1、白茶提取物體外抗乙型肝炎病毒的研究目錄摘要1Abstract11 材料與方法21.1 試驗材料21.2 試驗試劑21.2.1 試驗試劑和藥品 21.2.2 主要試劑的配制 31.3 試驗儀器 41.3.1 儀器設備41.3.2 細胞培養物品的清洗及滅菌消毒 41.4 試驗方法41.4.1 HepG2.2.15細胞的培養41.4.2 WTE的細胞毒性試驗（MTT法）51.4.3 WTE對HBV抗原抑制的體外試驗62 結果與分析72.1 HepG 2.2.15細胞形態觀察 72.2 WTE的細胞毒性試驗（MTT法）72.3 WTE對HBV抗原抑制的體外試驗83 討論93.1 WTE對細胞生長的低毒

2、性作用 93.2 WTE的抑制HBsAg、HBeAg表達的作用10參考文獻 10附件 12致謝 14主要英漢縮略對照表英文縮寫英文全稱中文全稱WTEWhite tea extract白茶提取物HBVHepatitis B Virus乙型肝炎病毒DMEMDulbeccos modification of Eagles medium Dulbecco細胞培養基DMSODimethyl sulfoxide二甲基亞砜ELISAenzyme linked immunosorbent assay酶聯免疫吸附劑測定FBSFetal Bovine Serum胎牛血清PBSPhosphate Buffered

3、Solution磷酸鹽緩沖液HBsAgHepatitis B Surface Antigen乙型肝炎表面抗原HBeAgHepatitis B e-Antigen乙型肝炎E抗原HepG2.2.15人肝癌細胞系Hepes2-4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinylethanesulfonic acid 羥乙基哌嗪乙硫磺酸MTT3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽（噻唑蘭）G418Geneticin 418篩選抗生素3TCLamivudi

4、ne拉米夫定PCRPolymeraseChainReaction聚合酶鏈式反應ODOptical Density光密度值rpmround per mineter每分鐘離心轉數TC50The largest Non-toxic concententration最大無毒濃度摘要：本研究采用HepG2.2.15細胞模型，通過體外試驗來研究白茶提取物（WTE）的抗乙型肝炎病毒功能，為進一步開發利用白茶資源提供理論依據，其研究結果表明：1.WTE抑制50%細胞生長的濃度（TC50）為665.5g/mL，高于其抑制病毒的200g/mL的濃度，提示WTE對HepG2.2.15細胞的毒性較低，適合開發成藥物或

5、保健品。2.WTE在200g/mL濃度時對HBsAg表達抑制率達到40.70%，對HBeAg表達抑制率達到39.94%。結果提示WTE在體外實驗中能夠較有效地抑制HepG2.2.15細胞中HBsAg、HBeAg的分泌，從而抑制病毒的復制及表達。關鍵詞：白茶提取物；乙型肝炎病毒；HepG2.2.15細胞；細胞毒性試驗；體外試驗Abstract：This research used the vitro experiments to study the white tea extract (WTE) of anti-hepatitis B virus functions, based on HepG

6、2.2.15 cell models, in order to provide a theoretical basis for further development and utilization of the white tea resourses. The major results are as follows:1.WTE was a little cellulotoxic, its TC50 towards HepG2.2.15 cells was only 665.5g/mL,higher than the concentration of inhibiting virus (20

7、0g/mL);it pointed out that WTE had a low toxicity to HepG2.2.15 cells, which can be suitable for exploiting drugs and health products.2.When WTE concentration reached 200g/mL, the inhibition ratio of HBsAg expression by WTE reached 40.70%, the inhibition ratio of HBeAg expression by WTE reached 39.9

8、4% .The results displayed that WTE could suppress HBsAg and HBeAg secretion efficiently in HepG2.2.15 cells in vitro experiments, in order to suppress the replication and expression of HBV.Key words: WTE; HBV; HepG2.2.15 cell; cytotoxicity experiment; vitro experiment白茶是我國的特種茶，六大茶類中的一顆璀璨明珠，我國是世界唯一的產

