1、輸血實驗教案貴陽醫學院實習（實驗）教案課程名稱臨床輸血與檢驗授課班級及專業 06級醫學檢驗 教研室 臨床血液學 教師及職稱 黃吉娥講師 教研室主任 貴陽醫學院實習（實驗)教案教研室：臨床血液學 04級醫學檢驗一、 實驗題目:abo、rh血型鑒定二、 實驗學時數：3學時 實驗時間：08年月17日三、 實驗授課人：黃吉娥 職稱:助教四、 本實驗目的、要求:掌握：abo、h血型鑒定的原理、方法;試管法的操作步驟； 熟悉：1影響抗原抗體反應的因素; 2 abo、h血型鑒定意義五、 本實驗重點、難點:重點： bo、rh血型鑒定試管法的操作步驟難點： abo、rh血型鑒定結果判斷和分析六、 實驗方式:理論

2、講解,實驗操作七、 實驗儀器、設備等:顯微鏡 離心機 試 管 滴 管 記號筆八、 實驗內容及時間分配:1. 理論講解（15min)2. 實驗操作(13min)試管法（正定)操作步驟：標記分別滴加抗a、抗b、抗d標準血清各2滴5%待檢rb各1滴 1000r/m in結果觀察、判斷試管法（反定)操作步驟：標記%a、b、o型rbc(滴)待測血清2滴 1500pm,1mn觀察結果,判斷3. 結果判斷:1） 凝集強弱程度判斷：2） +3） 一個結實的大凝塊，背景清楚。4） +5） 數個結實的凝塊，背景清楚。6） +7） 中等大小的凝塊加小凝塊,背景清楚。8） +9） 小凝塊，背景較渾濁。10） +或w1

3、1） 細胞有微小凝塊,背景紅色渾濁,通常用顯微鏡觀察。12） 0(negative)13） 陰性,紅細胞呈游離狀態，無凝集象。14） h(hmlysi)15） 溶血，有游離血紅蛋白。16） 正反定型結果判定標準-a-baboc-d判定結果+ad+b +o d+a d+4. 注意事項：搖動試管動作要輕。 器材干凈清潔、防止溶血，試管、 滴管防止交叉污染。 標準血清的質量、性能要符合要求, 防止污染。九、 實驗總結：（5mi)十、 實驗要求的參考書目及章節: 全國臨床檢驗操作規程第三版 葉應嫵、王毓三等主編；第六章第一、二節十一、實驗后內容安排每位同學完成書面實驗報告貴陽醫學院實習(實驗)教案教研

4、室：臨床血液學 4級醫學檢驗一、實驗題目:交叉配血二、實驗學時數：15學時 實驗時間：8年月4日三、實驗授課人:黃吉娥 職稱：助教四、 本實驗目的、要求：了解：交叉配血試驗的意義熟悉:交叉的概念掌握：各交叉配血試驗方法的實驗原理、操作、方法結果判讀，以及方法學評價五、 本實驗重點、難點：重點:交叉配血試驗方法的實驗原理、操作難點：交叉配血試驗方法的結果判讀六、 實驗方式:理論講解，實驗操作七、 實驗儀器、設備等：顯微鏡 離心機 試 管 滴 管 記號筆 八、 實驗內容及時間分配：5. 理論講解(15)6. 實驗操作(50mn）凝聚胺配血法試劑1)生理鹽水2）凝聚胺介質試劑盒:低離子溶液(lowi

5、ni medim）、凝聚胺溶液(olyrene reagen)、懸浮液（resuspning)操作 1）標記3支試管,按下表加樣反應物主測ps d次測 + ds自身對照ps+c受血者血清22供血者血清2%受血者rbc115%供血者bc12)操作步驟:3管中分別加入li液0.6m(滴)加入olybrene試劑滴40rpm離心 15秒,傾倒上清,輕搖試管觀察(應凝集)加懸浮液 2滴，輕搖觀察(應不凝集)涂片顯微鏡下觀察3)結果判斷肉眼觀察有無凝集；鏡下觀察有無凝集主、次側均不凝集：兩血相容，可以輸注主側或次側凝集；兩側均凝集：兩血不相容，不可以輸注4）判斷標準同型配血：主側、次側均無溶血及凝集，可

6、以輸血；任何一側發生溶血或凝集,不可輸血異型配血：主側無凝集無溶血，次側有凝集無溶血,可以輸少量血；如主側、次側均凝集或主側凝集,不能輸血,查找原因 注意事項1）鹽水配血不凝集但有反復輸血史或妊娠史的受血者，應加用聚凝胺介質、媒介質或抗球蛋白介質配血2）如需大量輸血,獻血員之間也應作交叉配血,以防止獻血員相互之間有免疫性抗體九、 實驗總結：（5min）十、 實驗要求的參考書目及章節：全國臨床檢驗操作規程第三版 葉應嫵、王毓三等主編；第六章第七節十一、實驗后內容安排每位同學完成書面實驗報告貴陽醫學院實習(實驗)教案教研室：臨床血液學 04級醫學檢驗一、實驗題目:不規則抗體篩查二、實驗學時數:1.

