1、脂質體的制備方法及其研究進展穆筱梅，梁世強 【摘要】介紹了目前常用脂質體的兩大類制備方法：被動載藥法和主動載藥法，并對其優缺點進行比擬。被動載藥法適于脂溶性強的藥物，包封率高且不易泄露；而主動載藥法適于兩親性藥物。 【關鍵詞】 脂質體；被動載藥；主動載藥脂質體作為藥物載體具有提高藥物療效、減輕藥物不良反響及靶向作用的特點。三十多年來，人們就 其制備方法進行了大量的研究。脂質體是由磷脂分子在水相中通過疏水作用形成的，因此制備脂質體所強 調的不是膜組裝，而是如何形成適當大小、包封率高和穩定性高的囊泡。制備的方法不同，脂質體的粒徑 可從幾十納米到幾微米，并且結構也不盡相同。目前，制備脂質體的方法較多

2、，常用的有薄膜法、反相蒸 發法、溶劑注入法和復乳法等，這些方法一般稱為被動載藥法，而pH梯度法，硫酸俊梯度法一般被稱為主動載藥法。1被動載藥法脂質體常用制備方法主要有薄膜分散法、反相蒸發法、注入法、超聲波分散等。在制備含藥脂質體時， 首先將藥物溶于水相或有機相中，然后按適宜的方法制備含藥脂質體，該法適于脂溶性強的藥物，所得脂 質體具有較高包封率。1.1薄膜分散法此法最初由Bangham等報道，是最原始但又是迄今為止最根本和應用最廣泛的脂質體的制備方法。 將磷脂和膽固醇等類脂及脂溶性藥物溶于有機溶劑，然后將此溶液置于一大的圓底燒瓶中，再旋轉減壓蒸 干，磷脂在燒瓶內壁上會形成一層很薄的膜，然后參加

3、一定量的緩沖溶液，充分振蕩燒瓶使脂質膜水化脫 落，即可得到脂質體。這種方法對水溶性藥物可獲得較高的包封率，但是脂質體粒徑在0.25 m之間，可通過超聲波儀處理或者通過擠壓使脂質體通過固定粒徑的聚碳酸酯膜，在一定程度上降低脂質體的粒 徑。1.2超聲分散法將磷脂、膽固醇和待包封藥物一起溶解于有機溶劑中，混合均勻后旋轉蒸發去除有機溶劑，將剩下的 溶液再經超聲波處理，別離即得脂質體。超聲波法可分為兩種水浴超聲波法和探針超聲波法，本法是制備小脂質體的常用方法，但是超聲波易引起藥物的降解問題。1.3冷凍枯燥法 脂質體混懸液在貯存期間易發生聚集、融合及藥物滲漏，且磷脂易氧化、水解，難以滿足藥物制劑穩 定性的

4、要求。1978年Vanleberghe等首次報道采用冷凍枯燥法提高脂質體的貯存穩定性。目前，該法已成為較有前途的改善脂質體制劑長期穩定性的方法之一。脂質體冷凍枯燥包括預凍、初步枯燥及二次枯燥3個過程。凍干脂質體可直接作為固體劑型，如噴霧劑使用，也可用水或其它溶劑化重建成脂質體混懸液使用，但預凍、枯燥和復水等過程均不利于脂質體 結構和功能的穩定。如在凍干前參加適宜的凍干保護劑，采用適當的工藝，那么可大大減輕甚至消除凍干過 程對脂質體的破壞，復水后脂質體的形態、粒徑及包封率等均無顯著變化。單糖、二糖、寡聚糖、多糖、 多元醇及其他水溶性高分子物質都可以用做脂質體凍干保護劑，其中二糖是研究最多也是最有

5、效的，常用 的有海藻糖、麥芽糖、蔗糖及乳糖。本法適于熱敏型藥物前體脂質體的制備，但本錢較高。陳建明等1以大豆磷脂為膜材，以甘露醇為凍干保護劑，采用凍干法制備了維生素A前體脂質體，復水化后平均粒徑為0.615 1 m包封率98.5%。林中方等2采用凍干法制備了鬼臼毒素體脂質體，復水化后平均粒徑 為1.451 m,包封率72.3%,但是這種方法仍然存在著缺乏之處，例如脂質體復水化后粒徑分布不夠均 勻。1.4凍融法此法首先制備包封有藥物的脂質體，然后冷凍。在快速冷凍過程中，由于冰晶的形成，使形成的脂質 體膜破裂，冰晶的片層與破碎的膜同時存在，此狀態不穩定，在緩慢融化過程中，暴露出的脂膜互相融合 重新