9、地?！鞍l如雪，似白眉，上下交錯，素裹銀裝，熠熠生輝。美哉！雅哉！”這說的便是白茶1。因制法獨特，僅有萎凋和干燥兩道工序，成茶外表滿披白毫，呈白色故稱“白茶”?！吧褶r嘗百草，日遇七十二毒，得茶而解”，2000多年前神農本草經的一句記載，奠定了茶在藥用方面的地位2?，F代的靜態生物化學通過對茶的研究表明，茶葉中共有700多種的內含物質3，其中咖啡堿約占茶葉總干物質的20%-30%，還有糖類、水、維生素、酶、礦物質等多種成分2。幾十年來，國內外大量的研究表明，茶葉含有人體所必需的化學成分，含有對某些疾病具有顯著療效的物質，茶葉具有抗癌、抗衰老、抗氧化、抗輻射、降血糖、降血壓、降血脂、抗菌、抗HIV、防

10、蛀牙、延緩衰老等作用4,5,6,7。白茶同其他茶類一樣具有一定的保健藥用價值，而且由于其獨特的加工工藝和內含物變化等不同，其三降三抗的效果優于其他茶類8。病毒性乙型肝炎（乙肝）是由乙型肝炎病毒（乙肝病毒，HBV）引起的傳染病9。乙型肝炎病毒（HBV）具有明顯的種屬特異性，是目前所知道的最小的嗜肝DNA病毒，在易感染宿主細胞內易于附著、侵入和復制，并可長時間持續感染10。肝臟是HBV感染和復制的主要場所，故而肝細胞是HBV感染模型的首選細胞。目前用于HBV培養的細胞主要有人肝癌細胞系和HBV感染原代培養的肝細胞系兩個模型11。人肝癌細胞主要有三個不同的細胞系建株：PLC/CRF/5細胞系，Hep

11、G2細胞系，HepG2.2.15細胞系12。因HepG2.2.15細胞系可較長時間的維持HBV病毒的復制，故成為應用最廣泛的乙型肝炎病毒細胞模型，常用于抗HBV感染基因治療的研究13,14。慢性乙型肝炎是當前困擾人類健康最嚴重的問題之一，全球目前有4億多慢性乙型肝炎病毒感染者，其中有超過75%分布在亞太地區，中國是乙型肝炎高發區，超過6億人感染過乙肝病毒，慢性乙肝病毒攜帶者達10%以上15。慢性乙型肝炎的預后不良，將慢慢發展為肝硬化，最終可能發展為肝癌。乙型肝炎是導致急慢性肝炎、肝硬化、肝纖維化、肝癌的主要病因，對人類健康危害巨大，因此，尋找高效低毒的抗HBV藥物已刻不容緩。長期以來，許多科學

12、家和臨床醫學者對治療慢性乙型肝炎的研究進行了不懈的努力，但仍然還沒有一種治療乙肝的特效藥物16,17。近年來國內外許多研究已經證實了茶提取物的抗病毒作用。生命世界2006年第3期摘錄：天天喝茶可提高免疫力。文章中指出，哈佛大學的研究發現茶飲料中含有L-茶氨酸，當它進入人體被肝臟分解后，會轉換成乙胺，繼而激活機體T細胞，增強人體的免疫力19。白茶中的氨基酸含量高于普通茶一倍，富含人體所需的13種氨基酸18。已有文獻曾報道白茶有消炎、殺菌、抗病毒及抗氧化、抗突變的活性物質；白茶中茶氨酸具有很強的提高機體免疫力的功能，可使機體內免疫細胞干擾素分泌量提高5倍，茶氨酸在人體肝臟內分解為乙胺，調動名為“伽

13、馬-德耳塔T形細胞”作出抵御外界侵害的反應，繼而由T形細胞促進干擾素的分泌，形成人體抵御外界感染的“化學防線”，極大地提高機體抵御外界侵害的能力19。本試驗采用HepG2.2.15細胞模型，通過體外試驗，來研究白茶提取物（WTE）的抗乙型肝炎病毒功能。1 材料與方法1.1 試驗材料HepG2.2.15細胞株1.2 試驗試劑1.2.1 試驗試劑和藥品DMEM高糖培養基（含L-Gln）：北京索萊寶科技有限公司；胰蛋白酶：北京索萊寶科技有限公司；胎牛血清FBS：美國Hyclone公司；二甲亞砜（DMSO）培養試劑：北京索萊寶科技有限公司；青鏈霉素混合液：南京凱基生物科技發展有限公司；PBS緩沖液：北

