1、FGF10單克隆抗體對銀屑病皮損治療作用研究課題申報書提綱一、課題概述銀屑病是一種常見的多發的受多基因控制的慢性炎癥性皮膚病，其重要組織病理學的特征性表現為角質形成細胞(kerati no cyte,KC) 過度增生，棘層增厚以 及真皮血管擴張同時伴有炎細胞浸潤為主要表現的皮膚病。病因和發病機制尚不 完全清楚，考慮與遺傳、感染、代謝障礙、內分泌紊亂及免疫因素等有關1 0關于銀屑病的治療，目前國內外傳統的治療方法主要有以下幾種：1、全身用藥, 口服維甲酸，口服免疫抑制劑如環抱素、雷公藤，靜脈給與免疫調節劑等。2、光化學療法。3、外用制劑，如達力士、皮質類固醇激素和維甲酸類外用藥等。4、 中醫中藥

2、口服和外用。近幾年，基于銀屑病是以淋巴細胞異常活化為始發環節的 免疫炎性疾病的理論，人們開發了多種抑制 T淋巴細胞異常活化和異常活化后 釋放的各種細胞因子的藥物，迄今己出現了與此概念相關的20余種用于治療銀屑病的生物制品，其作用機制涵蓋了從 T細胞激活的起始點及各中間環節，如 抑制抗原提呈細胞(APC的抗原提呈功能、抑制T細胞的活化和增殖、抑制T 細胞粘附、抑制炎癥細胞因子的生成或活性、利用細胞因子的免疫調節作用等 2-4 o這些生物治療藥物較傳統的免疫抑制劑選擇性高，可通過聯合療法來發揮 作用，表現出較好的發展前景。研究表明，活化的T淋巴細胞、炎性細胞、成纖維細胞及相互作用產生的 細胞因子和

3、炎癥介質是造成銀屑病病理生理異常的物質基礎，對于這些細胞因子和炎癥介質的異常改變，任何對銀屑病的病理生理研究和任何治療藥物必然直接 或間接地涉及。體內和體外的研究都表明，在銀屑病形成過程中，在一些生長 因子的作用下KC表現為異常增殖和分化，如表皮生長因子、轉化生長因子a和成纖維細胞生長因子等，其中成纖維細胞生長因子10 (fibroblast growthfactorslO, FGF10對KC勺異常增殖和分化可能起著重要的調節作用，郗彥萍 7等采用組織切片免疫組化技術檢測 FGF1（在尋常型銀屑病患者皮損、非皮損及 正常皮膚中的分布，研究了成纖維細胞生長因子10及其mRN在尋常型銀屑病皮損 中

4、表達情況。研究結果顯示銀屑病真皮浸潤的激活的淋巴細胞可分泌一些細胞因 子，這些細胞因子作用于真皮成纖維細胞后，可能產生FGF10后者可能對維持銀屑病角質形成細胞呈持續過度增殖狀態密切相關。在尋常型銀屑病皮損中，FGF10 mRNA性主要表達于其表皮的基底層或棘層，以表皮的中下層表達較明 顯，角質層及顆粒層不顯示陽性表達。陽性表達主要定位于細胞質、部分位于細 胞核內。在真皮淺層浸潤的淋巴細胞以及成纖維細胞的胞質中也可見陽性表達， 在汗腺上皮細胞中呈強陽性表達；尋常型銀屑病非皮損處的表皮中，FGFIOmRNA陽性表達于表皮的中下層的細胞質內；正常皮膚FGF10mR-NA性僅表達于表皮的 基底層細胞

