外培養技術進行中瘤研究具有的優點1，可以免受機體內部因素的影響，從而便于研究理化和生物等因素對腫瘤細胞生命的影響2 、便與研究腫瘤細胞的結構和功能3 、腫瘤細胞可長期保存以便觀察其遺傳行為的變化4、可用抗癌藥物的快速篩選7、腫瘤細胞培養生物學特性：永生性、侵襲性，不受控增殖性，遺傳性質改變，異質性、成瘤性。第四章動物細胞大規模培養技術：指在人工條件下，在細胞生物反應器中高密度大量培養動物細胞用于生產生物制品的技術微載體：微載體指直徑在60250微米，能適用于細胞貼壁培養的微珠，一般由葡聚糖或各種合成聚合物組成。中

23、空纖維培養技術：模擬細胞在體內生長的三維狀態，利用中空纖維給培養細胞提供物質代謝條件而建立的一種大規模培養方法微囊化培養是指在無菌條件下將擬培養的細胞、生物活性物質以及生長介質共同包裹在薄的半透膜中形成微囊，再將微囊放入培養系統內進行培養的方法。1、動物細胞大規模培養的方法1. 貼壁培養 2. 固定化培養3. 懸浮培養（一）貼壁培養定義：指細胞貼附在一定的固相表面進行的培養方式。優點：適用細胞種類多；容易采用灌流培養；容易更換培養液。缺點：操作比較復雜，需要合適的貼附材料和足夠的面積，培養條件不易均一，傳質和傳氧較差，投資大。培養方式：旋轉瓶培養、中空纖維培養、細胞工廠培養、微載體培養。（二）

24、固定化培養定義：將動物細胞與水不溶性載體結合起來進行培養的方式。優點：既適用于貼壁依賴性細胞，又適用于非貼壁依賴性細胞的包埋培養，細胞密度高，抗剪切力和抗污染力強，易于分離純化。方法：吸附法、包埋法、微囊法（三）懸浮培養定義：指細胞在生物反應器中自由懸浮生長的培養方法。優點：操作簡單、培養條件均一、傳質和傳氧比較好，容易擴大培養規模，可借鑒細菌發酵的經驗缺點：體積小，較難采用灌流培養。常用反應器為攪拌式和氣升式。2、微載體的選擇有何要求微載體表面性質與細胞有良好的相容性，適用細胞附著、伸展和增殖；微載體無毒、惰性，不與培養基成分發生化學變化，也不會吸收培養基中的營養成分；微載體白比重在1.03

25、01.045g/ml ,使載體在低速攪拌下就可懸浮，而在靜止時又可很快沉降，便于換液和 收獲；粒彳在60250刈（溶脹后）之間，均一，差異不大于20 m。有利于細胞均勻分布在各微載體表面；具有良好的光學透明性，利于觀察細胞在載體上的生長情況；可耐120 c高溫，便于采用高壓蒸汽滅菌；原料充足，價廉，制備簡便，經簡單的適當處理后，可反復多次地使用。3、微載體培養的操作包括哪些步驟培養初期階段;粘附貼壁階段;維持培養階段;細胞收獲階段；微載體培養放大階段4、大規模培養技術的應用<1、辦小物正不支lYi 牙I ：人寸空八些美 那I + Jg 受學誼i'i'i、將t什沙交rrc弋

26、不t 洶，喀的打球位內i = /卜蝌 *百占 一 人/。理#口j r央造 t'/r 一 乂 3。珀 4 一 4盤ALXS /門一 1/0. 31: £位 M = QM 仃 Hi皿自的Mr 1*111/ ZiSI . Illi fiMhMJ必 I7一 r第一I *-tj- JjM /代辦 上KJfflt內打一 人I J卷 出，性九則&曰一 Jiw IVjifFiJ 一 打，JC式1一g/ F 制 I 門王 / I fVjMM 科/P；方4 - i'f VJZ I* ItV/ -IH / ALL %.片51 咯 J 不.4 FS MfcjK如切雅J四曲k *卬IJ

27、MUH ”比 多一 口述聞h*M#一 川K X . - 4AL n H JtJt 111 X. J oe. <TG “ f5、微囊化培養中微囊的制備應注意哪些問題1）溫和、快速、不損傷細胞，盡量在液體和生理條件下操作2）所用試劑和膜材料對細胞無毒害3）膜的孔徑可控制，必須使營養物和代謝物自由通過4）膜應有足夠機械強度抵抗培養中的攪拌。6、理想的動物細胞生物反應器應滿足哪些基本要求？使比較教材所介紹的幾種生物反應器各自優缺點能提供充足氧氣；良好的傳質傳熱及密閉性能；制備材料對細胞無毒；有自動檢測調控系統；便于操作維護。1、攪拌式細胞生物反應器優點：避免向培養基直接通氣時氣泡損傷細胞，沒有移

28、動部件，密封好，氧轉換率較高，便于放大。缺點：氧傳遞系數小，氣路系統不能就地滅菌。2、氣升式動物細胞培養反應器 優點：器內氣流溫和均勻剪切力小，完全密封，便于無菌操作，氧的轉換率高，便于放大生產缺點：1）這種生物反應器只能用于需要氣體的反應，或者是需要有氣體的場合2）在培養細胞的過程中會產生大量的氣泡，從而會對正在培養的細胞的生長產生影響3）這種生物反應器，如果沒有其他裝置的幫助就只能培養懸浮生長的細胞。3、中空纖維細胞培養反應器優點1）培養器體積小，細胞高細胞損害小；2）濃縮產品；3）易于分離產物，產物純度高，不易污染；4）自動化程度高，細胞生長周期長。缺點:細胞生長速度慢，代謝物容易堵塞孔

