1、電泳分析法 1 1807-18091807-1809年，俄國物理學(xué)家年，俄國物理學(xué)家F.F.ReussF.F.Reuss首次發(fā)現(xiàn)黏土顆粒的電首次發(fā)現(xiàn)黏土顆粒的電 遷移現(xiàn)象，并開始研究帶電粒子在電場中的電遷移行為，測定它們遷移現(xiàn)象，并開始研究帶電粒子在電場中的電遷移行為，測定它們 的遷移速度。的遷移速度。 電泳的發(fā)展電泳的發(fā)展 19071907年，年，F(xiàn)ield Field 和和TeagueTeague研究出填充有瓊脂糖凝膠的橋管，成研究出填充有瓊脂糖凝膠的橋管，成 功地分離了白喉毒素和它的抗體。功地分離了白喉毒素和它的抗體。 7:42:392 1937年，蒂塞利烏斯年，蒂塞利烏斯 Tiseli

2、us，瑞典，瑞典)將蛋白質(zhì)混合液放在兩段緩將蛋白質(zhì)混合液放在兩段緩 沖溶液之間，兩端施以電壓進(jìn)行自由溶液電泳，第一次將人血清提沖溶液之間，兩端施以電壓進(jìn)行自由溶液電泳，第一次將人血清提 取的蛋白質(zhì)混合液分離出白蛋白和取的蛋白質(zhì)混合液分離出白蛋白和、球蛋白；發(fā)現(xiàn)樣品的遷移球蛋白；發(fā)現(xiàn)樣品的遷移 速度和方向由其速度和方向由其電荷和淌度電荷和淌度決定。決定。 第一次的自由溶液電泳；第一臺電泳儀；第一次的自由溶液電泳；第一臺電泳儀； 1948年，獲諾貝爾化學(xué)獎。年，獲諾貝爾化學(xué)獎。 7:42:393 1959年，Raymond和Weintraub利用人工合成的凝膠作為 支持電解質(zhì)，創(chuàng)造了聚丙烯酰胺凝膠

3、電泳，極大地提高了區(qū)帶 電泳的分辨率。 7:42:394 一、一、定義及原理定義及原理 1 1、電泳：、電泳：是指帶電粒子在電場中向與其自身帶相反電荷的電極移動的現(xiàn)象。是指帶電粒子在電場中向與其自身帶相反電荷的電極移動的現(xiàn)象。 2 2、原理、原理 電泳技術(shù)就是利用在電場作用下，根據(jù)電泳技術(shù)就是利用在電場作用下，根據(jù)待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大 小、性狀等性質(zhì)的差異小、性狀等性質(zhì)的差異，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而對樣品進(jìn)行分離、鑒定或提，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而對樣品進(jìn)行分離、鑒定或提 純。純。 3 3、應(yīng)用：電泳技術(shù)除了

4、用于小分子物質(zhì)、應(yīng)用：電泳技術(shù)除了用于小分子物質(zhì) ( (無機鹽、氨基酸、核苷酸、脂類無機鹽、氨基酸、核苷酸、脂類) )的分離分析外，的分離分析外， 最主要用于生物大分子最主要用于生物大分子 ( (蛋白質(zhì)、核酸、酶蛋白質(zhì)、核酸、酶) ) 的研究。的研究。 以生物大分子為例闡明電荷來源以生物大分子為例闡明電荷來源 R COOH NH3+ R COO- NH3+ R COO- NH2 + OH- + H+ + OH- + H+ pHpIpH=pI pH2時，時， 管壁的硅醇基（管壁的硅醇基（SiOH）離解成硅醇基陰離子（）離解成硅醇基陰離子（SiO ），使管 ），使管 壁帶負(fù)電荷，溶液壁帶負(fù)電荷，溶