14、京索萊寶科技有限公司；G418：上海生工生物工程有限公司；D-Hank，s：北京索萊寶科技有限公司；Hepes：北京索萊寶科技有限公司；MTT噻唑蘭：北京索萊寶科技有限公司；乙型肝炎病毒表面抗原酶聯免疫試劑盒：上海科華生物技術有限公司；乙型肝炎病毒E抗原酶聯免疫試劑盒：上?？迫A生物技術有限公司；賀普?。褐袊K州葛蘭素史克制藥有限公司；1.2.2 主要試劑的配制：1. 2.2.1 DMEM培養液的配制：取一包DMEM高糖培養基粉，加入新鮮雙蒸水800mL，再加入2.0g的 NaHCO3，4.765g的Hepes，攪拌，使充分溶解，用5.6%的NaHCO3將pH調至7.2左右，定容至1000mL，

15、搖勻，過濾除菌，分裝成小瓶。取少量培養液于細胞培養瓶中放至細胞培養箱中孵育檢菌，其余-20保存備用，短期內使用則備存于4。1.2.2.2 0.25%胰蛋白酶液的配制：準確稱取胰蛋白酶粉250mg和EDTA 20mg，加入90 mL雙蒸水中，4冰浴攪拌混勻至完全溶解，避免產生泡沫，加水定容至100mL，用HCL調pH值至7.4，過濾除菌，分裝，-20保存，短期內使用備存于4。1.2.2.3 PBS的配制：準確稱取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4，加入800mL雙蒸水，用玻棒攪拌，使充分溶解。用5.6%的NaHCO3將pH值調至7.4，加水定容

16、至1000mL，分裝后高壓蒸汽滅菌，4保存備用。1.2.2.4 G418液的配制：準確稱取380mg的G418粉劑溶于10mL PBS緩沖液中，待充分溶解后過濾除菌，分裝成小瓶，-20保存備用。在培養細胞時向100mL培養液中加入1mL的G418液。1.2.2.5 MTT溶液的配制：準確稱取50mg MTT粉，溶于10mL PBS緩沖液中，待充分溶解后，過濾除菌，分裝，使濃度為5mg/mL，4避光保存備用。1.2.2.6 細胞凍存液的配制：表1 細胞凍存液配制表DMEM高糖培養液70mLFBS20mLDMSO10mL1.2.2.7 3TC溶液的配制：準確稱取100mg的3TC賀普丁片，置于50

17、mL PBS緩沖液中溶解，配成2mg/mL的母液，過濾除菌，分裝成小瓶，-20保存備用。使用前以20倍稀釋成濃度為0.1mg/mL的工作液即可。1.2.2.8 含藥培養基的配制：將WTE以新鮮雙蒸水配成濃度500mg/mL的母液，經0.45m、0.22m的微孔濾膜過濾除菌后，置4冰箱保存備用。實驗時用配好的完全培養液將WTE母液稀釋至所需濃度即可。1.3 試驗儀器1.3.1 儀器設備表2 儀器設備一覽表儀器名稱生產公司CO2培養箱Forma,Scien tific,inc紫外可見分光光度計uLtrospec 2000 pro型英國Biochrom.Ltd公司KDC160HR型高速冷凍離心機科大

18、創新股份有限公司1-15臺式高速離心機Sigma公司SZ-93自動雙蒸純水蒸餾器上海亞榮生化儀器廠芬蘭雷勃MK3酶標儀ThermoLabsystems公司XSB-1A生物倒置顯微鏡上海研潤光機科技有限公司PTC-200 PCR儀MJ Research inc watertow全自動洗板機奧地利Anthos Labtec Instruments冰箱（4，-20）青島海爾集團超凈工作臺深圳市科發實業有限公司壓力蒸汽滅菌器LDZX-30KBS上海申安醫療器械廠細胞培養瓶（25mL、50mL）美國Costar一次性注射器（1mL、10mL）江蘇康友醫用器械有限公司濾菌器和濾菌膜（0.22m、0.45m

19、）華美生物工程公司1.3.2 細胞培養物品的清洗及滅菌消毒微生物污染對于細胞培養影響極大, 與細胞培養有關的試劑和設備都必須經過嚴格的消毒滅菌才可使用。細胞實驗物品的嚴格清洗及消毒滅菌是細胞培養成敗的關鍵因素之一20，具體見附件。1.4 試驗方法1.4.1 HepG2.2.15細胞的培養（1）完全培養液的配制：無菌條件下，于DMEM高糖培養液中加入380g/mL的G418、10%FBS、100g/mL青霉素、100g/mL鏈霉素。于超凈臺下臨用前配制，4保存備用。（2）細胞復蘇：從液氮瓶中取出細胞凍存管，立即投入37水浴中緩慢搖動使之融化，一般在1min鐘內完成，同時用75%酒精擦拭凍存管表面

