1、巴比妥類藥物的分析第第 五五 章章巴比妥類藥物的分析巴比妥類藥物的分析巴比妥類藥物的分析 概述概述 理化性質理化性質 鑒別試驗鑒別試驗 特殊雜質檢查特殊雜質檢查 含量測定含量測定 巴比妥類藥物的分析 巴比妥類藥物是一類臨床常用的催眠鎮靜藥。由于這類藥物應用廣泛，容易因不合理使用而引起中毒。 本章重點介紹巴比妥類藥物的化學結構與分析方法間的關系，介紹鑒別、檢查和含量測定的原理與方法。巴比妥類藥物的分析一、巴比妥類藥物的基本結構通式一、巴比妥類藥物的基本結構通式 CCCONONC OR1R2R3543216HH丙二?；寤捅韧最愃幬锏姆治?,5-取代的巴比妥類藥物 CCCONONCOH5C2H5

2、C2HH巴比妥5CCCONONCOH5C2HH苯巴比妥巴比妥類藥物的分析CCCONONCONaCH2CHCH2CHCH3C3H7H司可巴比妥鈉硫噴妥鈉HCCCONONC SNaC2H5CH3CH2CH2CHCH3巴比妥類藥物的分析巴比妥類藥物的分析巴比妥類藥物的分析二、理化性質二、理化性質（一）物理性質（一）物理性質 1. 白色結晶或結晶性粉未，具有固定的熔點。 2. 游離巴比妥類藥物微溶或極微溶于水，易溶于乙醇及有機溶劑；其鈉鹽則易溶于水，而不溶于有機溶劑。 巴比妥類藥物的分析（二）化學性質（二）化學性質 巴比妥類藥物分子結構中都有1,3-二酰亞胺基團，能發生酮式和烯醇式的互變異構，在水溶液

3、中可以發生二級電離。因此，本類藥物的水溶液顯弱酸性（pKa為7.3-8.4），可與強堿形成水溶性的鹽類。 1. 1. 弱酸性弱酸性巴比妥類藥物的分析CCCONONCOHR1R2HCCCONONCOR1R2HHCCCONONCOR1R2HCCCONONCOR1R2+ H+ H+pK1=8+ H+ H+pK2=12巴比妥類藥物的分析與強堿的成鹽反應：與強堿的成鹽反應：CO N HCNCOO HR1R2+ N aOHCO NHCNCOONaR1R2+ H2O巴比妥類藥物的分析2. 2. 水解反應水解反應 巴比妥類藥物 +NaOHNH3+ 2Na2CO3COONaR1R2+2NH3 CONHCNCOO

4、HR1R2+ 5NaOH巴比妥類藥物的分析（1） 與銀鹽的反應 3 3、與重金屬離子的反應、與重金屬離子的反應巴比妥類藥物的分析C ONCNC OCR1R2O N aA g+N a H C O3N a N O3+C ON HCNC OCR1R2O N a + A gN O3+ N a2C O3N a N O3+C ONCNC OCR1R2OA gA gA gN O3+C ONCNC OCR1R2O N aA g巴比妥類藥物的分析（2）與銅鹽的反應 巴比妥類藥物 +紫色或紫色 銅吡啶試液吡啶硫噴妥鈉 +綠色銅吡啶試液吡啶巴比妥類藥物的分析CR1R2COCONHNHCO水吡啶CR1R2COCONN

5、HC OHCR1R2COCONNHCO-+H+部分離子化巴比妥類藥物的分析N+CuSO42NNCu2+SO42-CR1R2COCONNHC O-2+NNCu2+CR1R2COCONNHCOCR1R2COCONNHCOCuNN有色配位化合物有色配位化合物巴比妥類藥物的分析（3）與鈷鹽的反應紫堇色鈷鹽巴比妥類藥物堿性 無水無水; 所用試劑均應不含水分。所用試劑均應不含水分。反應條件：反應條件： 堿性：異丙胺堿性：異丙胺 巴比妥類藥物的分析CO NHCONHCOR1R22+Co2+4(CH3)2CHNH2+CoR2R1CONHCONCOR2R1NCONHCOCONHCH(CH3)2NHCH(CH3)

