1、二維三七桂利嗪膠囊對急性腦缺血的愛惜作用肖湘華，鄧秀玲，王燕，劉俊田，王竹筠【關鍵詞】急性腦缺血摘要：目的觀看二維三七桂利嗪膠囊關于急性腦缺血的阻 礙。方式ICR小鼠別離用4201n方kg、210mg/kg 105mg/kg的二維三 七桂利嗪膠囊灌胃10d,觀看斷頭后小鼠的喘息時刻；SD大鼠別離用 292mg/kg、146mg/kg、73mg/kg的二維三七桂利嗪膠囊灌胃10d,線栓 法制備大鼠大腦中動脈栓塞模型，然后進行神經行為指標評分、腦梗 死范圍測定和病理學觀看。結果二維三七桂利嗪膠囊各劑量組均能延 長小鼠斷頭后的喘息時刻，縮小局灶性腦缺血大鼠腦梗死范圍，改善 神經病癥，減輕光鏡下腦組織

2、缺血性損傷。結論二維三七桂利嗪膠囊 對急性腦缺血損傷具有愛惜作用。關鍵詞：二維三七桂利嗪膠囊；急性腦缺血；神經愛惜作用ABSTRACT: Objective To investigate the effects of divitamins notonginseng and cinnarizine capsule(DNCC) on acute cerebral ischemia. Methods ICR mice were administered threedoses of DXCC (420, 210, and 105mg/kg; ig.) for ten days, then the ga

3、sping time after decapitation was recorded. After three doses of DNCC(292,146, and 73mg/kg; ig.) were givenrespectively for ten days in rats, the effects of DNCC on the infarct size, histological changes and neurological function scores caused by focal cerebral ischemia which was induced by middle c

4、erebral artery occlusion were investigated. Results DNCC prolonged the gasping time of mice after decapitation and improved the neurological function scores, cerebral ischemia injury and decreased the infarct size in rats. Conclusion DNCC has a protective effect against acute cerebral ischemia.KEY W

5、ORDS: divitamins notonginseng and cinnarizine capsule; acute cerebral ischemia; neuroprotective effect 二維三七桂利嗪膠囊(divitamins notonginseng and cinnarizine capsule, DNCC)是由桂利嗪、三七總皂甘、維生素E和 維生素B6組成的中西藥復方制劑，臨床要緊用于醫治缺血性腦血管 病。實驗證明鈣通道阻滯劑能對抗缺血后腦內的低氧高糖狀態，縮小 腦梗死范圍。三七總皂苜能減少大腦中動脈栓塞(middle cerebral artery occlusio

6、n, MCAO)術后24h腦梗死范圍，改善神經功能障礙及 行為異樣，減輕腦水腫，明顯提高SOD活力，減輕腦梗死區的炎癥反 映。維生素E能提高缺血后機體的抗氧化能力，縮小腦梗死范圍。但 以上述成份組成的藥物一一DNCC關于腦缺血的阻礙尚未見報導。咱們 選擇DXCC作為受試藥物，別離采納小鼠斷頭法和線栓法誘導大鼠MCAO 造成急性腦缺血模型，觀看DXCC關于急性腦缺血的阻礙。1材料與方式動物、藥品與試劑ICR小鼠，雌雄各半，體重18-22g； SD 大鼠，雄性，體重200-300g,均由西安交通大學醫學院實驗動物中心 提供。自然光周期飼養，大鼠術前8h禁食，自由飲水。二維三七桂利 嗪膠囊(DNCC

7、),批號為030608；單組份桂利嗪(cinnarizine),批號 030651；單組份參三七提取物(extracts of panax notoginseng, EPN), 內含三七總皂甘,批號030506,以上藥品均由麗珠集團麗寶生物化 學制藥提供。桂利嗪膠囊(cinnarizine capsule, CC),批號011001, 麗珠集團利民制藥廠生產。2, 3, 5三苯基氯化四氮哇(TTC),批號F, 中國醫藥集團上海化學試劑公司生產。水合三氯乙醛，批號000530, 北京市旭東化工廠生產。儀器GPS型雙極電凝器，上海醫用激光儀器廠生產；FA1004型電子天平，上海周密科學儀器生產；S

8、HHW21420型三用電熱恒溫水 浴箱，天津泰斯特儀器生產。對小鼠腦缺血后存活時刻的阻礙ICR小鼠隨機分為11組， 每組13或14只，別離為陰性對照組(control),陽性對照組(CC 390mg/kg),大、中、小劑量 DNCC 組(DNCC 420mg/kg, 210mg/kg, 105mg/kg),與DNCC大、中、小劑量相當的三個劑量的單組份桂利嗪 組(cinnarizine 36mg/kg, 18mg/kg, 9mg/kg)和與 DNCC 大、中、小劑 量相當的三個劑量的單組份參三七提取物組(EPN 72mg/kg, 36mg/kg, 18mg/kg) o各組別離以蒸儲水、桂利嗪膠