6、形成脂質體。何文等3分別用反相蒸發法、乳化法和凍融法制備了甲氧沙林脂質體。通過研究發 現，凍融法制備的脂質體的包封率最高，但是粒徑最大。反復凍融可以提高脂質體的包封率，王健松:4制備了阿奇霉素脂質體，實驗發現，經3次重復凍融后，阿奇霉素脂質體的包封率從61.4%增加到78%,但是當凍融次數增加到4次，包封率變化很小。該制備方法適于較大量的生產，尤其對不穩定的藥物最適 合。1.5復乳法此法第1步將磷脂溶于有機溶劑，參加待包封藥物的溶液，孚L化得到W/O初乳，第2步將初乳參加到10倍體積的水中混合，孚L化得到W/O/W乳液，然后在一定溫度下去除有機溶劑即可得到脂質體。Kim5用乳化法制得脂質體的包

7、封率比擬高，但是粒徑較大。Tomoko等6通過研究發現，第2步乳化 過程和有機溶劑的去除過程的溫度對脂質體的粒徑有比擬大的影響，較低的溫度有利于減小脂質體的粒 徑，通過控制溫度可以制得粒徑為400 nm,包封率到達90%的脂質體。1.6注入法將類脂質和脂溶性藥物溶于有機溶劑中油相，然后把油相均速注射到水相含水溶性藥物中， 攪拌揮盡有機溶劑，再乳勻或超聲得到脂質體。根據溶劑的不同可分為乙醇注入法和乙酰注入法。乙醇注入法防止了使用有機溶劑，丁麗燕5用乙醇法制備了司帕沙星脂質體，通過研究發現慢速注入可制得具有較高包封率的脂質體，其包封率為47%。乙酰注入法制備的脂質體大多為單室脂質體，粒徑絕大多數在

8、2以下，操作過程中溫度比擬低40C,因此，該方法適用于在乙酰中有較好溶解度和對熱不穩定藥物，同時通過調節乙酰中不同磷脂 的濃度，可以得到不同粒徑且粒徑分布均勻的脂質體混懸液8。1.7反相蒸發法最初由Szoka提出，一般的制法是將磷脂等膜材溶于有機溶劑中，短時超聲振蕩，直至形成穩定的W/O乳液，然后減壓蒸發除掉有機溶劑，到達膠態后，滴加緩沖液，旋轉蒸發使器壁上的凝膠脫落，然后 在減壓下繼續蒸發，制得水性混懸液，除去未包入的藥物，即得大單層脂質體脂質體。此法可包裹較大的 水容積，一般適用于包封水溶性藥物、大分子生物活性物質等。1.8超臨界法傳統的脂質體制備方法，必須要使用氯仿，乙酰、甲醇等有機溶劑

9、，這對環境和人體都是有害的。超 臨界二氧化碳是一種無毒、惰性且對環境無害的反響介質。嚴賓等9用超臨界法制備了頭抱哩林鈉脂質體，將一定量的卵磷脂溶解于乙醇中配得卵磷酯乙醇溶液，與頭抱哩琳鈉溶液一起放入參加高壓釜中， 將高壓釜放入恒溫水浴中，通入CO2。在其超臨界態下孵化30min,制備脂質體。采用超臨界CO2法制備的包封率高、粒徑小，穩定性增強。2主動載藥對于兩親性藥物，如某些弱酸弱堿，其油水分配系數介質pH和離子強度的影響較大，用被動載藥法制得的脂質體包封率低。主動載藥是利用兩親性的藥物，能以電中性的形式跨越脂質雙層，但其電離形式卻不能跨越的原理來 實現的。通過形成脂質體膜內、外水相的pH梯度

10、差異，使脂質體外水相的藥物自發地向脂質體內部聚集。此法通常用脂質體包封酸性緩沖鹽，然后用堿把外水相調成中性，建立脂質體內外的pH梯度。藥物在外水相的pH環境下以親脂性的中性形式存在，能夠透過脂質體雙層膜。而在脂質體內水相中藥物被質 子化轉為離子形式，不能再通過脂質體雙層回到外水相，因而被包封在脂質體中。主動載藥法廣義上就是 指pH梯度法。人們把其細分為：1pH梯度法；2硫酸俊梯度法；3醋酸鈣梯度法。其中硫酸 俊梯度法和醋酸鈣梯度法只是pH梯度法的兩種特殊形式。2.1 pH梯度法pH梯度法通過調節脂質體內外水相的pH值，形成一定的pH梯度差，弱酸或弱堿藥物那么順著pH梯度，以分子形式跨越磷脂膜而

11、使以離子形式被包封在內水相中。趙妍等10用以pH梯度法制備硫酸長春新堿脂質體，其包封率大于85%,而被動載藥法制備的硫酸長春新堿脂質體的包封率最高為14.4%。Jia等11用pH梯度法內水相pH 0.5%外水相pH4.0制備了卡苯達哩脂質體，包封率高于95%。杜松等12用pH梯度法制備鹽酸去氫駱駝蓬堿脂質體，包封率大于80%,研究說明，雖然制得的脂質體沒有加強藥物的抗癌活性，但是大大降低了其毒副作用。跨膜pH梯度是影響包封率的最主要因素，通常pH梯度越大，載入脂質體內的藥物越多，包封率也越 高。制備伊立替康脂質體時13,當pH梯度A3.制包封率達97%以上，當pH梯度 V2時，包封率不到5%