5、液帶正電荷帶正電荷，在管壁和溶液之間形成雙電層。，在管壁和溶液之間形成雙電層。 Zeta電 位 54 由于溶液中的陽離子實際上是溶劑化的，由于溶液中的陽離子實際上是溶劑化的，在外電場的作用下，溶在外電場的作用下，溶 劑化的陽離子向負(fù)極移動，劑化的陽離子向負(fù)極移動，將引起柱中的溶液整體向負(fù)極移動，這將引起柱中的溶液整體向負(fù)極移動，這 就是毛細(xì)管電泳中的電滲現(xiàn)象。就是毛細(xì)管電泳中的電滲現(xiàn)象。 2。電滲流（。電滲流（electroosmotic flow，EOF） 電滲現(xiàn)象中整體電滲現(xiàn)象中整體 移動著的液體叫移動著的液體叫 電滲流。電滲流。 55 3. 電滲流的大小和方向電滲流的大小和方向 電滲流的

6、大小用電滲流的大小用電滲流速度電滲流速度vos表示，其大小決定于電滲淌表示，其大小決定于電滲淌 度度os和電場強度和電場強度E。即。即 、分別是電泳介質(zhì)的介電常數(shù)和粘度分別是電泳介質(zhì)的介電常數(shù)和粘度, 毛細(xì)管壁的毛細(xì)管壁的Zeta 電位，它近似等于電位，它近似等于擴(kuò)散層與緊密層界面上的電位擴(kuò)散層與緊密層界面上的電位。該。該界面內(nèi)凈電界面內(nèi)凈電 荷數(shù)（正電荷數(shù)）越多、擴(kuò)散層越厚，荷數(shù)（正電荷數(shù)）越多、擴(kuò)散層越厚，Zeta電位越大電位越大. 56 Lef毛細(xì)管有效長度； tos電滲流標(biāo)記物（中性物質(zhì)）的 遷移時間。 電滲流的速度是電泳速度的電滲流的速度是電泳速度的57倍。倍。 一般情況下，石英毛細(xì)

7、管內(nèi)壁表面帶負(fù)電荷，則電滲流帶正電一般情況下，石英毛細(xì)管內(nèi)壁表面帶負(fù)電荷，則電滲流帶正電 荷，向負(fù)極移動。但如果將荷，向負(fù)極移動。但如果將毛細(xì)管內(nèi)壁改性，毛細(xì)管內(nèi)壁改性，比如在在內(nèi)壁表面比如在在內(nèi)壁表面 涂漬或鍵合一層陽離子表面活性劑，將使壁表面帶正電荷，則電涂漬或鍵合一層陽離子表面活性劑，將使壁表面帶正電荷，則電 滲流帶負(fù)電荷，向正極移動。滲流帶負(fù)電荷，向正極移動。 VOS可通過實驗測定 57 在外電場驅(qū)動下產(chǎn)生的電滲流為平流，即塞式流形。液體流在外電場驅(qū)動下產(chǎn)生的電滲流為平流，即塞式流形。液體流 動速度除在管壁附近因摩擦力迅速減小到零以外，其余部分幾乎動速度除在管壁附近因摩擦力迅速減小到零

8、以外，其余部分幾乎 處處相等。這一點和處處相等。這一點和HPLC中靠泵驅(qū)動的流動相的流形完全不同。中靠泵驅(qū)動的流動相的流形完全不同。 4.電滲流的流形電滲流的流形 58 HPLC流動相的流形為拋物線形的層流，在管壁處的速度為流動相的流形為拋物線形的層流，在管壁處的速度為 零，管中心的速度是平均速度的零，管中心的速度是平均速度的2倍，倍，引起的譜峰展寬較大。引起的譜峰展寬較大。 電滲流呈平流，電滲流呈平流，引起的譜峰展寬很小，引起的譜峰展寬很小，是毛細(xì)管電泳能獲得較是毛細(xì)管電泳能獲得較 HPLC更高分離效率的重要原因。更高分離效率的重要原因。 4. 電滲流的作用電滲流的作用 電滲流通常流向負(fù)極，