20、。在超凈工作臺內，從凍存管內吸出細胞懸液至無菌離心管中，加入約5mL完全培養液混勻，1000rpm下低速離心5min后棄去上清，接種于細胞培養瓶中，置細胞培養箱(37，5%CO2)中培養，隔日換培養液。（3）細胞傳代：HepG2.2.15細胞為貼壁型生長細胞，需要每隔1天換液，每隔3天消化傳代一次，按下列步驟操作：用吸管吸除培養瓶內的培養液；用D-Hank，s液輕輕沖洗瓶壁3次；加入0.25%胰蛋白酶消化液2mL，放回細胞培養箱中消化約4min；取出培養瓶，加入2滴完全培養液終止消化。用巴斯管將瓶內細胞輕輕吹打均勻后，將細胞懸液轉入無菌帶蓋的離心管中，1000rpm離心4min；棄去上清液，加

21、入2mL的完全培養液，反復地輕輕吹打，直至細胞均勻；細胞計數：取10L的細胞懸液加入到10L的0.4%臺盼藍染液，使混合均勻，后吸取10L加入到細胞計數板中，電鏡觀察，數4大格后，根據下列公式計算出細胞數：每mL細胞數=(4大格細胞數之和/4) 2104；細胞接種：將計數好的細胞懸液用配好的完全培養液將細胞濃度調至2104/mL，后接種于細胞培養瓶中；置細胞培養箱(37，5%CO2)中培養，隔日換液。（4）細胞凍存：取對數生長期細胞，吸棄培養液，消化后置1000rpm離心，棄去上清。用配好的凍存液將細胞密度調至l107/mL，分裝于凍存管中，于4靜置30min，再-20靜置40min，再置于-

22、70超低溫冰箱中過夜，次日投入液氮罐中凍存。1.4.2 WTE的細胞毒性試驗（MTT法）細胞毒性實驗采用MTT檢驗方法來檢測WTE在體外對HepG2.2.15細胞的毒害作用。四甲基偶氮唑藍染色劑是一種能接受氫原子的染料，其化學名為3-(4,5-二甲基噻唑-2)2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名為噻唑藍，簡稱MTT?；罴毎木€粒體中存在的一種琥珀酸脫氫酶能使外源性的MTT還原成難溶性的藍紫色結晶物甲臜(Formazan)并沉積在細胞中，而死亡的細胞則不具有這種琥珀酸脫氫酶，MTT不會被還原。用二甲基亞砜（DMSO）溶解Formazan后，再用酶標儀在570nm波長處檢測其光密度，可間接反映出活細胞

23、的數目。此方法快速、簡便、所需細胞數少。細胞毒性試驗：（1）將HepG2.2.15細胞消化后，用完全培養液將細胞濃度調成2l04/mL細胞懸液，吸入到96孔培養板中，100L/孔，每個濃度共設3個復孔，置細胞培養箱(37，5%CO2)中培養。（2）24 h后待細胞貼壁且生長良好，吸棄全部培養液，再加入6個終濃度為下表的WTE用藥液100L，并設空白對照孔：表3 WTE用藥液濃度濃度ABCDEFOT空白（g/mL）8002005012.53.10.8原液空白（3）連續培養72h后，在培養結束前5h，每孔加入10L的 MTT，于細胞培養箱(37，5%CO2)中繼續培養。（4）5 h后小心吸棄各孔的

24、上清液，每孔加入DMSO 100L，置微量振蕩器振蕩4min，使結晶紫（Formazan）完全溶解掉。置于自動酶標儀(設定檢測波長570nm，參考波長630nm)讀取各孔OD值，記錄結果。（5）計算WTE對HepG2.2.15細胞生長的抑制百分率，并參照Reed-Muench法21計算出半數細胞毒性濃度(TC50)。抑制率(%)=(對照孔平均A值-加藥孔平均A值) / (對照孔平均A值-空白孔A值100半數毒性濃度(TC50)=Antilog1ogB+(50-B)的抑制百分率(A-B)的抑制百分率C，(A抑制50藥物濃度，B抑制50藥物濃度，C=log稀釋倍數)。1.4.3 WTE對HBV抗原

