1、.GMP工作標準 題 目：島津LC-10ATvp型高效液相色譜儀標準操作規程SOP-QC-2016-01制 定 人：審 核 人：批 準 人：制定日期：審核日期：批準日期：頒發部門：質管部頒發數量： 2 份執行日期：分發部門：化驗室、檔案室、OA電子文稿目的：規范島津LC-10ATvp型高效液相色譜儀的操作使用。范圍：島津LC-10ATvp型高效液相色譜儀。職責：化驗人員負責執行，化驗室主管負責監督實施。內容：1 系統組成：本系統由2個LC-10ATvp溶劑輸送泵（分主/A泵和副/B泵）、Rheodyne 7725i手動進樣閥、SPD-10Avp紫外-可見檢測器、CTO-10AS柱溫箱、CBM雙

2、通道數據傳送儀、CS-Light色譜數據工作站和電腦等組成，另外還包括打印機、不間斷電源等輔助設備。2 準備2.1 準備所需的流動相，用合適的0.45m濾膜過濾（水相用水系膜，有機相用有機膜），超聲脫氣20min。2.2 根據待檢樣品的需要更換合適的洗脫柱（注意方向）和定量環。2.3 配制樣品和標準溶液（也可在平衡系統時配制），用合適的0.45m濾膜過濾。2.4 檢查儀器各部件的電源線、數據線和輸液管道是否連接正常。3 開機：接通電源，依次開啟不間斷電源、B泵、A泵、檢測器、數據傳送儀、柱溫箱（有溫度要求時開啟），待泵和檢測器自檢結束后，打開打印機、電腦顯示器、主機，最后打開色譜工作站，雙擊C

3、S-Light Real Time Analysis 1 按鈕。4. 參數設定4.1 波長設定：在檢測器顯示初始屏幕時，按func鍵，用數字鍵輸入所需波長值，按Enter鍵確認。按CE鍵退出到初始屏幕。4.2 流速設定：在A泵顯示初始屏幕時，按func鍵，用數字鍵輸入所需的流速（柱在線時流速一般不超過1ml/min），按Enter鍵確認。按CE鍵退出。4.3 流動相比例設定：在A泵顯示初始屏幕時，按conc鍵，用數字鍵輸入流動相B的濃度百分數，按Enter鍵確認。按CE鍵退出。4.4 梯度設定4.4.1 在A泵顯示初始屏幕時，按edit鍵，Enter鍵。4.4.2 用數字鍵輸入時間，按Ente

4、r鍵，重復按func鍵選擇所需功能（FLOW設定流速，BCNC設定流動相B的濃度），按Enter鍵，用數字鍵輸入設定值，按Enter鍵。4.4.3 重復上一步設定其它時間步驟。4.4.4 用數字鍵輸入停止時間，重復按func鍵直至屏幕顯示STOP，按Enter鍵。按CE鍵退出。5 更換流動相并排氣泡5.1 將A/B管路的吸濾器放入裝有準備好的流動相的儲液瓶中。5.2 逆時針轉動A/B泵的排液閥180°，打開排液閥。5.3 按A/B泵的purge鍵，pump指示燈亮，泵大約以9.9ml/min的流速沖洗，3min（可設定）后自動停止。5.4 將排液閥順時針旋轉到底，關閉排液閥。5.5

5、如管路中仍有氣泡，則重復以上操作直至氣泡排盡。5.6 如按以上方法不能排盡氣泡，從柱入口處拆下連接管，放入廢液瓶中，設流速為5ml/min，按pump鍵，沖洗3min后再按pump鍵停泵，重新接上柱并將流速重設為規定值。6 平衡系統6.1 按CS-Light色譜中文數據系統參考手冊打開“在線色譜工作站CS-Light Real Time Analysis 1 按鈕”，點擊單次分析，輸入實驗信息并設定各項方法參數后，通過放大和縮小功能查看基線。6.2 等度洗脫方式6.2.1 按A泵的pump鍵，A、B泵將同時啟動，pump指示燈亮。用檢驗方法規定的流動相沖洗系統，一般最少需6倍柱體積的流動相。6