9、電滲流速度約等于一般離子電泳速度的電滲流通常流向負(fù)極，電滲流速度約等于一般離子電泳速度的 57倍。所以，各種電性物質(zhì)在毛細(xì)管中的遷移速度為兩種速度倍。所以，各種電性物質(zhì)在毛細(xì)管中的遷移速度為兩種速度 的矢量和，稱為表觀電泳速度，用的矢量和，稱為表觀電泳速度，用vap表示。表示。 59 60 當(dāng)把試樣從陽極端注入到毛細(xì)管內(nèi)時，不同電性的粒子將按不當(dāng)把試樣從陽極端注入到毛細(xì)管內(nèi)時，不同電性的粒子將按不 同的速度向負(fù)極遷移，從負(fù)極端先后流出毛細(xì)管。出峰次序是：同的速度向負(fù)極遷移，從負(fù)極端先后流出毛細(xì)管。出峰次序是： 陽離子陽離子中性分子中性分子陰離子陰離子 中性分子與電滲流速度相同，不能互相分離。中

10、性分子與電滲流速度相同，不能互相分離。 v=E=(電滲流 電滲流 ep)E 61 + =電滲流 電滲流 + +ep 陽離子運動方向與電滲流一致； 陽離子運動方向與電滲流一致； - =電滲流 電滲流 - -ep 陰離子運動方向與電滲流相反； 陰離子運動方向與電滲流相反； 0 =電滲流 電滲流 中性粒子運動方向與電滲流一致； 中性粒子運動方向與電滲流一致； 電滲流具有像電滲流具有像HPLC中泵一樣的作用，推動離子前進(jìn)，加上不同中泵一樣的作用，推動離子前進(jìn)，加上不同 離子電泳速度和方向的差異，完成陽離子、陰離子和中性離子的分離子電泳速度和方向的差異，完成陽離子、陰離子和中性離子的分 離。離。 改變電

11、滲流的大小和方向，可以改變分離效率和選擇性。這是改變電滲流的大小和方向，可以改變分離效率和選擇性。這是 HPCE中優(yōu)化分離的重要因素。中優(yōu)化分離的重要因素。 電滲流在電滲流在HPCE HPCE 的分離中起著極其重要的作用：的分離中起著極其重要的作用： 電滲流的微小變化影響分離結(jié)果的重現(xiàn)性電滲流的微小變化影響分離結(jié)果的重現(xiàn)性（遷移時間和峰面（遷移時間和峰面 積）積） 。 電泳中影響電滲流的因素很多，應(yīng)設(shè)法控制電滲流的恒定。電泳中影響電滲流的因素很多，應(yīng)設(shè)法控制電滲流的恒定。 62 三、三、HPCEHPCE中影響電滲流的因素中影響電滲流的因素 1.1.電場強度的影響電場強度的影響 電滲流速度和電場

12、強度成正比，當(dāng)毛細(xì)管長度一定時，電滲流速電滲流速度和電場強度成正比，當(dāng)毛細(xì)管長度一定時，電滲流速 度正比于工作電壓。度正比于工作電壓。 2.2.毛細(xì)管材料的影響毛細(xì)管材料的影響 酸度影響毛細(xì)管的表面Si-OH基 的電離，特別是在pH47范圍內(nèi)， 影響更顯著，此時溶液pH值與 EOF成近線性關(guān)系 63 3. 3. 電解質(zhì)溶液性質(zhì)的影響電解質(zhì)溶液性質(zhì)的影響 （1 1）溶液）溶液pHpH的影響的影響 對于石英毛細(xì)管，溶液對于石英毛細(xì)管，溶液pHpH增高時，表面電離多，電荷密度增加，增高時，表面電離多，電荷密度增加， 管壁管壁zetazeta電勢增大，電滲流增大，電勢增大，電滲流增大，pH=7pH=7

