1、八.飲料中游離色氨酸的測定（高效液相色譜測定方法）本方法適合飲料中游離色氨酸的測定本方法檢測限：飲料中游離色氨酸為 30 v g/100ml。（一）方法提要試樣的游離色氨酸經處理后，在高效反相色譜C18柱上分離，紫外檢測器或二極管陣列檢測器檢測，外標法定量游離色氨酸的含量。（二）儀器1. 高效液相色譜儀帶紫外檢測器或二極管陣列檢測器。2. 超聲活洗儀（溶劑脫氣用）。3. 天平（精確到0.0001©。4. 微孔濾膜（HF 0.45 m。（三）試劑1. 1.0mol/L氫氧化鈉溶液：稱取4.0g氫氧化鈉（分析純），加適量去離子水并稀 釋到100ml。2. 甲醇（色譜純）。3. 0.1%（

2、m/V）磷酸溶液：1.0g磷酸（分析純）加水至1000mL,溶解混勻，過微 孔濾膜0.45m,待用。4. 色氨酸對照品，Fluka公司（純度99.5%）。5. 色氨酸標準溶液：精密稱取色氨酸對照品約0.0300g,移入100ml容量瓶中，加入少許水，再加入50 L1.0mol/L氫氧化鈉溶液，超聲溶解并用水定容到100mL, 成濃度為300 g/mL的標準儲備液。取標準儲備液5.0mL用去離子水定容到50mL , 成為濃度為30 g/mL的標準溶液。（四）測定步驟1. 樣品處理： 汽水、可樂型飲料：取均勻試樣置于小燒杯中，微溫除去二氧化碳（或超聲脫 氣10min），經0.45 m微孔濾膜過濾后

3、供進樣用。 果汁類：取均勻試樣置于離心管中， 5000rpm/min離心20min,上活液經0.45 am微孔濾膜過濾后供進樣用。2. 標準工作曲線制作。精密吸取色氨酸標準溶液1.0, 5.0, 10.0ml,分別置于100mL容量瓶中，用水定容到100mL,搖勻。分另U取10 L標準工作系歹U溶液進樣 分析，以測得的色氨酸的峰面積，分別對色氨酸的濃度繪制標準曲線。3. 色譜條件 色譜柱：Ultimate C18 液相色譜柱 4.6mm i.d. 150mm, 5（m0 流動相：甲醇+ 0.1%酸溶液=18+82 （V+V ）。 流速：1mL/min。 柱溫：35Co 紫外檢測波長：280nm

4、4. 樣品測定：取樣品濾液10L進液相色譜分離測定，根據色譜峰保留時間定 性，外標峰面積法進行定量。LI I莓-Z 1eII I11I11t'rW45B標準色譜圖（五）結果計算根據待測樣品色譜峰面積，由標準回歸方程式中得樣液中游離色氨酸含量，計 算出樣品中的含量。試樣中游離色氨酸含量按下式進行計算。X= 10式中：X 試樣中游離色氨酸含量，單位為毫克每一白克（ mg/100g）； c 樣液的濃度，單位為微克每毫升（H g/ mD;計算結果保留三位有效數字。（六）注釋1.色氨酸的化學名稱為L-2-氨基-3（ 6-呵噪）丙酸，分子式為C11H12NQ。它為白 色或微黃色結晶或結晶性粉末；無臭，味微苦。在水中微溶，在乙醇中極微溶解， 在氯仿中不溶，在甲酸中易溶，在氫氧化鈉試液或稀鹽酸中溶解。色氨酸是一種必 需氨基酸，它的作用主要有兩個，即防止煙酸缺乏癥和增加血活素水平。在所有氨 基酸中，色氨酸被認為是特定食品中含量最少的。 雖然稀少，色氨酸是非常必要的， 因為它會由肝臟轉換成維生素 & (煙酸和煙酰胺)，這有助于防止煙酸缺乏癥。色氨 酸的作用還包括負責神經傳遞素的生產。色氨酸作為一種血活素的初期形式，這種 神經傳遞素負責控制睡眠模式，食欲和情緒。2.文中試劑如未注明規格，均指分析純；所有實驗用水，如未注明其他要求， 均指三級