9、囊(390mg/kg,相當于桂利嗪 原料藥kg)、大劑量(420mg/kg) 中劑量(210mg/kg)、小劑量(105mg/kg) 的DNCC、與DNCC大、中、小劑量相當的三個劑量的單組份桂利嗪(別 離為36mg/kg、18mg/kg、9mg/kg)及與DNCC大、中、小劑量相當的三 個劑量的單組份參三七提取物(別離為72mg/kg 36mg/kgx 18mg/kg) 灌胃，持續10d,于末次給藥后lh用剪子在小鼠耳后2mm處快速斷頭， 使頭落到預熱至37c的水浴箱上，記錄張口喘息的維持時刻。大鼠分組及腦缺血模型的制作SD大鼠隨機分為假手術組 (sham)、模型對照組(model cont

10、rol)、陽性對照組(CC 270mg/kg,相 當于原料藥kg)、DNCC大劑量組(DNCC 292mg/kg,含桂利嗪原料藥 25mg/kg) 中劑量組(DNCC 146mg/kg)、小劑量組(DNCC 73mg/kg)及與 DNCC大劑量相當的單組份桂利嗪組(cinnarizine 25mg/kg)，每組8T3只動物。持續灌胃10d,于末次給藥后lh參考Longa等成立的方式，腹腔注射水合三氯乙醛kg)麻醉大鼠，分離頸部各動脈，將頭端滑膩 呈鼓錘狀的4-0單絲尼龍線由左頸總動脈緩慢插入左頸內動脈顱內 段，線栓插入深度由頸內動脈起始處算起約18-22mm,稍感阻力即止。 假手術組將線栓插入

11、翼腭動脈。模型成功的標志為：動物清醒后顯現 以右前肢為主的偏癱。術后未顯現神經功能缺失體征或24h內死亡者 剔除。神經行為指標評分大鼠于術后8h進行神經行為學評分: 提鼠尾離地面約一尺，觀看前肢情形。正常大鼠兩前肢對稱地伸向地 面。有右肩內旋，右前肢內收者，評為4分。不然0分。將大鼠置 滑膩地面上，別離推左（或右）肩向對側移動，檢查抗擊推力的阻力。 正常大鼠雙側阻力明顯對稱。左肩向右邊移動時，發覺阻力下降者， 依照下降的程度不同，評為0-3分。將大鼠兩前肢置一金屬網上， 觀看兩前肢的肌張力。正常大鼠兩前肢肌張力明顯對稱。發生右前肢 肌張力下降者，依照下降的輕重，評為0-3分。依照以上評分標準，

12、 總分值為10分，分數越高說明其神經行為障礙就越嚴峻。腦梗死范圍的測定于術后24h處死大鼠開顱取腦，將新鮮 全腦冠狀切面等分為6片，于37水浴中10g/L的TTC磷酸緩沖液染 色20min后，用FA1004型電子天平稱其質量，計算腦梗死范圍。腦梗 死范圍=（梗死區重量/全腦重量）X 100%腦組織病理檢查于MCAO 24h處死大鼠開顱取腦，用200mL/L甲醛將標本固定，將大腦冠狀切面等分為6片，取第三腦片梗死側石蠟包埋，切片,HE染色，光學顯微鏡下觀看病理改變。統計學處置采納組間比較t查驗。2結果DXCC對小鼠斷頭后喘息時刻的阻礙陽性對照組、DCC大、 中、小劑量組和同DNCC大、中、小劑量

13、相當的三個劑量的單組份桂利 嗪組都可不同程度的延長小鼠斷頭后喘息時刻，與陰性對照組比較有 顯著性不同。復方大、中、小劑量相當的三個劑量的單組份參三七提 取物與陰性對照組比較無明顯不同（表1）。表1 DNCC對小鼠斷頭后喘 息時刻的阻礙（略）DXCC對局灶性腦缺血的阻礙桂利嗪膠囊和大、中、小劑量 的DXCC都可明顯縮小局灶性腦缺血大鼠腦梗死范圍、改善神經病癥, 與模型對照組比較有顯著性不同。而同大劑量DNCC含等量桂利嗪原料 藥的單組份桂利嗪組相較，其梗死范圍和行為指標評分雖小于模型對 照組，但無顯著性不同。桂利嗪膠囊組和DNCC大、中、小劑量組有降 低局灶性腦缺血大鼠死亡率的趨勢，但與模型對照