5、，且表達較弱。FGF10mRN檢測陽性率在皮損組與正常皮膚組、非皮 損組與正常皮膚組比較，差異均有統計學意義（P均0.05）,三組間半定量結果比較，差異均有統計學意義 （P0.05）。FGF10mRN在銀屑病的顆粒層、角質層中表達為陰性，在表皮的下層 陽性率較高，從而對 K產生明顯的促增殖作用。因此，FGF10 mRNA在銀屑病KC異常增殖中起重要的作用。國外學者Kovacs等的研究也表明，銀屑病皮損中 激活的淋巴細胞能刺激成纖維細胞產生 KG和 FGF10其結果是維持角質形成細胞 呈持續過度增殖的狀態。郗彥萍與Kovacs所報道的FGF1在尋常型銀屑病皮損中 的檢測結果基本一致。以上學者的研

6、究結果均表明FGF10在銀屑病表皮角質形 成細胞的增生、分化中起重要作用，參與其發病過程。目前公認銀屑病是由 CD4+Th1淋巴細胞和多種細胞因子介導的自身免疫紊 亂性疾病9,生物制劑以阻斷不同的免疫環節為靶點，治療中重度銀屑病療效顯著。歐美國家已廣泛應用于銀屑病等免疫介導的炎癥性疾病，展示了顯著的療效及良好的安全性10。如：抗CD20抗體（利妥昔），治療天皰瘡，Kirby等用其與 甲氨蝶吟聯合治療頑固的斑塊型銀屑病取得了滿意的效果；抗IgE抗體治療特應性皮炎以及其他相關的過敏性疾病都有較好的療效；抗IL-8單克隆抗體能夠一直銀屑病表皮角質形成細胞的過度增生，東蕪宏遠逸士生物技術藥業有限公司研

7、 制生產了抗人白細胞介素-8 (IL-8 )單克隆抗體乳膏。因此，這種新方法受到大 家的廣泛關注，特別是近年隨著基因工程抗體技術的飛速發展，抗體療法從實驗 研究逐漸向臨床應用過渡，在銀屑病的治療中展示出良好的前景。目前國內郗彥 萍等采用組織切片免疫組化技術檢測 FGF1(在尋常型銀屑病患者皮損、非皮損及 正常皮膚中的分布。結果表明，尋常型銀屑病皮損、非皮損中FGF10的陽性檢測 結果均明顯高于對照組，說明 FGF10在銀屑病KC異常增殖中起重要的作用。國 外研究學者Kovacs等研究結果顯示：銀屑病皮損中激活的淋巴細胞能刺激成纖 維細胞產生FGF10從而維持KC呈持續過度增殖的狀態。這些提示了

8、，成纖維 細胞釋放的FGF10可能對銀屑病的KC增值具有重要的作用，參與其發病過程。 目前國內所見FGF10單克隆抗體研究的文獻報道為本實驗室本項目組成員發表。 國外，FGF10單克隆抗體應用于銀屑病方面也未見報道。我們擬采用FGF10的單克隆抗體作為藥物對患處組織中高表達的FGF10進行拮抗，從而阻斷或緩解角質細胞的過度增殖，達到對銀屑病的治療目的。本項目已經獲得校內青年啟動基金 2萬元的資助，項目已經啟動，開展了一 些前期工作，我們將已獲得的高純度FGF10蛋白與弗氏佐劑充分乳化作為免疫抗 原，免疫BALB/c小鼠后，將脾臟中的免疫淋巴B細胞與小鼠骨髓瘤細胞 SP2/0 融合，并對融合細胞

9、所分泌抗體的特異性進行篩選。經過3次亞克隆，獲得1株可穩定分泌抗FGF10單克隆抗體的雜交瘤細胞株2G6,并對雜交瘤細胞株分泌 的抗體特性進行了分析，經復蘇及多次傳代后雜交瘤細胞株仍能穩定分泌單克隆 抗體，其產生抗體亞類為IgG1。細胞培養上清的抗體效價達到 1:3200；誘生小 鼠腹水的抗體效價為1:25600； 2G6腹水經辛酸-硫酸銨方法純化后，蛋白質含量 為3.71mg/mL;腹水經純化后抗體效價為1:12800。本研究目前完成了 FGF10單 克隆抗體的制備、鑒定及純化，這為下一步實驗的順利進行準備了必需的材料， 為項目的深入研究奠定了基礎。在以上研究背景啟示下，我們用雜交瘤技術制備

