1、l艾滋病病毒的形態(tài)艾滋病病毒的形態(tài)v HIVHIV的逆轉(zhuǎn)錄酶缺乏的逆轉(zhuǎn)錄酶缺乏3 35 5核酸外切酶活性核酸外切酶活性 ，v 無法修復(fù)逆轉(zhuǎn)錄和復(fù)制過程中發(fā)生的錯誤無法修復(fù)逆轉(zhuǎn)錄和復(fù)制過程中發(fā)生的錯誤 。HIV生活周期生活周期吸附穿入脫殼生物合成組裝成熟和釋放吸附穿入脫殼生物合成組裝成熟和釋放HIV-1HIV-1通過通過gp120gp120與靶細(xì)胞表面與靶細(xì)胞表面CD4CD4分子和趨化因子受體結(jié)合分子和趨化因子受體結(jié)合l高度依賴實(shí)驗(yàn)室診斷高度依賴實(shí)驗(yàn)室診斷l(xiāng)HIV檢測的嚴(yán)肅性：檢測的嚴(yán)肅性： 保證輸血、器官移植的安全保證輸血、器官移植的安全 錯誤結(jié)果將導(dǎo)致嚴(yán)重的法律問題錯誤結(jié)果將導(dǎo)致嚴(yán)重的法律問

2、題l結(jié)果嚴(yán)格保密結(jié)果嚴(yán)格保密診斷診斷：確定個體：確定個體HIVHIV感染狀況而進(jìn)行的檢測，感染狀況而進(jìn)行的檢測，包括臨床檢測和自愿咨詢檢測、術(shù)前檢測、包括臨床檢測和自愿咨詢檢測、術(shù)前檢測、根據(jù)特殊需要進(jìn)行的體檢等。根據(jù)特殊需要進(jìn)行的體檢等。監(jiān)測監(jiān)測：了解不同人群：了解不同人群HIVHIV感染率及其變化趨勢感染率及其變化趨勢而進(jìn)行的檢測，檢測的人群包括各類高危人群而進(jìn)行的檢測，檢測的人群包括各類高危人群和一般人群。和一般人群。血液篩查血液篩查：防止輸血傳播：防止輸血傳播HIVHIV而進(jìn)行的檢測，而進(jìn)行的檢測，包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。HIVHIV抗體檢測目的抗體

3、檢測目的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn): :艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)WS298-2008技術(shù)規(guī)范技術(shù)規(guī)范: :全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（ 2009年修訂版） l篩查試驗(yàn)篩查試驗(yàn)初篩初篩復(fù)檢復(fù)檢l確證試驗(yàn)確證試驗(yàn)HIVHIV抗體檢測程序抗體檢測程序篩查試劑篩查試劑l必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局l注冊批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑，其中注冊批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑，其中l(wèi)酶聯(lián)免疫試劑應(yīng)批批檢合格。推薦使用酶聯(lián)免疫試劑應(yīng)批批檢合格。推薦使用l臨床質(zhì)量評估敏感性和特異性高的試劑。臨床質(zhì)量評估敏感性和特異性高的試劑。HIVHIV抗體篩查樣品

4、抗體篩查樣品l血清、血漿、濾紙干血斑、唾液和尿液。血清、血漿、濾紙干血斑、唾液和尿液。初篩試驗(yàn)初篩試驗(yàn)l對呈陰性反應(yīng)的樣品，可出具對呈陰性反應(yīng)的樣品，可出具lHIVHIV抗體陰性（抗體陰性（- -）報(bào)告；）報(bào)告；l對呈陽性反應(yīng)的樣品，需要進(jìn)一步對呈陽性反應(yīng)的樣品，需要進(jìn)一步l做復(fù)檢試驗(yàn)和確證試驗(yàn)。做復(fù)檢試驗(yàn)和確證試驗(yàn)。復(fù)檢試驗(yàn)復(fù)檢試驗(yàn)l對初篩呈陽性反應(yīng)的樣品，應(yīng)使用對初篩呈陽性反應(yīng)的樣品，應(yīng)使用l原有試劑和另外一種不同原理（或廠家）原有試劑和另外一種不同原理（或廠家）l的試劑，或另外兩種不同原理或不同廠家的試劑，或另外兩種不同原理或不同廠家l的試劑進(jìn)行復(fù)檢試驗(yàn)的試劑進(jìn)行復(fù)檢試驗(yàn)。l如果初篩檢測