6、2(CH3)2CHN+H32巴比妥類藥物的分析（4）與汞鹽的反應4 4、 與香草醛（與香草醛（vanillinvanillin）的反應）的反應 巴比妥類藥物的分析5 5、 紫外吸收光譜特征紫外吸收光譜特征H2SO4溶液溶液(0.05mol/L)pH9.9緩沖溶液緩沖溶液NaOH溶液溶液(0.1mol/L) (pH 13)巴比妥類藥物的紫外吸收光譜巴比妥類藥物的紫外吸收光譜Anm巴比妥類藥物的分析硫噴妥的紫外吸收光譜硫噴妥的紫外吸收光譜HCl 溶液溶液 (0.1mol/L) NaOH 溶液溶液 (0.1mol/L) 巴比妥類藥物的分析巴比妥類藥物巴比妥類藥物 紫外吸收光譜特征和其電離的程度有關

7、5,5-取代的巴比妥類藥物 在pH=2的酸性溶液中，因不電離，幾乎無明顯的紫外吸收。 在pH=10的堿性溶液中，發生一級電離于240 nm處有最大吸收。 在pH=13的強堿性溶液中，發生二級電離，最大吸收紅移至255 nm處。巴比妥類藥物的分析硫代巴比妥類藥物硫代巴比妥類藥物 在酸性或堿性溶液中，均有較明顯的紫外吸收。 巴比妥類藥物的分析7 7、顯微結晶特征、顯微結晶特征 藥物本身的晶形巴比妥：長方形； 苯巴比妥：球形花瓣狀 反應產物的晶形巴比妥 銅吡啶試液 十字形紫色結晶苯巴比妥 銅吡啶試液 細小不規則或似菱形的淺紫色結晶6 6、薄層色譜行為特征、薄層色譜行為特征 對照品對照鑒別巴比妥類藥物

8、的分析 概述概述 鑒別試驗鑒別試驗 特殊雜質檢查特殊雜質檢查 含量測定含量測定 巴比妥類藥物的分析（1） 與銀鹽的反應、（二）銅鹽反應二、鑒別試驗二、鑒別試驗（一）、丙二酰脲類反應（二）熔點測定巴比妥類的鈉鹽酸 游離巴比妥類藥物 過濾 洗滌 干燥 測熔點苯巴比妥鈉的鑒別 取本品約0.5 g，加水5 ml溶解后，加稍過量稀鹽酸，即析出白色結晶性沉淀，濾過；沉淀用水洗凈，在105干燥后，依法測定，熔點為174-178。巴比妥類藥物的分析司可巴比妥可使溴試液或碘試液褪色不飽和烴取代基的反應 與溴試液或碘試液的反應 與KMnO4的反應可還原紫色的KMnO4為棕色的MnO2（三） 特殊取代基及元素的反應

9、巴比妥類藥物的分析 與NaNO2H2SO4反應 與甲醛H2SO4反應硝化反應芳香取代基的反應巴比妥類藥物的分析硫元素的反應硫元素的反應 （黑色）白色硫噴妥鈉PbS PbNaOH2巴比妥類藥物的分析（四）鈉鹽的鑒別反應1. 焰色反應 取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，火焰即顯鮮黃色2. 與醋酸氧鈾鋅反應 取供試品的中性溶液，加醋酸氧鈾鋅試液，即生成黃色（五）紅外分光光度法巴比妥類藥物的分析第三節第三節 特殊雜質檢查特殊雜質檢查一、苯巴比妥的特殊雜質檢查 酸度 乙醇溶液的澄清度 中性或堿性物質二、司可巴比妥鈉的特殊雜質檢查 溶液的澄清度 中性或堿性物質巴比妥類藥物的分析 概述概述