14、組比較無顯著性不 同。DNCC各劑量組與桂利嗪膠囊組及單組分桂利嗪組相較無顯著性不 同（表2）。表2 DNCC對大鼠局灶性腦缺血的阻礙（略）DNCC對局灶性腦缺血大鼠腦組織病理改變的阻礙假手術 組光鏡下組織結構完整，神經細胞膜及核膜清楚，核仁明顯（圖A）o 模型對照組可見神經細胞排列紊亂，神經元數量明顯減少，細胞周圍 間隙增大，可見大小不等的空泡，細胞退行性變明顯，細胞核深染、 固縮，間質明顯水腫（圖B）。桂利嗪膠囊組和大劑量DNCC組絕大部份 神經元結構清楚，未見明顯病變（圖C、D）o中劑量和小劑量DNCC組 神經元數量略有減少，部份神經元有退行性變，間質有水腫，但明顯 輕于模型對照組（圖E

15、、F）o單組份桂利嗪組神經元退行性變較明顯， 細胞周圍間隙擴大（圖G）o圖1 DNCC對局灶性腦缺血大鼠腦組織的阻 礙（略）3討論小鼠斷頭后，腦供血中斷，腦組織內貯存必然能量，可使斷 頭小鼠維持一段時刻的張口喘息，能量耗竭，活動便停止。該模型簡 單易行，是挑選抗腦缺血藥物的一種簡易方式。本實驗觀看到陽性對 照藥桂利嗪膠囊和DNCC都可延長小鼠斷頭后的喘息時刻，提示DNCC 關于缺血性腦損傷有必然的愛惜作用。單組份桂利嗪組同陰性對照組 相較，在統計學上有顯著性不同，而單組份參三七提取物那么無此作 用，提示單組份桂利嗪可能為該復方制劑起效的要緊成份。腦缺血發 生以后，腦組織血供減少或中斷，腦能量代

16、謝發生障礙。由于底物的 缺乏和pH的降低致使線粒體內電子轉運鏈的活動停止，從而ATP含量 迅速下降，使Na+, K+ATP酶功能障礙，細胞內的Na+含量上升，使得 細胞鈉、水潴留，致使細胞水腫。另外由于缺血損傷造成血腦屏障的 破壞，致使細胞周圍間隙的液體增加，進一步加重細胞水腫。缺血嚴 峻的組織由于能量供給的缺乏而產生梗死。TTC作為一種水溶性鹽， 能夠同活細胞中線粒體內的琥珀酸脫氫酶反映，使活組織染為深紅色, 而梗死組織那么不染色，故TTC染色是一種簡單易行的反映腦組織梗 死狀態的方式。腦組織缺血性損傷引發神經功能障礙，而神經行為學 評分是一種量化神經功能障礙的評定方式，因此其不僅可作為評判

17、模 型成立成功與否的標準，而且能夠反映缺血損傷的病理生理學的進程。 本實驗發覺DNCC各給藥組和桂利嗪膠囊組都可不同程度的減少缺血 引發的細胞水腫，縮小腦梗死范圍，改善神經行為學評分，說明DNCC 關于局灶性腦缺血損傷具有愛惜作用。而單組份桂利嗪組同模型組相 較無顯著性不同，與小鼠斷頭實驗的結果相反，這可能是由于小鼠斷 頭實驗是一個生理條件下的藥物挑選實驗，而大鼠MCAO那么是在病理 條件下觀看藥物的抗腦缺血作用，故推測僅靠大劑量的DNCC所含的桂 利嗪成份不足以對抗腦缺血損傷。考慮到DNCC含有的其他兩種成份比 例較小，難以單獨對抗缺血性腦損傷，故推測DNCC的抗腦缺血損傷作 用可能是各組份

18、一起作用的結果。綜上所述，咱們以為DNCC能改善急性腦缺血神經元的損傷,增加細胞的穩固性及存活能力,對局灶性腦缺血損傷具有愛惜作用。但 其抗腦缺血損傷的機理尚待進一步研究證明。參考文獻:lONeillMJ, Hicks CA, Ward MA, et al. LY393615, a novel neuronal Ca2+ and Na+ channel blocker with neuroprotective effects in models of in vitro and in vivo cerebral ischemia . Brain Res, 2001, 888 (1) : 138149.2史以菊，吳俊芳，夏作理，等.三七總皂式對大鼠局灶性 腦缺血的愛惜作用.中國臨床藥理學與醫治學，1999,4(4):272275.3何蔚，朱遵平.三七總皂甘對大鼠腦梗死區ICAM1表達和 中性粒細胞浸潤的阻礙.中藥材，2005, 28(5):403405.4Zhang B, Tanaka J, Yang L, et al. Protective effect of vitamin E against focal brain ischemia and neuronal death through induction