5、使用抗原抗體聯(lián)合試劑，則復(fù)檢必如果初篩檢測使用抗原抗體聯(lián)合試劑，則復(fù)檢必須包括一種抗原抗體聯(lián)合試劑。須包括一種抗原抗體聯(lián)合試劑。l艾滋病檢測篩查實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢判定為陽性反應(yīng)的樣艾滋病檢測篩查實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢判定為陽性反應(yīng)的樣品，確證實(shí)驗(yàn)室可以直接進(jìn)行確證試驗(yàn)。品，確證實(shí)驗(yàn)室可以直接進(jìn)行確證試驗(yàn)。篩查方法篩查方法l酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISAELISA）l化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn)化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn)（CLIACLIA）：）：l采用發(fā)光或熒光底物，用發(fā)光或熒光儀采用發(fā)光或熒光底物，用發(fā)光或熒光儀l測定結(jié)果。測定結(jié)果。l快速檢測（快速檢測（RTRT）及其它檢測試驗(yàn)）及其它檢測試驗(yàn) (1)(1)

6、明膠顆粒凝集試驗(yàn)明膠顆粒凝集試驗(yàn)(PA)(PA) (2) (2)斑點(diǎn)斑點(diǎn)EIAEIA和斑點(diǎn)免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗(yàn)和斑點(diǎn)免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗(yàn) (3)(3)免疫層析試驗(yàn)免疫層析試驗(yàn)HIVHIV抗體篩查試驗(yàn)抗體篩查試驗(yàn)l可使用血液、唾液、尿液樣品可使用血液、唾液、尿液樣品l單純單純HIV抗體檢測試劑抗體檢測試劑lHIV抗原抗體聯(lián)合檢測試劑：同時檢測血液中抗原抗體聯(lián)合檢測試劑：同時檢測血液中l(wèi) HIV-1P24抗原和抗原和HIV-1/2抗體。抗體。lHIV抗原或抗體包被于固相載體，加入待檢樣品抗原或抗體包被于固相載體，加入待檢樣品l和酶標(biāo)記的和酶標(biāo)記的HIV抗原或抗體，加底物顯色，用

7、酶標(biāo)儀抗原或抗體，加底物顯色，用酶標(biāo)儀l測定結(jié)果。有效試驗(yàn)的陰性和陽性對照必須符合試劑盒規(guī)定。測定結(jié)果。有效試驗(yàn)的陰性和陽性對照必須符合試劑盒規(guī)定。 固相抗原固相抗原標(biāo)本（含抗體）標(biāo)本（含抗體）酶標(biāo)二抗酶標(biāo)二抗底物底物EEE間接法檢測抗體間接法檢測抗體E固相抗原固相抗原標(biāo)本（含抗體）標(biāo)本（含抗體）酶標(biāo)抗原酶標(biāo)抗原底物底物EE雙抗原夾心法檢測抗體雙抗原夾心法檢測抗體ELISAELISA法結(jié)果判斷法結(jié)果判斷臨界值概念臨界值概念: : 將檢測的陽性和（或）陰性對照的將檢測的陽性和（或）陰性對照的ODOD值值代入計(jì)算公式計(jì)算出來的判斷陽性和陰性結(jié)果的界值代入計(jì)算公式計(jì)算出來的判斷陽性和陰性結(jié)果的界值判

8、斷標(biāo)準(zhǔn)判斷標(biāo)準(zhǔn): :標(biāo)本標(biāo)本ODOD值與臨界值的比值大于等于值與臨界值的比值大于等于1(S/CO1)1(S/CO1)為陽性（對間接法及雙抗原夾心法）為陽性（對間接法及雙抗原夾心法）注意注意: :不同廠家、不同方法臨界值計(jì)算公式不同不同廠家、不同方法臨界值計(jì)算公式不同cutoff=NC+0.1 cutoff=NCcutoff=NC+0.1 cutoff=NC* *2.12.1四代艾滋病酶聯(lián)免疫試劑比較四代艾滋病酶聯(lián)免疫試劑比較solidphasespecificdetection ofconjugate第一代第一代病毒裂解液病毒裂解液HIV-1IgG 抗體抗體HIV-1 -IgG抗體抗體第二代第