25、抑制的體外試驗1.4.3.1 含藥培養液的配置：將WTE以新鮮三蒸水配成400g/mL的母液，經0.22m的一次性過濾頭過濾除菌，置4冰箱保存備用，臨用時用完全培養液將其2倍稀釋成以下4個終濃度的應用液：400g/mL、200g/mL、100g/mL、50g/mL。1.4.3.2 WTE對HBV抗原抑制的體外試驗：將HepG2.2.15細胞消化后，用完全培養液將細胞濃度調成2104/mL的細胞懸液，加入到24孔細胞培養板中，1000L/孔，每個濃度共設3個復孔，置細胞培養箱(37，5% CO2)中培養。隔日待細胞貼壁且生長良好，吸去培養液，然后分別加入下表中藥物配制的各濃度的完全培養液1000

26、L，每個濃度設3個復孔，置細胞培養箱(37，5% CO2)中培養。等量的完全培養液作空白對照，用已證實確實有效的3TC培養液作陽性對照22,23。表4 藥物及其濃度配制表孔號12345678藥物WTE（g/mL）3TC（M/mL）空白濃度5.2220在連續培養72h后，吸取細胞培養液分別加于1.5mL無菌Eppnedorf管中，于-20保存待檢。再次加入上述不同濃度的藥物培養液繼續培養。在再次培養72h后，吸取細胞培養液分別加于1.5mL無菌Eppnedorf管中，于-20保存待檢。1.4.3.3 ELISA法檢測將-20保存的細胞培養液用同時同批乙型肝炎病毒表面抗原、E抗原酶聯免疫試劑盒檢測

27、HBsAg和HBeAg的效價。（1）實驗準備：從冷藏環境中取出試劑盒，在室溫下平衡30min，同時待測樣品也置室溫下平衡30min，另外將濃縮洗滌液作1:20稀釋。（2）加待測標本：其中每孔加入50L的細胞培養液，分別設HBsAg，HBeAg陽性對照和陰性對照組各2孔，并設空白對照1孔。（3）加酶結合物：每孔加入50L酶結合物，其中空白對照孔不加，充分混勻后，封板，置37下30min。（4）洗板：吸棄反應板孔內液體，甩干；每孔注滿洗滌液，靜置10s后，吸棄孔內洗滌液，拍干。以上步驟重復5次。（5）加顯色劑：先加入顯色劑A，50L/孔；再加入顯色劑B，50L/孔；充分混勻后，封板，置于37下避光

28、孵育15min。（6）終止反應：加入反應終止液50L/孔，充分混勻。（7）測定：以空白孔調零，置于自動酶標儀讀取各孔OD值(設定檢測波長450nm，參考波長630nm)，做好結果記錄。計算WTE對HBsAg，HBeAg表達的抑制百分率：WTE對抗原的抑制百分率=l-實驗孔抗原OD值/對照孔抗原OD值100%2 結果與分析2.1 HepG 2.2.15細胞形態觀察電鏡下HepG2.2.15細胞形態如下圖1、2所示： 圖1 10顯微鏡下觀察的HepG2.2.15細胞 圖2 40顯微鏡下觀察的HepG2.2.15細胞由圖1、2可觀察到HepG2.2.15細胞為貼壁細胞，呈梭形狀或多角形狀。2.2 W

29、TE的細胞毒性試驗（MTT法）MTT試驗結果顯示TC50=665.5 g/mL，結果見表5，提示WTE對HepG2.2.15細胞的毒性較低。表5 WTE對HepG2.2.15細胞的毒性作用（S，n=6）濃度（g/mL）OD存活率（%）抑制率（%）TC50（g/mL）空白組0.9270.031665.58000.4870.04346.353.72000.6220.15162.837.2500.7650.04680.219.812.50.8190.19586.813.23.10.9050.23697.32.72.3 WTE對HBV抗原抑制的體外試驗各組用藥后HepG2.2.15細胞系HBsAg、H

30、BeAg的濃度皆有下降的趨勢，說明對HBsAg、HBeAg表達均有一定的抑制作用。其中作用144h后，3TC在20M/mL濃度時對HBsAg表達抑制率達到53.42%，對HBeAg表達抑制率達到56.32%；WTE在200g/mL濃度時對HBsAg表達抑制率達到40.70%，對HBeAg表達抑制率達到39.94%。結果見表6，圖3、4。表6 WTE對HepG2.2.15細胞系HBsAg、HBeAg表達的抑制作用（S，n=3）組別濃度72h144hHBsAgHBeAgHBsAgHBeAg空白0.8920.0240.5120.0330.8330.0410.6960.0823TC組（M/mL）0.2