6、.2.2 檢查各管路連接處是否漏液，如漏液應予以排除。6.2.3 觀察泵控制屏幕上的壓力值，壓力波動應不超過1MPa。如超過則可初步判斷為柱前管路仍有氣泡，按5.6操作。6.2.4 觀察基線變化。如果沖洗至基線漂移<0.01mV/min，噪聲為<0.001mV時，可認為系統已達到平衡狀態，可以進樣。6.3 梯度洗脫方式6.3.1 以檢驗方法規定的梯度初始條件，按6.2項下方法平衡系統。6.3.2 在進樣前運行1-2次空白梯度。方法：按A泵的run鍵，prog.run指示燈亮，梯度程序運行；程序停止時，prog.run指示燈滅。7 進樣7.1 待基線平衡后，按檢測器zero鍵調零，點

7、擊軟件中 CBM調零校正基線零點，點擊樣品記錄 填寫樣品信息，點擊開始向CBM數據傳送儀發出指令，等待進樣。7.2 用試樣溶液清洗進樣針，并排除氣泡后抽取適量試樣液，定量環進樣抽取溶液量應遠大于定量環的容積（定量環的容積3倍以上），進樣閥處于inject狀態下，插入進樣針，旋轉至load狀態，注入樣品液，再旋轉至inject狀態完成進樣，拔下進樣針。8 數據處理參見CS-Light色譜中文數據系統參考手冊。進樣結束，數據處理完成后，關閉所有窗口，在主界面下退出系統，關閉軟件，再依次關閉電腦主機、顯示器、打印機。9 清洗系統和關機9.1 數據采集完畢后，關閉檢測器，繼續以工作流動相沖洗10min

8、后，換水沖洗。9.2 清洗進樣閥，用啟動注射器吸10ml超純水，將注射針導入口沖洗頭連接到注射器出口上（不要針），并將它們一起接到進樣口上 使進樣閥保持在Inject位置，慢慢將水推入，水將通過注射針導入口、引導管、注射針導入管和注射針密封圈，由樣品溢出管排出。9.3 清洗柱9.3.1 C18柱先用超純水以1ml/min沖洗40min以上，再用甲醇或乙腈沖洗20min。9.3.2 使用緩沖鹽流動相，用水沖洗柱后，分別用20ml超純水沖洗柱塞桿外部和法蘭盤上小孔。9.3.3 清洗完成后，先將流速降到0，再依次關閉泵、UPS，斷開電源。9.3.4 填寫使用記錄。10 島津液相色譜儀注意事項10.1

9、 流動相必須用HPLC級的試劑，使用前過濾除去其中的顆粒性雜質和其他物質（使用0.45um或更細的膜過濾）。10.2 流動相過濾后要用超聲波脫氣，脫氣后應該恢復到室溫后使用。10.3 不能用純乙醇作為流動相，這樣會使單相閥粘住而導致泵不進液。10.4 使用緩沖液時，做完樣品后應立即用去離子水沖洗管路及柱子一小時，然后用甲醇（或甲醇水溶液）沖洗染店40分鐘以上以充分洗去離子。對于柱塞桿外部，做完樣品后也必須用去離子水沖洗20分鐘以上。10.5 長時間不用儀器，應該將柱子取下用堵頭封好保存，注意不能用純水保存柱子，而應該用有機相（如甲醇），因為純水易長霉。10.6 每次做完樣品后應該用溶解樣品的溶劑清洗進樣器。10.7 C18柱絕對不能進蛋白樣品，血樣，生物樣品。10.8 堵塞導致壓力太大，按預柱混合器中的過濾器管路過濾器單向閥檢查并清洗。請洗方法：以異丙醇做作溶劑沖洗，放在異丙醇中間用超聲波清洗用10%稀硝酸清洗。10.9 氣泡會導致使壓力不穩，重現性差，所以在使用過程中要盡量避免產生氣泡。10.10 如果進液管內不進液體時，要使用注射器吸液，通常在輸液前要進行流動相的清洗。10.11 要注意柱子的PH值范圍，不得注射強酸強堿的樣品，特別是堿性樣品。10.12 更換流動