9、二代病毒裂解液病毒裂解液重組抗原合成肽重組抗原合成肽HIV-1 / -2IgG 抗體抗體HIV-1 / -2 IgG抗體抗體第三代第三代病毒裂解液病毒裂解液重組抗原合成肽重組抗原合成肽HIV-1 / -2 / -OIgM / IgG 抗體抗體HIV-1 / -2 / -O病毒裂解液病毒裂解液重組抗原合成肽重組抗原合成肽HIV-1 / -2 / -O第四代第四代病毒裂解液病毒裂解液重組抗原合成肽重組抗原合成肽HIV-1 / -2 / -Oanti-p24 AbIgM / IgG 抗體抗體HIV-1 / -2 / -Op24 抗原抗原病毒裂解液病毒裂解液重組抗原合成肽重組抗原合成肽HIV-1 /

10、-2 / -Oanti-p24 抗體抗體method間接間接間接間接夾心夾心夾心夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISAELISA）優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確性高、價(jià)格低廉、優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確性高、價(jià)格低廉、 判斷結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)客觀、判斷結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)客觀、 結(jié)果便于記錄和保存結(jié)果便于記錄和保存用途：流行病學(xué)監(jiān)測及臨床大量標(biāo)本的檢測用途：流行病學(xué)監(jiān)測及臨床大量標(biāo)本的檢測(2)化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn)化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn)采用發(fā)光或熒光底物，既可檢測抗體，也采用發(fā)光或熒光底物，既可檢測抗體，也可聯(lián)合檢測抗原抗體?？陕?lián)合檢測抗原抗體。HIVHIV抗原或抗體包被于固相載體，加入待檢抗原或抗體包被于固相載體，加入待檢樣品和酶或熒

11、光標(biāo)記的樣品和酶或熒光標(biāo)記的HIVHIV抗原或抗體，加抗原或抗體，加發(fā)光或熒光底物，用發(fā)光或熒光儀測定結(jié)發(fā)光或熒光底物，用發(fā)光或熒光儀測定結(jié)果。有效試驗(yàn)的陰性和陽性對照必須符合果。有效試驗(yàn)的陰性和陽性對照必須符合試劑盒規(guī)定。試劑盒規(guī)定。 （3 3）快速檢測（）快速檢測（RTRT）及其它檢測試驗(yàn)）及其它檢測試驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn): :試驗(yàn)簡便快速，適用于應(yīng)急檢測、門診試驗(yàn)簡便快速，適用于應(yīng)急檢測、門診急急 診檢測。不需專門設(shè)備診檢測。不需專門設(shè)備, ,人員培訓(xùn)簡單人員培訓(xùn)簡單, ,一般可在一般可在10103030分鐘內(nèi)得出結(jié)分鐘內(nèi)得出結(jié)果。果。缺點(diǎn)缺點(diǎn): :肉眼判斷較主觀、價(jià)格較貴、結(jié)果不易肉眼判斷較主觀

12、、價(jià)格較貴、結(jié)果不易保存。保存。HIV快速檢測試劑按原理不同，分為以下三類：快速檢測試劑按原理不同，分為以下三類： 1 免疫滲濾試驗(yàn)免疫滲濾試驗(yàn)：以硝酸纖維膜為載體，：以硝酸纖維膜為載體，HIV抗原點(diǎn)抗原點(diǎn)狀狀 固定在膜上。加待檢樣品后，陽性結(jié)果在膜上抗固定在膜上。加待檢樣品后，陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出原部位顯示出 有色斑點(diǎn)。有效試驗(yàn)質(zhì)控點(diǎn)必須顯色。有色斑點(diǎn)。有效試驗(yàn)質(zhì)控點(diǎn)必須顯色。 2 免疫層析試驗(yàn)免疫層析試驗(yàn)：以硝酸纖維膜為載體，：以硝酸纖維膜為載體，HIV抗原線抗原線狀狀 固定在膜上，加待檢樣品后，陽性結(jié)果在膜上抗固定在膜上，加待檢樣品后，陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出原部位顯示出 有

13、色條帶。有效試驗(yàn)的質(zhì)控帶必須顯有色條帶。有效試驗(yàn)的質(zhì)控帶必須顯色。色。 3 明膠顆粒凝集試驗(yàn)（明膠顆粒凝集試驗(yàn)（PA）：將：將HIV抗原致敏明膠抗原致敏明膠顆粒顆粒 作為載體，加待檢樣品后。當(dāng)待檢樣品含有作為載體，加待檢樣品后。當(dāng)待檢樣品含有HIV抗體時，明膠顆抗體時，明膠顆 粒與抗體發(fā)生凝集反應(yīng)，根據(jù)粒與抗體發(fā)生凝集反應(yīng)，根據(jù)凝集情況判讀結(jié)果。凝集情況判讀結(jié)果。 （1 1）明膠顆粒凝集試驗(yàn)（）明膠顆粒凝集試驗(yàn)（PAPA）將將HIVHIV抗原致敏明膠顆粒作為載體，與抗原致敏明膠顆粒作為載體，與待檢樣品作用，混勻后保溫（一般為待檢樣品作用，混勻后保溫（一般為室溫）。當(dāng)待檢樣品含有室溫）。當(dāng)待檢樣