31、0.7830.0360.4620.065*0.7120.112*0.6130.053*20.5890.047*0.3560.048*0.5020.043*0.4380.024*200.4470.076*0.2450.027*0.3880.031*0.3040.038*WTE（g/mL）500.8050.033*0.4830.082*0.7320.049*0.6210.057*1000.6980.065*0.4030.049*0.6310.024*0.5140.049*2000.5730.027*0.3420.114*0.4940.033*0.4180.043*4000.6210.044*0.3

32、780.048*0.5620.066*0.4890.041*注：與空白組對比，* P0.05；* P0.01 圖3 3TC、WTE對HBsAg的抑制作用圖4 3TC、WTE對HBeAg的抑制作用3 討論在過去的幾十年中，人們對于茶提取物能夠抗炎癥、抗氧化、抗病毒等生物學活性表現了極大的研究興趣。本實驗通過驗證WTE在體外人肝癌細胞系HepG2.2.15中的抗乙肝病毒研究，表明了WTE不僅在動物體內能夠通過提高機體內干擾素分泌等因素來抑制乙型肝炎病毒的復制和表達，同時在體外細胞中也可以干擾病毒復制從而達到抗乙肝病毒的目的。3.1 WTE對細胞生長的低毒性作用MTT法是一種快速、簡便的用顏色反應的

33、方法來檢測細胞存活和增殖的方法。MTT法的檢測原理為：活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為不溶于水的藍紫色結晶甲瓚（Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞則無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲瓚，用酶聯免疫檢測儀在570nm波長處測定其光吸收值，以此間接反映出活細胞數量。在一定細胞數范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數成正比。該方法已廣泛應用于一些生物活性因子的活性檢測、細胞毒性試驗、大規模的抗腫瘤藥物篩選以及腫瘤放射敏感性測定等，其特點是靈敏度高、快速、經濟、易自動化、無放射性污染等，而且能夠在比較短的時間內對藥物進行篩選和評價，省去了一些繁瑣的實驗步驟，而且取得

34、的數據客觀可靠，是比較理想的實驗方法。本實驗應用MTT法來觀察WTE在抑制HBV DNA復制的同時對HepG2.2.15細胞本身的生長是否有影響。結果顯示，WTE抑制50%細胞生長的濃度（TC50）為665.5g/mL，高于其抑制病毒的200g/mL的濃度，提示WTE對HepG2.2.15細胞的毒性較低，適合開發成藥物或保健品。3.2 WTE的抑制HBsAg、HBeAg表達的作用研究結果顯示，WTE不僅可以抑制HBV DNA的復制，而且可以一定程度上抑制乙肝病毒抗原的表達。結果表明，在一定濃度范圍內，WTE隨著藥物濃度的加大，其對乙肝病毒抗原HBsAg、HBeAg表達的抑制作用越明顯。當WTE

35、濃度為200g/mL、用藥144h后，HBsAg、HBeAg的抑制率可達40%左右。但是濃度為400 g/mL、用藥144h后，HBsAg、HBeAg的抑制率卻稍降，這可能與其接近半數毒性濃度（665.5 g/mL）有關。研究結果證實的WTE對于HBeAg表達有較強的抑制作用，這一點明顯不同于核苷類似物。HBeAg并不是病毒復制所必需的，到目前為止，人們對于它對病毒的復制、感染和發病的作用并不十分清楚，最近的幾項研究結果顯示，HBeAg可能是作為一個免疫調節因子在HBV的慢性持續感染中發揮重要作用，并且和造成感染者的免疫耐受狀態有關。前人的多項研究結果表明，茶提取物可以大大提高人體的免疫力，本

36、論文的研究結果暗示WTE可能在打破乙肝免疫耐受狀態，進而激發人體的免疫系統方面有潛在的應用價值。本實驗采用HepG2.2.15細胞模型來檢驗WTE的抗HBV細胞模型。以細胞模型來檢驗并評價抗乙肝病毒藥物，比動物模型更省時、方便、成本低，且不受機體免疫等因素的干擾。本實驗結果表明，WTE在體外實驗中能夠較有效地抑制HBsAg、HBeAg的分泌，從而抑制病毒的復制及表達。參考文獻1 鐘維情，金農綠葉茶業：燦爛盛開的白茶奇葩J.福建茶葉，2008，（4）:33-342 池玉洲福建白茶的基本特性及其藥理作用J.福建茶葉，2007，（2）:46-473 王立新茶多酚的保健功能（一）J.上海茶葉，2005

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