13、，達(dá)到最大；，達(dá)到最大； pH3pH3，完全被，完全被 氫離子中和，表面電中性，電滲流為零。氫離子中和，表面電中性，電滲流為零。分析時，采用緩沖溶液來保分析時，采用緩沖溶液來保 持持pHpH穩(wěn)定。穩(wěn)定。 （2 2）緩沖液陰離子的影響）緩沖液陰離子的影響 在其他條件相同，濃度相同而陰離子不同時，毛細(xì)管中的電流有在其他條件相同，濃度相同而陰離子不同時，毛細(xì)管中的電流有 較大差別，產(chǎn)生的焦耳熱不同。較大差別，產(chǎn)生的焦耳熱不同。 64 緩沖溶液離子強度，影響雙電層的厚度、溶液粘度和工作電流， 明顯影響電滲流大小。緩沖溶液濃度增加，離子強度增加，電 滲流下降。 （3）緩沖液濃度（離子強度）的影響 65

14、66 4. 4. 溫度的影響溫度的影響 毛細(xì)管內(nèi)溫度的升高，使溶液的粘度下降，電滲流增大。毛細(xì)管內(nèi)溫度的升高，使溶液的粘度下降，電滲流增大。 溫度變化來自于溫度變化來自于“焦耳熱焦耳熱” 焦耳熱：毛細(xì)管溶液中有電流通過時，產(chǎn)生的熱量；焦耳熱：毛細(xì)管溶液中有電流通過時，產(chǎn)生的熱量； HPCEHPCE中的焦耳熱與背景電解質(zhì)的摩爾電導(dǎo)、濃度及電場強度成中的焦耳熱與背景電解質(zhì)的摩爾電導(dǎo)、濃度及電場強度成 正比。正比。 溫度每變化溫度每變化1 1度，將引起背景電解質(zhì)溶液粘度變化度，將引起背景電解質(zhì)溶液粘度變化2%2%3%3%； 67 5. 5. 添加劑的影響添加劑的影響 （1 1）加入濃度較大的中性鹽，

15、如）加入濃度較大的中性鹽，如K K2 2SOSO4 4，溶液離子強度增大，電滲流溶液離子強度增大，電滲流 減小減小。 （2 2）加入表面活性劑，可改變電滲流的大小和方向）加入表面活性劑，可改變電滲流的大小和方向 某些陽離子表面活性劑使電滲流減小，某些陰離子表面活性劑，某些陽離子表面活性劑使電滲流減小，某些陰離子表面活性劑， 如如十二烷基硫酸鈉（十二烷基硫酸鈉（SDSSDS），可以使壁表面負(fù)電荷增加，電滲流增大），可以使壁表面負(fù)電荷增加，電滲流增大 （3 3）加入有機溶劑如甲醇、乙腈，使溶液的粘度減小，電滲流增大。）加入有機溶劑如甲醇、乙腈，使溶液的粘度減小，電滲流增大。 68 第三節(jié)第三節(jié) 毛

16、細(xì)管電泳儀毛細(xì)管電泳儀 毛細(xì)管電泳儀結(jié)構(gòu)比高效液相色譜儀毛細(xì)管電泳儀結(jié)構(gòu)比高效液相色譜儀 簡單。簡單。CE只需高壓直流只需高壓直流 電源、進(jìn)樣裝置、毛細(xì)管和檢測器等。前三個部件均易實現(xiàn)電源、進(jìn)樣裝置、毛細(xì)管和檢測器等。前三個部件均易實現(xiàn), 困困 難之處在于檢測器。難之處在于檢測器。 69 70 HPCEHPCE儀器流程與主要部件 process and main assembly 電壓：電壓：0 03030kVkV； 分離柱不涂敷任何固定液；分離柱不涂敷任何固定液； 紫外或激光誘導(dǎo)熒光檢測器；紫外或激光誘導(dǎo)熒光檢測器； （可檢測到：（可檢測到：1010-19 -19 1010-21 -21 m