14、品含有HIVHIV抗體時，抗體時，經(jīng)抗原致敏的明膠顆粒與抗體發(fā)生抗經(jīng)抗原致敏的明膠顆粒與抗體發(fā)生抗原原- -抗體反應(yīng)，根據(jù)明膠顆粒在孔中的抗體反應(yīng)，根據(jù)明膠顆粒在孔中的凝集情況判讀結(jié)果。凝集情況判讀結(jié)果?？焖僭\斷試劑快速診斷試劑PAPA法原理法原理PAPA法操作步驟法操作步驟PA法法（2 2）斑點(diǎn)）斑點(diǎn)EIAEIA和斑點(diǎn)免疫膠體金（或膠體硒）和斑點(diǎn)免疫膠體金（或膠體硒）以硝酸纖維膜為載體，以硝酸纖維膜為載體，HIVHIV抗原點(diǎn)狀固定抗原點(diǎn)狀固定在膜上在膜上, ,加血清樣品。加血清樣品。斑點(diǎn)斑點(diǎn)EIAEIA法用酶標(biāo)記抗體，以后步驟同法用酶標(biāo)記抗體，以后步驟同ELISAELISA。斑點(diǎn)免疫膠體金（

15、或膠體硒）用紅色的膠斑點(diǎn)免疫膠體金（或膠體硒）用紅色的膠體金（或膠體硒）體金（或膠體硒）A A蛋白標(biāo)記，用滲濾法蛋白標(biāo)記，用滲濾法作為洗滌方法。作為洗滌方法。陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點(diǎn)。陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點(diǎn)。反應(yīng)時間在反應(yīng)時間在10 min10 min以內(nèi)，使用抗原量少。以內(nèi)，使用抗原量少?？焖僭\斷試劑快速診斷試劑金標(biāo)診斷試驗(yàn)原理金標(biāo)診斷試驗(yàn)原理快速診斷試驗(yàn)快速診斷試驗(yàn)（3）免疫層析試驗(yàn)免疫層析試驗(yàn)( (金標(biāo)法、硒標(biāo)法金標(biāo)法、硒標(biāo)法) )以硝酸纖維膜為載體。加樣區(qū)：預(yù)包被膠體金-抗原/膠體金-protein A結(jié)合物測試區(qū)（T）：固定有重組HIV抗原，質(zhì)控區(qū)：抗HIV

16、單克隆抗體/抗-protein A抗體快速診斷試劑快速診斷試劑全血樣品 加50ul樣品于樣品墊中手指血方法靜脈血方法加一滴緩沖液15分鐘內(nèi)讀取結(jié)果硒標(biāo)法操作步驟硒標(biāo)法操作步驟病人條質(zhì)控條快速診斷試驗(yàn)快速診斷試驗(yàn)優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn): :試驗(yàn)簡便快速，適用于應(yīng)急檢測、門診急試驗(yàn)簡便快速，適用于應(yīng)急檢測、門診急診檢測。不需專門設(shè)備和人員培訓(xùn)診檢測。不需專門設(shè)備和人員培訓(xùn), ,一般可在一般可在10103030分鐘內(nèi)得出結(jié)果。分鐘內(nèi)得出結(jié)果。缺點(diǎn)缺點(diǎn): :肉眼判斷較主觀、價(jià)格較貴、結(jié)果不易保肉眼判斷較主觀、價(jià)格較貴、結(jié)果不易保存。存。注意：一定要將試劑平衡至室溫注意：一定要將試劑平衡至室溫快速診斷試劑快速診斷試劑