10、FGF10單克隆抗體(FGF10McAb,擬利用HaCaP田胞體外培養，研究 FGF1（以及FGFICMcAb對HaCaT細胞培養引起的增殖、抑制、細胞周期、凋亡改變，模擬銀屑病KC增殖，以求進一步明確FGF10及 FGF10 McAb在銀屑病表皮過度增殖機制的作用。在此基礎上，進 一步深入觀察FGFIOMcAb對小鼠及豚鼠銀屑病模型的治療作用，最終確認這一 新的藥物靶點，為研究銀屑病新的生物治療奠定基礎。主要參考文獻：1 Szell M, Bata-Csorgo Z, Koreck A, et al. Proliferat ing kerat ino cytes are putative s

11、ources of the psoriasis susceptibility- related EDA+ (extra doma in A of fibro nectin) on cofetal fibro necti n. J In-vest Dermatol 2004;123:537-546.2 COTTLIEBAB.Psoriasis:immuno -pathology -and-immunomodulation.DermatolCIin,2001 ,19:649-657.3 KREUGER G,ELLIS C N.Psoriasis-recent advances in underst

12、anding its pathogenesis and treatme nt.J Am Axad Dermatol,2005,53:S94-S1004 MAN Xiao-yong, ZHENG Min (滿孝勇，鄭敏).Advances in pathogenesis ofpsoriasis.Journal of Zhejiang University:MedicalSciences(浙江大學學報:醫學版),2006,35(6):673-677.(in Chi nese)5: 顏文飛，孫國均,鄭敏.角質形成細胞生長因子與銀屑病的關系.國外醫學皮膚性病學分冊,2001,27(1):10-126:

13、 郗彥萍，于春水，譚升順,周艷，張磐諫.成纖維細胞生長因子10在尋常型銀屑病皮損中的檢測.中國皮膚性病學雜志，2006,20(11):671-674.7: 郗彥萍，于春水，譚升順,周艷，張磐諫.成纖維細胞生長因子10mRNA在尋常型銀屑病皮損中的表達.第四軍醫大學學報，2007,28(2):150-153.8 KovacsM, FalchiG, Cardi naliS, eta .l Immuno histochemical an alysis of kerati no cyte growth factor and fibrblast growth factor 10 expressi on

14、in psoriasis.Exp Dermato,l 2005, 14(2): 130-137.9 Griffiths CE.The immuno logical basis of psoriasis.J Eur A cad Demato l Ven ereol.2003,17(Suppl 2):1-510李紅，周瀾華.銀屑病的生物治療新進展中國皮膚性病學雜志.2010,24（9）:863-864.二、課題的目標與任務1. 課題目標與任務需求分析本項目總體目標：擬用雜交瘤技術制備FGF1單克隆抗體，擬利用HaCaT細胞體外培養，研究FGF1以及FGF10 McAb寸HaCa細胞培養引起的增殖、

15、抑制、 細胞周期、凋亡改變，模擬銀屑病 KC增殖，以求進一步明確FGF1及FGF10 McAb 在銀屑病表皮過度增殖機制的作用。在此基礎上，我們進一步深入觀察FGF10McAb寸小鼠及豚鼠銀屑病模型的治療作用，以FGF1（單克隆抗體作為藥物對患 處組織中高表達的FGF1進行拮抗，從而阻斷或緩解角質細胞的過度增殖，達到 對銀屑病的治療目的。最終確認這一新的藥物靶點，為研究銀屑病新的生物治療 奠定基礎。2. 課題目標與任務解決的主要技術難點和問題分析制備FGF1單克隆抗體，研究FGF1（以及FGF10 McA對HaCaT田胞培養引起的 增殖、抑制、細胞周期、凋亡改變，模擬銀屑病 KC增殖，以求進一