10、 鑒別試驗鑒別試驗 特殊雜質檢查特殊雜質檢查 含量測定含量測定 巴比妥類藥物的分析 終點指示：電位法指示（Ag電極為指示電極，飽和甘汞電極為參比電極） 自身指示 一一 銀量法銀量法1.原理：反應摩爾比（11）溶劑系統：甲醇+3%無水碳酸鈉第四節第四節 含量測定含量測定巴比妥類藥物的分析苯巴比妥： 取本品約0.2 g，精密稱定，加甲醇40 ml使溶解，再加新制的3無水碳酸鈉溶液15 m1，照電位滴定法，用硝酸銀滴定液（0.1 mol/L）滴定。每1 ml 硝酸銀滴定液（0.1 mo1/L）相當于23.22 mg的C12H12N2O3。 2. 測定方法與計算巴比妥類藥物的分析原料藥：直接滴定法 %

11、100smTVF百分含量3. 注意事項（1）無水碳酸鈉應新鮮配制（2）AgNO3滴定液應新鮮配制（3）銀電極使用前應進行處理巴比妥類藥物的分析 凡取代基中含有雙鍵的巴比妥類藥物，其不飽和鍵可與溴定量地發生加成反應，故可采用溴量法進行測定。如司可巴比妥鈉及其膠囊的測定二二 溴量法溴量法1. 原理巴比妥類藥物的分析I22Na2S2O32NaINa2S4O6KBrO35KBr6HCl3Br26KCl3H2O +Br2（定量過量）CO NHCNCOCHCH2CH2CH3(CH2)2CHCH3ONaCO NHCNCOCHCH2CH2CH3(CH2)2CHCH3ONaBrBrBr22KI2KBrI2巴比妥

12、類藥物的分析司可巴比妥鈉：司可巴比妥鈉： 取本品約0.1g，精密稱定，置250ml碘瓶中，加水10m1，振搖使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25ml，再加鹽酸5m1，立即密塞并振搖1min，在暗處靜置15min后，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液10m1，立即密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）滴定，至近終點時，加淀粉指示液，繼續滴定至藍色消失，并將滴定結果用空白試驗校正。每1ml溴滴定液（0.05mo1/L）相當于13.01mg的C12H17N2NaO3。2. 測定方法與計算巴比妥類藥物的分析原料藥：剩余滴定法 %1000smFVVT）（百分含量3. 注意事項（1）操作

13、中要防止溴和碘的逸失（2）平行條件進行空白試驗可減少溴和碘逸失帶來的誤差。巴比妥類藥物的分析1. 在水醇混合溶劑中的滴定法 弱酸性 pKa7.3-8.4 異戊巴比妥異戊巴比妥水水醇醇溶解溶解麝香草酚酞麝香草酚酞NaOHNaOH淡藍色淡藍色三三 酸堿滴定法酸堿滴定法此法終點判斷較困難巴比妥類藥物的分析 取本品約0.5 g，精密稱定，加乙醇20 m1溶解后，加麝香草酚酞指示液6滴，用氫氧化鈉滴定液（0.1 mo1/L）滴定，并將滴定結果用空白試驗校正，即得。每l ml氫氧化鈉滴定液（0.1 mol/L）相當于22.63 mg的C11H18N2O3。 異戊巴比妥的含量測定異戊巴比妥的含量測定 巴比妥

14、類藥物的分析 溶 劑：二甲基甲酰胺 滴定劑：甲醇鈉（鉀） 指示劑：麝香草酚藍 3. 非水溶液滴定法2. 在膠束水溶液中進行的滴定法溶 劑：表面活性劑-溴化十六烷基三甲基芐胺水溶液滴定劑：氫氧化鈉滴定液指示劑：麝香草酚肽 巴比妥類藥物的分析四 紫外分光光度法紫外分光光度法（一）直接紫外分光光度法（一）直接紫外分光光度法 本法是將樣品溶解后，根據溶液的pH值選用其相應的max處進行直接測定。巴比妥類藥物的分析1. 1. 吸收系數法吸收系數法2. 2. 標準曲線法標準曲線法 單組分定量方法：單組分定量方法：巴比妥類藥物的分析3. 3. 對照法對照法 lCElCEAA對%1cm1供%1cm1對供對供對