17、HIV抗體確認(rèn)試驗(yàn)抗體確認(rèn)試驗(yàn)確認(rèn)試驗(yàn)的試劑：確認(rèn)試驗(yàn)的試劑： 必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑。確認(rèn)試驗(yàn)方法：確認(rèn)試驗(yàn)方法：免疫印跡試驗(yàn)(WB)條帶免疫試驗(yàn)(LIATEK HIV)放射免疫沉淀試驗(yàn)(RIPA)及免疫熒光試驗(yàn)(IFA) 國內(nèi)常用的確認(rèn)試驗(yàn)方法是WB。a 強(qiáng)陽性對照（強(qiáng)陽性對照（HIV-1和和HIV-2）b弱陽性對照（弱陽性對照（HIV-1）c陰性對照陰性對照d典型的典型的HIV-2血清陽性反應(yīng)血清陽性反應(yīng)HIV核酸定性檢測 規(guī)定了核酸檢測、核酸序列測定的實(shí)驗(yàn)室條件、檢測方法及結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 結(jié)果報(bào)告 ： HIV核酸檢測陰性:只可報(bào)告本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果陰性。 HI

18、V核酸檢測陽性:可作為診斷HIV感染的輔助指標(biāo)，不單獨(dú)用于HIV感染的診斷。嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室管理制度（分區(qū)、儀器和材料的專用、單向流向、廢棄物處理） HIV RNA定量測定（病毒載量測定） 方法 常用的HIV RNA定量測定方法有逆轉(zhuǎn)錄PCR試驗(yàn)（RT-PCR）、核酸序列擴(kuò)增試驗(yàn)（NASBA）、分支DNA雜交試驗(yàn)（bDNA）。 HIVHIV核酸定量檢測的意義核酸定量檢測的意義輔助診斷：當(dāng)RNA測定出現(xiàn)較高拷貝數(shù)的陽性結(jié)果時（3，000c/ml），感染發(fā)生的可能性非常大。應(yīng)綜合其它檢測數(shù)據(jù)和樣品背景情況進(jìn)行綜合判斷。 早期診斷 ：HIV感染孕婦所生嬰兒 、殘余危險(xiǎn)度 病程監(jiān)控 ：確定疾病發(fā)展的階段，

19、以確定相應(yīng)的治療方案。 指導(dǎo)治療方案及療效判定 ：通常在治療前后病毒水平降低0.5 log以上才被認(rèn)為臨床有效。 預(yù)測疾病進(jìn)程 適用范圍適用范圍：HIV-1抗體不確定或窗口期的輔助診斷； HIV-1抗體陽性母親所生嬰兒早期的輔助鑒別診斷；第四代HIV-1抗原/抗體ELISA試劑檢測呈陽性反應(yīng)，但HIV-1抗體確認(rèn)陰性者的輔助診斷；監(jiān)測病程進(jìn)展和抗病毒治療效果。檢測方法檢測方法：通常是采用ELISA雙抗體夾心法。 HIV P24抗原的檢測抗原的檢測 結(jié)果報(bào)告和解釋 HIV-1 P24抗原的陽性結(jié)果必須經(jīng)過中和試驗(yàn)確認(rèn)，若陽性標(biāo)本的OD值比中和反應(yīng)前減少50%以上，才確定為HIV P24抗原結(jié)果陽

20、性。HIV-1 P24抗原陽性僅作為HIV感染窗口期的輔助診斷依據(jù)，不能據(jù)此確診。HIV-1P24抗原檢測的敏感性為3090，低于病毒載量測定。HIV-1P24抗原陰性結(jié)果只表示在本試驗(yàn)中無反應(yīng)，不能排除HIV感染。篩查試驗(yàn)陽性反應(yīng)樣品篩查試驗(yàn)陽性反應(yīng)樣品HIV抗體抗體確證檢測流程圖確證檢測流程圖結(jié)合流行病學(xué)資料，可以在結(jié)合流行病學(xué)資料，可以在4 4周后隨訪檢測，如帶型沒有進(jìn)展或呈陰性反應(yīng)，周后隨訪檢測，如帶型沒有進(jìn)展或呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告陰性；如隨訪期間出現(xiàn)陽性反應(yīng)，則報(bào)告陽性；如隨訪期間帶型有進(jìn)則報(bào)告陰性；如隨訪期間出現(xiàn)陽性反應(yīng)，則報(bào)告陽性；如隨訪期間帶型有進(jìn)展，但不滿足陽性標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)繼續(xù)隨訪到展，但不滿足陽性標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)繼續(xù)隨訪到8 8周。如帶型沒有進(jìn)展或呈陰性反應(yīng)周。如帶型沒有進(jìn)展或呈陰性反應(yīng)則報(bào)告陰性；滿足則報(bào)告陰性；滿足HIVHIV抗體陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)則報(bào)告陽性，不滿足陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)抗體陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)則報(bào)告陽性，不滿足陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)可視情況