16、步明確FGF10 及FGF1CMCA在銀屑病表皮過度增殖機制的作用。在此基礎上，進一步深入觀察 FGF10 McA對小鼠及豚鼠銀屑病模型的治療作用，采用FGF1單克隆抗體作為藥 物對患處組織中高表達KGF-21行拮抗，從而阻斷或緩解角質細胞的過度增殖， 達到對銀屑病的治療目的。最終確認這一新的藥物靶點，為研究銀屑病新的生物 治療奠定基礎。三、現有工作基礎與優勢1. 國內外現有技術、知識產權和技術標準現狀及預期分析單克隆抗體素有“生物導彈”之稱，利用單克隆抗體靶向病變組織活細胞上 表面抗原已成為理想的靶向治療方法。其特點是在局部阻斷損害皮膚的自身免疫 反應，而避免影響全身免疫系統的正常功能。目前

17、已有多種有報道的單克隆抗體 藥物應用于皮膚病等治療，如：抗CD2航體（利妥昔），治療天皰瘡，Kirby等用 其與甲氨蝶呤聯合治療頑固的斑塊型銀屑病取得了滿意的效果；抗IgE抗體治療特應性皮炎以及其他相關的過敏性疾病都有較好的療效；抗IL-8單克隆抗體能夠抑制銀屑病表皮角質形成細胞的過度增生，東蕪宏遠逸士生物技術藥業有限公司 研制生產了抗人白細胞介素-8（ IL-8 ）單克隆抗體乳膏。因此，這種新方法受到 眾多研究者的廣泛關注，特別是近年隨著基因工程抗體技術的飛速發展，抗體療 法從實驗研究逐漸向臨床應用過渡，在銀屑病的治療中展示出良好的前景。2. 課題申請單位及主要參與單位研究基礎（已有的研究開

18、 發經歷，科技成果、科研條件與研究開發隊伍現狀等）（1）本項目研究基礎本項目組將KGF-2蛋白與弗氏佐劑充分乳化作為免疫抗原，免疫BALB/c小鼠后，采用50%的PEG4000為細胞融合劑，將脾臟中的免疫淋巴 B細胞與小 鼠骨髓瘤細胞SP2/0融合，后用間接ELISA方法對融合細胞所分泌抗體的特異 性進行篩選。經過3次亞克隆，獲得1株可穩定分泌抗KGF-2單克隆抗體的雜 交瘤細胞株2G6。具體如下：（1）免疫效果經過3次腹部皮下多點注射免疫，4只小鼠均產生抗FGF1航體。抗血清的效 價達到1:3200，符合細胞融合的要求，取脾融合（見表 1、圖1）。表1小鼠血清抗體效價測定結果抗體稀釋倍數鼠1

19、鼠2鼠3鼠41:8001.8731.8021.9221.8271:16001.4641.3971.4921.4131:32001.0720.9831.2071.138空白對照0.0580.0560.0580.057陰性對照0.2020.2070.2040.202圖1經免疫后小鼠的脾臟圖2融合后第7天生長狀態(2) ELISA條件的確定通過棋盤滴定法的篩選，摸索了間接ELISA檢測方法檢測血清效價的最佳條 件。FGF1啦原包被濃度：500ng/mL; 1%BSA勺PBST容液做為封閉液；酶標二抗 稀釋倍數：1:2000。(3) 細胞融合結果進行了 3次細胞融合，第一次融合率較低，第二、三次融合的

20、融合率依次有 所提高；經間接ELISA篩選，第三次融合后得到陽性細胞株 28株，共得到陽性 細胞株41株。經過對融合陽性孔連續3次克隆篩選，最后陽性率100%勺雜交瘤 細胞中選出最好的細胞傳瓶擴大培養，最終得到1株能夠穩定分泌抗FGF10單克 隆抗體的雜交瘤細胞株2G6細胞生長狀況見圖2;細胞融合結果見表2。表2細胞融合率及陽性率融合次數分裝孔數克隆生長數融合率 陽性孔數陽性率1288124.2%216.7%23846717.4%1116.4%32889834%2828.6%(4)單抗亞類的鑒定按照試劑盒說明，利用抗原介導的ELISA法檢測雜交瘤細胞株2G6的亞類類 型，見表3,結果表明該抗體