15、供AACC對供對供CCAA巴比妥類藥物的分析 取裝量差異項下的內容物，混合均勻，精密稱取適量（約相當于硫噴妥鈉0.25g），置500ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，量取此溶液用0.4%NaOH溶液定量稀釋制成每1ml中約含5g的溶液；另取硫噴妥對照品，精密稱定，加0.4%NaOH溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中約含5g的溶液。照分光光度法，在304nm的波長處分別測定A，根據每支的平均裝量計算。每1mg硫噴妥相當于1.091mg的C11H17N2NaO2S。 如注射用硫噴妥鈉的含量測定如注射用硫噴妥鈉的含量測定巴比妥類藥物的分析（三三）多組分混合物不經分離的定量方法）多組分混合物不經分離的定

16、量方法 計算分光光度法計算分光光度法雙波長分光光度法；差示分光光度法；導數光譜法 （二）經提取分離后的紫外分光光度法（二）經提取分離后的紫外分光光度法 干擾物質去除巴比妥類藥物的分析 取兩份相等的供試溶液，分別制成兩種不同的取兩份相等的供試溶液，分別制成兩種不同的化學環境（如在其一中加酸、堿或緩沖液改變溶液的化學環境（如在其一中加酸、堿或緩沖液改變溶液的pH，或在其一中加能與供試品發生某種化學反應的試，或在其一中加能與供試品發生某種化學反應的試劑），然后將兩者分別稀釋至同樣濃度，一份置樣品劑），然后將兩者分別稀釋至同樣濃度，一份置樣品池中，另一份置參比池中，于適當波長處，測其吸收池中，另一份置

17、參比池中，于適當波長處，測其吸收度的差值（度的差值（ A值）。值）。差示分光光度法（A法）1. 1. 測定方法測定方法 巴比妥類藥物的分析2. 2. 必要條件必要條件 （1）供試品在不同的化學環境中以不同的分子形式存在，它們的吸收光譜有顯著的差異。 （2）干擾物的吸收不受測定時化學環境的影響，光譜行為不變。 巴比妥類藥物的分析ClAAAAAAAAAyxyxzyzx)( )()(參比樣品 供試品在兩種不同的化學環境中分別以x、y 表示，干擾物用 z 表示3. 3. 定量依據定量依據CA 巴比妥類藥物的分析即，吸收度差值（即，吸收度差值（ A）僅與待測組分的濃度有）僅與待測組分的濃度有關，而與干擾

18、組分無關，即干擾組分的干擾被關，而與干擾組分無關，即干擾組分的干擾被消除。消除。 可用對照法或標準曲線法定量巴比妥類藥物的分析 保留了通常的分光光度法簡易快速、直接讀數的優保留了通常的分光光度法簡易快速、直接讀數的優點，又無需事先分離，并能消除干擾。點，又無需事先分離，并能消除干擾。4. 4. 特點特點5. 5. 應用應用（1 1）于波長）于波長240 nm240 nm處，測定處，測定pH10pH10和和pH2pH2兩種兩種溶液的吸收度之差溶液的吸收度之差（2 2）于波長）于波長260 nm260 nm處，測定處，測定pH10pH10和強堿溶液和強堿溶液的吸收度之差的吸收度之差巴比妥類藥物的分析HPLCHPLC法同時測定人血清中苯巴比妥、苯妥英和卡馬西平的濃度法同時測定人血清中苯巴比妥、苯妥英和卡馬西平的濃度色譜條件：色譜柱 AgilentZORBAX SB- C18柱( 250 4.6mm , 5m) , 流動相為甲醇 水 乙腈(45 45 10 ） 流速1.0m l/m in, 柱溫30, 檢測波長254nm。血樣處理：取內標溶液100L，60水浴氮氣吹干，加200L待測血清, 加