17、ol/L mol/L） 2021-5-4 1.1.高壓電源高壓電源 （1 1）0 03030 kV kV 穩(wěn)定、連續(xù)可調(diào)的直流電源；穩(wěn)定、連續(xù)可調(diào)的直流電源； （2 2）具有恒壓、恒流、恒功率輸出；）具有恒壓、恒流、恒功率輸出； （3 3）電場強度程序控制系統(tǒng)；）電場強度程序控制系統(tǒng)； （4 4）電壓穩(wěn)定性：）電壓穩(wěn)定性：0.1%0.1%； （5 5）電源極性易轉(zhuǎn)換；）電源極性易轉(zhuǎn)換； 2. 2. 毛細(xì)管柱毛細(xì)管柱 （1 1）材料：石英）材料：石英 （2 2）規(guī)格：內(nèi)徑）規(guī)格：內(nèi)徑20207575m m，外徑外徑350350 400400m m；長度長度=1 電泳 電泳, , 陰離子在負(fù)極最后

18、流出。陰離子在負(fù)極最后流出。 CZE是最基本、應(yīng)用最廣的分離模式 75 76 77 4.24.2、膠束電動毛細(xì)管色譜（、膠束電動毛細(xì)管色譜（MECCMECC或或MEKCMEKC） 膠束電動毛細(xì)管色譜是在緩沖溶液中加入濃度高于膠束臨界膠束電動毛細(xì)管色譜是在緩沖溶液中加入濃度高于膠束臨界 濃度的表面活性劑，膠束相在分離中起到了濃度的表面活性劑，膠束相在分離中起到了準(zhǔn)固定相的作用，是準(zhǔn)固定相的作用，是 電泳技術(shù)與色譜技術(shù)的結(jié)合。電泳技術(shù)與色譜技術(shù)的結(jié)合。 把離子型表面活性劑把離子型表面活性劑 (如十二烷基硫酸鈉如十二烷基硫酸鈉)加到緩沖液中加到緩沖液中, 當(dāng)其當(dāng)其 濃度超過臨界濃度后就形成有一疏水內(nèi)

19、核、外部帶負(fù)電的膠束。濃度超過臨界濃度后就形成有一疏水內(nèi)核、外部帶負(fù)電的膠束。 雖然膠束帶負(fù)電雖然膠束帶負(fù)電, 但電滲流的速度仍大于膠束的遷移速度但電滲流的速度仍大于膠束的遷移速度, 故膠束故膠束 將慢速向負(fù)極移動。將慢速向負(fù)極移動。 （一）分離原理 78 79 中性粒子按其疏水性不同，在緩沖溶液（流動相）和膠束 （準(zhǔn)固定相）之間分配。疏水性強、親水性弱的粒子分配到 膠束中的多，分配到緩沖溶液中的少；反之，親水性強、疏 水性弱的溶質(zhì)分配到膠束中的少，分配到緩沖溶液中的多。 當(dāng)溶質(zhì)進(jìn)入膠束時，以膠束的速度慢速遷移；溶質(zhì)進(jìn)入緩沖 溶液時，以電滲的速度快速前移。分配系數(shù)越大的粒子，在 柱中遷移速度慢

20、，從而使疏水性稍有差別的中性物質(zhì)在電泳 中得以分離。 80 MECC的突出優(yōu)點是除能分離離子化合物外，還能分離不帶電 荷的中性化合物。 （二）分離條件的選擇 膠束準(zhǔn)固定相對MECC分離過程起著重要作用。 準(zhǔn)固定相為各類表面活性劑，對其要求是： 膠束的粘度小； 水溶性好 形成的膠束必須均勻、透明，不吸收UV光 臨界膠束濃度CMC不宜太高 膠束具有足夠的穩(wěn)定性 81 類類 型型表面活性劑表面活性劑CMC（10-3mol/L） 陰離子表面活性劑陰離子表面活性劑十二烷基硫酸鈉（十二烷基硫酸鈉（SDS）8.1 十四烷基硫酸鈉（十四烷基硫酸鈉（STS）2.1 N-月桂酰月桂酰-N-甲基牛磺酸鈉（甲基牛磺酸