21、為IgG1型。表3單抗亞類鑒定細胞株IgAIgM IgG1IgG2aIgG2bIgG32G60.0810.1720.1210.1010.1200.10312345(5)抗體腹水及純化后SDS-PAG電泳結果腹水及純化后腹水經SDS-PAG分析(圖3)顯示，未純化的樣品雜蛋白帶較多， 純化后的單克隆抗體有明顯的兩條帶，分別為抗體的輕鏈和重鏈。說明腹水經純 化后絕大部分雜蛋白被除去。利用Maker(97.2、66.4、44.3、29.0、20.1、14.3KD8 中的標準蛋97 KD66KD43KD31KD20 KD14KD圖3 腹水SDS-PAG結果1. Marker 2 、3.未純化的腹水純化

22、后腹水4 、5.純化后腹水白在凝膠中的相對遷移與分子量的關系做標準曲線，橫坐標為標準蛋白的相對遷 移率，縱坐標為分子量的對數。用Excel進行曲線擬合并求回歸方程。將2G6分 泌抗體的重鏈和輕鏈在凝膠中的相對遷移率代入回歸方程。分別計算出其分子量，再根據IgG中重鏈和輕鏈的比例關系，計算得出2G6分泌抗體分子量約為161KDa(2)工作條件 工作基礎：本項目申請人主要從事生物制藥相關工作，主要研究方向為 抗體免疫、細胞生物活性。目前主持該方面的省級基金1項，主持校內啟動基金 1項，并同時參與國家級省級項目2項，發表文章8篇，課題組已經成功制備了 FGF10單克隆抗體并進行了鑒定及純化，并發表相

23、關文章 2篇，因此工作基礎較 好，完全有能力完成該項工作。 技術準備：本項目組人員長期以來，從事生長因子研究工作。本項目申 請人所在課題組依托于工程研究中心，主要以生物反應器及新型藥物的基礎研 究、應用開發、工程轉化為主，主要開展各種成纖維細胞生長因子的研究工作。 本項目申請人所從事專業為細胞生物學，熟練掌握單克隆抗體制備技術、Western Blot、免疫組織化學、免疫細胞化學等分子生物學方法， 為本項目的順利實施積 累了可行的技術和方法。因此工作基礎好，完全有能力完成該項工作。 儀器設備：本課題依附于工程中心，在分子生物學與動物細胞培養方面， 經歷幾年的建設，投入了 2000萬元購置了大批

24、國外先進設備，其基礎設施方面 達到國內領先水平。目前中心已具備了分子生物學細胞生物學的常規和現代儀器 設備，包括PCF儀、流式細胞儀、激光共聚焦顯微鏡、CO2培養箱、倒置顯微鏡、 高速低溫離心機、超低溫冰箱、超凈工作臺、凝膠成像系統等，并具備實驗條件 良好的細胞培養室。為本實驗的順利完成提供了實施保障。動物實驗部分在團隊 的合作單位某大學動物中心進行，銀屑病模型制備方法已經成熟，為確保實驗的 準確，本項目分別選用小鼠和豚鼠，分別用不同的方法制作銀屑病樣皮炎的動物 模型，觀察FGF10 McAI膏劑對銀屑病皮損的治療作用。目前的實驗條件能夠保 證本實驗的順利進行。 人員配備：本課題組配備了與本項