7、學時 實驗時間：年6月4日三、實驗授課人：黃吉娥 職稱：助教四、本實驗目的、要求：了解：不規抗體的定義熟悉:抗球蛋白法檢測原理及影響因素掌握:低離子聚凝胺法實驗原理、方法以及結果判讀五、 本實驗重點、難點：重點:低離子聚凝胺法實驗原理、方法以及結果判讀難點:抗球蛋白法檢測原理及影響因素六、 實驗方式：理論講解，實驗操作七、 實驗儀器、設備等：顯微鏡 離心機 試 管 滴 管 記號筆 八、 實驗內容及時間分配:.理論講解(20m).實驗操作(5in)低離子凝聚胺法原理：輸血后機體對外源性抗原產生同種免疫抗體，當再次輸入相應抗原時就會產生抗原抗體反應。應用特定的篩選細胞（1、2、號),與待檢者血清反

8、應，判斷機體所產生的同種抗體類別。 試驗方法:鹽水法 低離子聚凝胺法 間接抗人球法本試驗選用低離子聚凝胺法低離子聚凝胺法的試驗原理:聚凝胺是一種多價陽離子聚合物，能中和紅細胞表面的負電荷，引起紅細胞的非特異性凝聚。igg抗體與紅細胞上相應抗原結合后，在聚凝胺的作用下發生凝集。低離子液: 通過降低介質溶液離子強度,減少紅細胞膜外圍的離子云，促進紅細胞凝集,因而其靈敏度有所提高。聚凝胺: 通過多聚季氨鹽溶液提供大量正電荷來中和紅細胞表面負電荷,減少紅細胞間的排斥，促進紅細胞凝集,其靈敏度有較大提高。重懸液 凝聚和凝集外表上不能區分，加入枸櫞酸鈉重懸液后，枸櫞酸根的負電荷中和了聚凝胺上的正電荷,使紅

9、細胞非特異性凝聚現象消失,而真正的凝集（抗原抗體反應）不消失。試劑1)抗體篩選用紅細胞懸液（、3#)2）凝聚胺介質試劑盒:低離子溶液（lo ionc medium）、凝聚胺溶液(polyre rat）、懸浮液(rsendn）3）受檢者血清4）受檢者%紅細胞懸液操作 1、標本：抗凝血1m，離心分離血漿和紅細胞2、配制受檢者bc懸液 取壓積紅細胞一滴,加入含1m生理鹽水的小試管內，混勻,即得約5紅細胞懸液。3取4支小試管,按表標記及加入相應試劑。 1# # 3# 自身 受檢血清 滴 2滴 2滴 2滴rc懸液 1滴rbc懸液# 1滴rbc懸液# 滴受檢5% 1滴lm液 6m 6l 06m .4加樣后

10、繼續以下操作加樣后靜置1m加入olyren試劑2滴30rp 離心5秒,輕扣觀察（應凝集)加懸浮液 2滴,輕搖觀察（應不凝集)涂片顯微鏡下觀察 結果判斷篩選紅細胞1.2.3 自身rb 血清中存在的抗體 - 同種抗體 + + 自身抗體，或自身抗體和同種抗體同時存在 + 自身抗體注意事項）標本盡可能不用肝素抗凝血2）詢問用藥史，止血敏、kl、vitc這些藥品會干擾聚凝胺的作用導致假陰性。3）血清量不能多加，否則會提高致敏過程中的離子強度，降低致敏效果。4)加聚凝胺,只需滴,多加可能導致重懸液無法充分解散非特異性凝集，出現假凝集,導致假陽性。5)離心時轉速不能太快或太慢、時間不能過長或過短,以免引起假

11、陽性或假陰性。6)看結果： 陰性-rc迅速散開，1min內完全散開?？社R下觀察。 陽性-bc不完全散開,弱凝集可能在30min內明顯減弱或消失,因此以立即看的結果為準。 觀察結果時輕搖試管，以免將弱凝集搖散造成假陰性,引起事故。7）若抗體篩選時,無論哪一種方法出現陽性反應時,都必須進一步進行抗體特異性的鑒定。 建議:作抗體篩選試驗的時候最好先做抗人球法九、 實驗總結：（5min)十、 實驗要求的參考書目及章節:全國臨床檢驗操作規程第三版 葉應嫵、王毓三等主編;第六章第五節十一、實驗后內容安排每位同學完成書面實驗報告貴陽醫學院實習(實驗)教案教研室：臨床血液學 4級醫學檢驗一、實驗題目:新生兒溶