21、鈉（LMT）8.7 聚氧乙烯醚基十二烷基硫酸鈉聚氧乙烯醚基十二烷基硫酸鈉2.8 兩性離子表面活性劑兩性離子表面活性劑N-十二酰基十二酰基-L-氨酸鈉（氨酸鈉（SDVal）5.7 陽離子表面活性劑陽離子表面活性劑十二烷基三甲基氯化銨（十二烷基三甲基氯化銨（DTAC）16 十二烷基三甲基溴化銨（十二烷基三甲基溴化銨（DTAB）15 十四烷基三甲基溴化銨（十四烷基三甲基溴化銨（TTAB）3.5 十六烷基三甲基溴化銨（十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）0.92 一些常用的表面活性劑及其臨界濃度一些常用的表面活性劑及其臨界濃度 82 83 MECC的突出優(yōu)點是除能分離離子化合物外，還能分離不帶電 荷的中性

22、化合物。 （二）分離條件的選擇 膠束準(zhǔn)固定相對MECC分離過程起著重要作用。 準(zhǔn)固定相為各類表面活性劑，對其要求是： 膠束的粘度小； 水溶性好 形成的膠束必須均勻、透明，不吸收UV光 臨界膠束濃度CMC不宜太高 膠束具有足夠的穩(wěn)定性 84 類類 型型表面活性劑表面活性劑CMC（10-3mol/L） 陰離子表面活性劑陰離子表面活性劑十二烷基硫酸鈉（十二烷基硫酸鈉（SDS）8.1 十四烷基硫酸鈉（十四烷基硫酸鈉（STS）2.1 N-月桂酰月桂酰-N-甲基牛磺酸鈉（甲基牛磺酸鈉（LMT）8.7 聚氧乙烯醚基十二烷基硫酸鈉聚氧乙烯醚基十二烷基硫酸鈉2.8 兩性離子表面活性劑兩性離子表面活性劑N-十二酰

23、基十二酰基-L-氨酸鈉（氨酸鈉（SDVal）5.7 陽離子表面活性劑陽離子表面活性劑十二烷基三甲基氯化銨（十二烷基三甲基氯化銨（DTAC）16 十二烷基三甲基溴化銨（十二烷基三甲基溴化銨（DTAB）15 十四烷基三甲基溴化銨（十四烷基三甲基溴化銨（TTAB）3.5 十六烷基三甲基溴化銨（十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）0.92 一些常用的表面活性劑及其臨界濃度一些常用的表面活性劑及其臨界濃度 85 86 4.34.3、毛細(xì)管凝膠電泳（、毛細(xì)管凝膠電泳（CGECGE） 將聚丙烯酰胺等在毛細(xì)管柱內(nèi)交聯(lián)生成凝膠。將聚丙烯酰胺等在毛細(xì)管柱內(nèi)交聯(lián)生成凝膠。 其具有多孔性，類似分子篩的作用，試樣分子按大小

24、分離。能夠其具有多孔性，類似分子篩的作用，試樣分子按大小分離。能夠 有效減小組分?jǐn)U散，所得峰型尖銳，分離效率高。有效減小組分?jǐn)U散，所得峰型尖銳，分離效率高。 蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)、DNA等的電荷等的電荷/質(zhì)量比與分子大小無關(guān)，質(zhì)量比與分子大小無關(guān)，CZE模式很難分模式很難分 離，采用離，采用CGE能獲得良好分離，能獲得良好分離，DAN排序的重要手段。排序的重要手段。 特點特點：抗對流性好，散熱性好，分離度極高。：抗對流性好，散熱性好，分離度極高。 無膠篩分技術(shù)無膠篩分技術(shù)：采用低粘度的線性聚合物溶液代替高粘度交聯(lián)聚：采用低粘度的線性聚合物溶液代替高粘度交聯(lián)聚 丙烯酰胺。柱便宜、易制備。丙烯酰胺。柱便