25、目研究有關的從事細胞生物學、 動物 免疫學、生物技術等方面的專業人員和研究生， 人員結構合理，有能力完成本項 目所擬定的研究內容。 動物實驗部分：在吉林大學動物中心進行，銀屑病模型制備方法已經成 熟，為確保實驗的準確，本項目分別選用小鼠和豚鼠，分別用不同的方法制作銀 屑病樣皮炎的動物模型，觀察 FGF10 McAI膏劑對銀屑病皮損的治療作用。目前 的實驗條件能夠保證本實驗的順利進行。四、任務分解與考核指標1. 課題研究內容、技術路線和創新點課題的研究內容 通過雜交瘤技術，建立穩定分泌 FGF10 McAb雜交瘤細胞株將FGF10蛋白與弗氏佐劑充分乳化作為免疫抗原，免疫BALB/c小鼠后，采用5

26、0%勺PEG400為細胞融合劑，將脾臟中的免疫淋巴B細胞與小鼠骨髓瘤細胞 SP2/0融合，后用間接ELISA方法對融合細胞所分泌抗體的特異性進行篩選。經 過3次亞克隆，獲得可穩定分泌抗 FGF10單克隆抗體的雜交瘤細胞株。 FGF10 McAb的大量生產及純化及鑒定，得到高親和力的FGF10 McAb將雜交瘤細胞懸浮后置于24孔細胞培養板中，補加適量培養液培養。待細 胞長滿后用上述同樣的方法轉入 50mL細胞培養瓶中擴大培養。經過多次傳代培 養后，選取生長狀態良好的細胞凍存。采用小鼠腹水法大量制備單克隆抗體。 研究FGF10及FGF10 McAb寸HaCaT細胞增殖的影響HaCaT細胞是正常突

27、變的永生化人角質形成細胞株，許多生物學特性與原代 KC相同,Finch等學者也都采用HaCa細胞株研究銀屑病的病理生理改變，模擬銀 屑病KC增殖。本研究也采用這種方法，觀察被干預后 HaCaTffl胞的增殖、分化 和凋亡情況。a MTT法檢側FGF1C對HaCaT胞增殖的影響文獻報告銀屑病FGF10表達增高，本實驗擬用作FGF10為誘導劑，檢測FGF10 對HaCaTffl胞增殖作用，從體外實驗層面研究 FGF10對HaCaTffl胞增殖的影響, 并在實驗中確定FGF10作為增殖誘導劑在后繼研究中的最佳誘導濃度。b MTT法檢測FGF10 McAb對HaCa細胞增殖的影響文獻報告銀屑病FGF1

28、表達增高，本實驗擬用作FGF10 McA為拮抗劑，檢測FGFIOMcAtfHaCa細胞增殖抑制作用，從體外實驗層面研究FGF1對HaCaT田胞增 殖抑制的影響,并在實驗中確定FGFIOMcAlb為拮抗劑在后繼研究中的最佳誘導 濃度。 研究FGF1O McAb對銀屑病動物模型的治療作用a小鼠銀屑病模型的建立：觀察FGF1抗體膏劑對雌激素期小鼠陰道上皮細 胞有絲分裂的影響。選取體重2030 g的ICR小鼠32只（由某大學實驗動物中心提 供），給雌性小鼠腹腔注射己烯雌酚,連續3 d, 0.2 mg/次,1次/d,使小鼠陰 道上皮處于雌激素期。第4天將小鼠分為4組進行實驗，每組8只，第1組為空 白對照

29、組，第2組為陽性對照（維A酸乳膏）組，第3組為KGF抗體膏劑低劑量 組，第4組為KGF抗體膏劑高劑量組。于每日晨8:00開始局部給藥。連續3 d。 于末次給藥當天上午9:00給每只小鼠腹腔注射秋水仙堿2 mg/kg體重，使細胞 有絲分裂周期停滯于有絲分裂中期，便于計數。6h后斷頸殺死小鼠，切取陰道 組織,用10%畐爾馬林溶液固定，石蠟包埋，HE染色。在光鏡下，計數300個基 底細胞中的有絲分裂數，折算出每100個基底細胞中的有絲分裂數，為有絲分 裂指數，比較各組小鼠陰道上皮細胞的有絲分裂指數。b豚鼠銀屑病模型的建立： 豚鼠銀屑病模型的建立：觀察 FGF10抗體膏劑 對鹽酸普萘洛爾所致豚鼠耳部皮