12、血病的檢查二、實驗學時數:3學時 實驗時間:08年7月1日三、實驗授課人：黃吉娥 職稱:助教四、 本實驗目的、要求： 了解：新生兒溶血病發病機制熟悉：新生兒溶血病治療原則掌握:新生兒溶血病診斷實驗原理、操作及意義。五、 本實驗重點、難點:重點：新生兒溶血病診斷實驗原理、操作及意義難點：新生兒溶血病發病機制六、 實驗方式:理論講解,實驗操作七、 實驗儀器、設備等:顯微鏡 離心機 試 管 滴 管 記號筆 八、 實驗內容及時間分配:(一）理論講解(1min)(二）實驗操作（130mn）新生兒溶血三項試驗方法：凝膠卡式檢測法原理:微管內有凝膠顆粒和試劑。凝膠顆粒具有分子篩作用，離心后，不凝集的紅細胞通

13、過全程進入微管底部,而凝集的紅細胞則懸浮停留在顆粒中凝膠凝集- 原理: 事先在凝膠微柱中的lis緩沖液中加入h,實驗中,將紅細胞與抗血清加入凝膠上部，離心后觀察 如果抗體能結合在紅細胞表面,那么通過凝膠內ag橋聯,紅細胞發生凝集,判斷凝集實驗陽性 如果抗體未能結合在紅細胞表面,那么紅細胞不能凝集，判斷凝集實驗陰性凝膠卡式檢測法的特點:靈敏度和準確性高，重復性好不需要清洗紅細胞自動化程度高 可以實現全自動操作實驗全過程標準化 標準化的孵育時間、離心時間以及結果判讀 消除了主觀因素對弱反應結果的判讀,減少了人為錯誤的發生實驗結果客觀性強,而且穩定，可以長期保存獲得is9000ce認證新生兒溶血三項

14、試驗標本:1、抗凝血m,離心分離血漿和壓積紅細胞備用;2、取壓積紅細胞12ml，用生理鹽水洗滌3次，吸凈上清后備用；3、配制%洗滌后紅細胞懸液4、配制5%abo型標準紅細胞懸液試驗一:直接抗球蛋白試驗 原理 利用抗人球蛋白血清可與體內已被不完全抗體或補體致敏紅細胞產生凝集反應,可檢查紅細胞是否已被不完全抗體所致敏。 試劑1）抗人球蛋白卡(coomb卡)市售合格產品。2)生理鹽水操作 待檢rbc洗滌三次 2%rb懸液25ul加入coombs卡內 37c孵育0分鐘離心觀察結果結果判斷陽性:凝集；陰性:無凝集注:鹽水管(對照)應不凝集。若凝集,說明細胞本身有自凝現象,試驗 無參考意義。試驗二：游離抗

15、體試驗原理 本實驗是一種檢測血清中不完全抗體或補體的方法。即用已知抗原的紅細胞測定受檢血清中相應的不完全抗體 試劑1抗人球蛋白卡.受檢血清3.5%已知抗原的紅細胞懸液操作5ab紅細胞待檢血清2滴分別加入coomb卡內孵育20mi離心凝集 不凝集有抗體 陰性結果判斷指示紅細胞 意 義abo+- 游離的抗a+ 游離的抗+- 游離的抗a、抗b或有抗c*o+ 游離的o系統以外抗體- 無游離抗體試驗三：抗體放散試驗原理 紅細胞上的抗原與血清中抗體在適合條件下發生凝集或致敏，這種結合是可逆的。如改變某些物理條件，抗體又可從結合的細胞上放散,再以相應的紅細胞鑒定放散液內抗體的種類并測定其強度，用以判定紅細胞

16、上抗原的型別。 試劑1)生理鹽水2)5a、b、型rb懸液。3)抗人球蛋白卡(coob卡)操作待檢rc洗滌3次取壓積rbc1ml加滴鹽水5c水浴振搖7- mn 離心套筒預熱000 /mi 離心 n吸取上層放散液兩滴加入os卡內，加3孔分別加入5%ao紅細胞懸液l滴37c孵育2mn350 r/n 9min 觀察結果結果觀察意義指示紅細胞 意 義bo+- 放散出igg抗- 放散出ig抗+ 放散出抗c(交叉反應性抗體)，或同時放散出ig抗a或抗- 未放散出抗體o*o 放散出abo血型以外的抗體是否為abo-d 可根據游離、釋放試驗陽性或陰性判定。如注意事項）洗出盡量多的紅細胞進行放散2)注意放散液的溫度不可超過5,以防溶血3）天冷時放散液離心