25、宜、易制備。 87 酶解的雙螺旋DNA限制性片段的分離 88 1. 1. 根據(jù)等電點差別分離生物大分子的高分辨率電泳技術(shù)；根據(jù)等電點差別分離生物大分子的高分辨率電泳技術(shù)； 2. 2. 毛細(xì)管內(nèi)充有兩性電解質(zhì)（合成的具有不同等電點范圍的脂肪族多胺基多羧毛細(xì)管內(nèi)充有兩性電解質(zhì)（合成的具有不同等電點范圍的脂肪族多胺基多羧 酸混合物），當(dāng)施加直流電壓（酸混合物），當(dāng)施加直流電壓（6 68 8V V）時，管內(nèi)將建立一個由陽極到陰極逐步升時，管內(nèi)將建立一個由陽極到陰極逐步升 高的高的pHpH梯度；梯度； 3. 3. 氨基酸、蛋白質(zhì)、多肽等的所帶電荷與溶液氨基酸、蛋白質(zhì)、多肽等的所帶電荷與溶液pHpH有關(guān)，

26、在酸性溶液中帶正電荷，有關(guān)，在酸性溶液中帶正電荷， 反之帶負(fù)電荷。在其等電點時，呈電中性，淌度為零；反之帶負(fù)電荷。在其等電點時，呈電中性，淌度為零； 4.44.4、毛細(xì)管等電聚焦capillary isoelectric focusing，CIEF 2021-5-4 4. 4. 聚焦：具有不同等電點的生物試樣在電場力的作用下遷移，分別到達(dá)滿聚焦：具有不同等電點的生物試樣在電場力的作用下遷移，分別到達(dá)滿 足其等電點足其等電點pHpH的位置時，呈電中性，停止移動，形成窄溶質(zhì)帶而相互分離；的位置時，呈電中性，停止移動，形成窄溶質(zhì)帶而相互分離； 5. 5. 陽極端裝稀磷酸溶液，陰極端裝稀陽極端裝稀磷酸

27、溶液，陰極端裝稀NaOHNaOH溶液；溶液； 6. 6. 加壓將毛細(xì)管內(nèi)分離后的溶液推出經(jīng)過檢測器檢測；加壓將毛細(xì)管內(nèi)分離后的溶液推出經(jīng)過檢測器檢測； 7. 7. 電滲流在電滲流在CIEFCIEF中不利，應(yīng)消除或減小。中不利，應(yīng)消除或減小。 2021-5-4 影響電泳遷移率的因素影響電泳遷移率的因素(必考必考)： 1、影響電泳遷移率的外界因素：、影響電泳遷移率的外界因素： J電場強度電場強度 J溶液的溶液的pH值值 J溶液的離子強度溶液的離子強度 J電滲現(xiàn)象電滲現(xiàn)象 J溶液的溫度和黏度溶液的溫度和黏度 J分子篩效應(yīng)分子篩效應(yīng) 2.影響電泳遷移率的內(nèi)在因素：影響電泳遷移率的內(nèi)在因素： J質(zhì)點所帶

28、凈電荷的量質(zhì)點所帶凈電荷的量 J質(zhì)點的大小和形狀質(zhì)點的大小和形狀 十二烷基十二烷基磺磺酸鈉酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE），簡稱），簡稱 SDS電泳電泳，主要用于，主要用于測定蛋白質(zhì)分子量研測定蛋白質(zhì)分子量研 究究。 (五五) 十二烷基十二烷基磺磺酸鈉酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳 在聚丙烯酰胺凝膠中加入在聚丙烯酰胺凝膠中加入陰離子陰離子表面活性劑十二烷基表面活性劑十二烷基磺磺酸鈉（酸鈉（SDS），不影響凝），不影響凝 膠的形成，不影響蛋白質(zhì)的電泳遷移率，蛋白質(zhì)的電泳遷移率主要取決于其膠的形成，不影響蛋白質(zhì)的電泳遷移率，蛋白質(zhì)的電泳遷移率主要取決于其自自 身分子量的大小身分子量的大小。 三、三、HPCEHPCE中影響電滲流的因素中影響電滲流的因素 1.1.電場強度的影響電場強度的影響 電滲流速度和電場強度成正比，當(dāng)毛細(xì)管長度一定時，電滲流速電滲流速度和電場強度成正比，當(dāng)毛細(xì)管長度一定時，電滲流速 度正比于工作電壓。度正比于工作電壓。 2.2.毛