30、膚銀屑樣皮損模型的影響。 取鹽酸普萘洛爾5g， 以50 %乙醇為溶劑，使藥物溶解，加入Azone （氮酮）一丙二醇5ml作為復合 促進劑，加入PVPK30（聚乙烯基吡咯烷酮均聚物）5g為成膜材料，補加50 %乙 醇至100ml ,制備鹽酸普萘洛爾乳搽劑。取體重 350450g豚鼠38只，雌雄各 半,隨機分成空白組10只,模型組28只。模型組每只動物用玻璃棒以5 %鹽酸普 萘洛爾乳搽劑涂左側耳廓皮膚（0.3g/cm2）,每日2次,連續2周。末次給藥后殺 死正常組和模型組各 4只豚鼠分別取左側耳廓皮膚標本,甲醛固定,HE染色,光 鏡觀察,以此評價造模質量。將模型組剩余的24只豚鼠隨機分成4組,即模

31、型組、陽性藥對照組、FGF10 膏劑低劑量組、KGF抗體膏劑高劑量組。模型組不用任何藥物，作為皮損模型自 然恢復對照組；用藥2周后,取豚鼠左側耳廓皮膚,用10 %福爾馬林固定,石蠟包 埋,HE染色,觀察耳部皮膚角質層、顆粒層、棘細胞層、基底細胞層的變化，并在光學顯微鏡下（X 400）用測微尺測表皮厚度，然后換算成實際厚度（用mm 表示）,進行各組間差異性比較。真皮浸潤細胞（單一核及多形核）密度（個/ X 400視野）：隨機測定真皮10個高倍視野內的炎性細胞數，算出平均值。基 底細胞有絲分裂數（個/ X400視野）：隨機測定基底層10個高倍視野內的基底 細胞有絲分裂數，算出平均值。技術路線通過雜

32、交瘤技術，建立穩定分泌 FGF10 McAb雜交瘤細胞株FGF10 McAb凍存、鑒定、擴大培養、腹水制備、純化MTT法檢側FGF1C及FGFIOMcAb對HaCaT細胞增殖的影響研究FGF10 McAb對銀屑病動物模型的治療作用小鼠銀屑病模型的建立豚鼠銀屑病模型的建立探明FGFIOMcAI對小鼠及豚鼠銀屑病模型的治療作用，最終確認這一新的藥物J巴點，為研究銀屑病新的生物治療奠定基礎。創新點選題新穎，屬科學前沿目前公認銀屑病是由CD4+Th1淋巴細胞和多種細胞因子介導的自身免疫紊亂性疾病。生物制劑能靶向性阻斷 T淋巴細胞活化，阻斷特異的細胞因子參與免 疫反應,在歐美國家已廣泛應用于銀屑病等免疫

33、介導的炎癥性疾病 ，展示了顯著 的療效及良好的安全性。這種新方法受到大家的廣泛關注，特別是近年隨著基因 工程抗體技術的飛速發展，抗體療法從實驗研究逐漸向臨床應用過渡 ，在銀屑 病的治療中展示出良好的前景。目前本項目為首次應用 FGF10 McAI制備外用劑 型；國內外尚無FGF10MC治療銀屑病的相關研究的報道。具有重要的理論意義和應用前景郗彥萍與Kovacs等學者的研究結果均表明FGF10在銀屑病表皮角質形成 細胞的增生、分化中起重要作用，參與其發病過程 。擬采用FGF10單克隆抗體 作為藥物對患處組織中高表達的 FGF10進行拮抗，從而阻斷或緩解角質細胞的過 度增殖，達到對銀屑病的治療目的。這為使用抗體藥物治療銀屑病提供了新的思 路。尤其值得重視的是，由于鼠源單克隆抗體因其存在明顯的免疫原性，通常只能用做檢測試劑和蛋白純化材料，大大制約了其作為體內注射藥物的臨床應用。 但是對于