12、; Mamyer等14在研究中發現通過跨膜pH梯度法制備多柔比星脂質體，pH梯度到達3.5時包封率達98%，降低內水相緩沖液的pH可增大pH梯度，但會加劇磷脂的水解，降低脂質體的穩定性。此外，藥物自身性質如油水分配系數、膜滲透性等亦可影響包封率。Quan等15用pH梯度法制備多巴胺脂質體， 由于多巴胺親水性較強， 無法直接克服能量壁壘穿過脂質雙分子層進入內水相， 但與拉沙 洛西(lasalocid)結合形成復合物可暴露出親脂性外表，即可穿過脂質膜進入脂質體，包封率提高到85%。氧化苦參堿水溶性較大，脂溶性較弱，因此采用pH梯度法制備脂質體包封率只有50% 16。2.2硫酸俊梯度法硫酸俊梯度法通

13、過游離氨擴散到脂質體外，間接形成pH梯度，使藥物積聚到脂質體內。其方法為先 將硫酸俊包與脂質體內水相，然后通過透析、凝膠色譜或超濾的方法除去脂質體外水相的硫酸俊。由于離 子對雙分子層滲透系數的不同，氨分子滲透系數(0.13 cm/s)較高，能很快擴散到外水相中；H+的滲透系數遠小于氨分子，因此會使脂質體內水相呈酸性，形成pH梯度，梯度大小由NH4+夕卜水相/ :NH4+ :內水相比擬決定，這樣使藥物逆硫酸俊梯度載入脂質體。藥物與SO42-形成的硫酸鹽，對雙分子層有很低滲透系數，因而使藥物具有很高的包封率。劉陶世等17采用硫酸俊梯度法制備馬錢子堿脂質體，0.1 mol/L硫酸俊水溶液的用量為大豆

14、卵磷脂的66.7倍，制得的馬錢子堿脂質體包封率在90%以上。米托恩醍以注入法或反相蒸發法制備的脂質體，包封率較低，但是其為弱堿性蕙醍類藥物，易與硫酸根離子形成溶解性更小的硫酸鹽，黃園】18用硫酸俊梯度法制備米托蕙醍脂質體的平均粒徑均在60 nm左右，包封率為93.65%。Pan等19用不同的主動載藥法制備了5種多俊硼酸鹽脂質體，得到較高的包封率僅為6%和15%。研究說明，用硫酸俊梯度法制備的脂質體包封率要高于枸椽酸鹽pH梯度法制得的脂質體。Wong等20用此法制備了環丙沙星單室脂質體，包封率為90%。相比擬于pH梯度法，硫酸俊梯度法不需要改變外水相的pH值，控制梯度也易實現，整個過程無需緩沖液

15、或pH滴定，內水相只有pH梯度法更有利于脂質體的穩定。2.3醋酸鈣梯度法醋酸鈣梯度法通過醋酸鈣的跨膜運動產生的醋酸鈣濃度梯度(內部的濃度高于外部)，使得大量質子 從脂質體內部轉運到外部產生pH梯度。醋酸的滲透參數(6.6 X0-4cm s-1)比Ca2+ (2.5 X0-11cm s-1)大7個數量級，所以很少穿越雙分子膜留在脂質體內部，醋酸分子那么參與了質子轉運。醋酸鈣跨膜運動產生 的濃度梯度(內部的濃度高于外部)導致大量質子從脂質體的內部轉運到外部產生pH梯度，而pH的不平衡為包載和聚集弱堿藥物提供了高效驅動力。因此，在這根底上應用醋酸鈣梯度法把弱酸藥物荼嚏酸包 載入預制備好的空白脂質體中

16、21,包封率約99%，在4C下存放10個月均穩定未見泄露。Hwang等22也用此法制備了雙氯芬酸鈉脂質體，包封率約100%，而傳統的逆相蒸發法只有1%8%。3結語脂質體作為一種新型的藥物傳遞系統正越來越被人們重視。評價脂質體質量的指標有外觀、粒徑分布和包封率等，其中包封率是衡量脂質體內在質量的一個重要指標。制備方法的不同，脂質體的粒徑、結構以 及包封率都不盡相同。 被動載藥法適于脂溶性的藥物， 包封率高且不易泄露。 而主動載藥法適于兩親性藥 物， 其包封率一般80%,開啟了制備高包封率水溶性藥物脂質體的新思路。【參考文獻】1陳建明，張仰眉，高申，等.維生素A前體脂質體的研制及其特性考察J.第二

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