29、徑，不易清洗維護，價格高第五章抗原上可以引起機體產生抗體的分子結構，叫做抗原決定簇。抗體：是指機體受抗原刺激后產生的能與相應抗原特異性結合具有免疫功能的球蛋白。單克隆抗體：即單個 B淋巴細胞克隆所分泌的抗體。是將抗體產生細胞與具有無限增殖能力的骨髓瘤細胞相融合，通過有限稀釋法及克隆化使雜交瘤細胞成為純一的單克隆細胞系而產生的。多克隆抗體：一個抗原上可以有好幾個不同的抗原決定簇，進入機體后會刺激好幾中B細胞增殖，因而使機體產生幾種不同的抗體，成為多克隆抗體基因轉染技術：將外源性基因采用化學或物理的方法人工導入細胞的技術。主要用于癌基因研究。1、什么是單克隆抗體？其特性和局限性如何？與多克隆抗體有

30、何異同？單克隆抗體是由一種 B細胞克隆所產生的只針對某一特定抗原決定簇的抗體分子。局限性：固有的親和性和局限的生物活性限制了它的應用范圍；反應強度不如多克隆抗體；制備技術復雜，費 時費工，價格較高。特性：理化性狀高度均一、生物活性單一、與抗原結合的特異性強，便于人為處理和質量控制不同：單克隆抗體的特異性強，只針對單一的抗原表位；而多克隆抗體則可以與多個抗原表位結合，當抗原的某個抗原表位改變時，單抗不能發揮其作用2、簡述單克隆抗體的制備流程和應用。應用：1）用于疾病的診斷和治療：2）作為載體制備導向藥物。3、骨髓瘤細胞和脾細胞融合過程中應特別注意的幾個問題是什么1）細胞比例2）反應時間3）反應溫

31、度4） PEG的選擇4、雜交瘤技術制備單克隆抗體的基本原理1）要制備單克隆抗體需先獲得能合成專一性抗體的單克隆B淋巴細胞,但B淋巴細胞不能在體外生長。2）而骨髓瘤細胞可在體外生長繁殖，應用細胞雜交技術使骨髓瘤細胞與免疫的淋巴細胞融合,得到雜種骨髓瘤 細胞。3）雜種細胞既具有B淋巴細胞合成專一抗體的特性，也有骨髓瘤細胞能在體外培養增殖永存的特性，用這種來源于單個融合細胞培養增殖的細胞群，可制備抗一種抗原決定簇的特異單克隆抗體。與多抗相比，單抗純度高，專一性強、重復性好、且能持續地無限量供應。5、HAT篩選雜交瘤細胞原理細胞融合時加入HAT （H為次黃嗯吟、A為氨基喋吟、T為胸腺喀咤）選擇系統，目

32、的是保證只有雜交瘤細胞的 生長。HAT培養基是含有由次黃嗯吟（H）、氨基喋吟（A）、胸腺喀咤（T）、的一種選擇性培養基，這三種成分與細 胞DNA合成有關。A可阻斷細胞利用正常途徑合成 DNA,細胞在含有氨基碟吟的培養基中不能通過正常途徑合 成DNA。這時正常細胞可以通過“補救合成途徑 ”，由胸腺喀咤激酶（HK）和次黃嗯吟磷酸核糖轉移酶（HGPRT）利用T和H合成核酸而繁殖。骨髓瘤細胞都是HGPRT缺乏株，不能利用 H和T合成DNA,而B細胞中有這種酶，但在體外培養只存活57天，所以只有脾-瘤才能在HAT選擇培養基上生長。6、酶聯免疫吸附法(ELISA)原理ELISA的基礎是抗原或抗體的固相化及

33、抗原或抗體的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。第六章外植體：用于植物組織(細胞)培養的器官或組織(的切段)。愈傷組織：在人工培養基上，由外植體的表面形成的一團不定形的排列疏松的薄壁細胞。細胞全能性：植物的每個細胞都攜帶一整套遺傳信息，具有發育成完整植株的潛力。脫分化：已經分化的細胞、組織、器官在人工培養的條件下又變成未分化的細胞和組織的過程。再分化：通過脫分化誘導形成的愈傷組織在適宜的培養條件下可再分化為胚狀體或直接分化出器官。植物細胞培養：在離體條件下將易分散的植物組織或植物的愈傷組織置于液體培養基中，將組織振蕩分散成游 離的懸浮細胞(單個細胞)，通過繼代培養使細胞增殖來獲得大量細胞群體的方法。1、植物組織與細胞培養的區別與聯系培養對象不同植物組織培養包括植物器官和組織如根、莖、葉、花、果實、種子等。動物細胞培養包括各種單細胞、單倍體細胞、原生質體、小細胞團、固定化細胞等。愈傷組織培養既屬于組織培養又屬于細胞培養。培養目的不同組織培養：獲得植物組織和再生成植株，或利用發狀根培養生產某些次級代謝物。主