016    前  言本標準代替008紅曲類產品中桔青霉素的測定、24262010進出口糧谷中桔霉素含量檢測方法 液相色譜法和29162011出口食品中桔霉素的測定方法 免疫親和柱凈化本標準與008相比,主要變化如下:標準名稱修改為“食品安全國家標準 食品中桔青霉素的測定”;增加了凈化步驟;增加了適用范圍。0161    食品安全國家標準食品中桔青霉素的測定1 范圍本標準規定了食品中桔青霉素的測定方法。本標準第一法適用于大米、玉米、辣椒、紅曲類產品中桔青霉素的測定,第二法適用于大米、大麥、燕麥、小麥中桔青霉素的測定。第一法 免疫親和柱凈化理試樣中的桔青霉素用甲醇取液經過濾、稀釋后,用免疫親和柱凈化,采用液相色譜結合熒光檢測器測定桔青霉素的含量,外標法定量。3 試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為醇(色譜純。腈(色譜純。酸(色譜純。乙酸(色譜純。氧化鈉(溫20(化鈉(酸氫二鈉(酸二氫鉀(化鉀(氧化鈉溶液(2):于1 磷酸溶液(10,2 磷酸溶液(10,2 水溶解,0162    水定容至1000 溫20確移取1 酸溶液:準確移取1 洗脫液:甲醇磷酸溶液(70+30)。脫液:酸溶液(70+30)。準品桔青霉素(18純度或經國家認證并授予標準物質證書的標準物質。準儲備液:準確稱取一定量的桔青霉素標準品,度為100g/4下保存。準中間液:甲醇定容,濃度為10g/4下保存。質標準工作液:根據需要,取適量的標準中間液,用空白樣品提取液配成不同濃度的基質標準工作液,現用現配。青霉素免疫親和柱:柱體積3大柱容量20等效柱。璃纖維濾紙:直徑11 效液相色譜儀,配熒光檢測器。析天平:速均質器:12000r/勻器。5 米、玉米、150入500+30)提取液,以高速均質器高速均質提取2濾提取液,于另一干凈的容器中,加入49磷酸溶液(釋、混勻;以玻璃纖濾紙過濾待免疫親和柱凈化。50入200+30)提取液,以高速均質器高速均質提取2濾提取液,于另一干凈的容器中,加入39勻;以玻璃纖濾紙過濾待免疫親和柱凈化。0163    米、玉米、辣椒將免疫親和柱連接于10述澄清濾液過免疫親和柱,以1滴/s2滴/入5磷酸(1滴/s2滴/至空氣進入到親和柱中,棄去全部流出液。行洗脫,洗脫流速為1滴/s2滴/s。收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測用。曲及其制品將免疫親和柱連接于101滴/s2滴/溫201滴/s2滴/至空氣進入到親和柱中,棄去全部流出液。紅曲及其制品)進行洗脫,洗脫流速為1滴/s2滴/s。收集全部洗脫液于玻璃試管中,供檢測用。白試驗除不加試樣外,均按上述操作步驟進行。米、玉米、辣椒液相色譜分析條件列出如下:a) 色譜柱:長150徑5m,或等效柱;b) 柱溫:30;c) 流速:d) 進樣量:50L;e) 檢測條件:激發波長350射波長500nm;f) 流動相腈,流動相0磷酸(流動相及梯度洗脫條件見表1。表1 流動相及梯度洗脫條件時間/流動相曲及其制品液相色譜分析條件列出如下:a) 色譜柱:長150徑5m,或等效柱;0164    b) 柱溫:30;c) 流速:d) 進樣量:50L;e) 檢測條件:激發波長350射波長500nm;f) 流動相腈,流動相酸。流動相及梯度洗脫條件見表2。表2 流動相及梯度洗脫條件時間/流動相儀器最佳工作條件下,用基質標準工作溶液分別進樣,以相應的桔青霉素的色譜峰的峰面積為縱坐標,以基質標準工作溶液中桔青霉素的濃度為橫坐標,繪制標準曲線。 試樣溶液的測定將試樣溶液注入高效液相色譜儀,測定相應的峰面積。由標準曲線得到試樣溶液中桔青霉素的濃度。6 分析結果的表述試樣中桔青霉素含量按式(1)計算:X=V(1)式中:X試樣中桔青霉素的含量,單位為微克每千克(g/樣液中桔青霉素的濃度,單位為微克每升(g/L);V定容體積,單位為毫升(f樣液稀釋倍數;m樣液所代表的試樣量,單位為克(g)。計算結果需扣除空白值。計算結果保留兩位有效數字。7 精密度在重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。0165    8 其他本方法中大米、玉米、辣椒粉樣品的檢出限和定量限分別為8g/曲及其制品的檢出限和定量限分別為25g/二法 理用乙腈18固相萃取小柱凈化,用配熒光檢測器的液相色譜儀測定,外標法定量。10 試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為丙醇(色譜純。腈(色譜純。酸(優級純。醇(取溶劑:乙腈5+10+55),酸溶液():水定容至1L。動相:乙腈5+10+55)。準品桔青霉素(18純度99%?；蚪泧艺J證并授予標準物質證書的標準物質。青霉素標準儲備液:稱取適量桔青霉素標準物質,4保存。青霉素標準工作液:根據需要用流動相將標準儲備液稀釋成25ng/0ng/00ng/00ng/000ng/18固相萃取柱:填料500體積3等效柱。璃纖維濾紙:直徑110166    11 效液相色譜儀:配有熒光檢測器。蕩器。心機:6500r/空固相萃取裝置。吹儀。析天平:2 取取樣品500g,用粉碎機粉碎并通過830勻,分成2份,裝入潔凈容器內,密封保存。稱取試樣約5g(5010在振蕩器上振蕩提取303500r/清液轉入另一離心管中。在殘渣中再加入5重復上述操作,合并上清液。在提取液中加水至40玻璃纖維濾紙,待凈化?；瘜⑸鲜鋈芤哼^預淋洗好的5淋洗液全部流出柱子后,減壓抽干3集全部洗脫液,在40下,液相色譜測定。白試驗除不加試樣外,均按上述操作步驟進行。相色譜參考條件a) 色譜柱:長250徑5m,或等效者;b) 流動相:乙腈5+10+55);c) 流速:d) 進樣量:50L;e) 柱溫:28;f) 檢測波長:激發波長331射波長500譜測定根據樣液中被測桔青霉素含量情況,選定峰面積相近的標準工作溶液。標準工作液和樣液中桔青霉素響應值均應在儀器檢測線性范圍內。對標準工作液和樣液等體積參插進樣測定。在上述色譜條件下,3 分析結果的表述試樣中桔青霉素含量按式(2)計算:0167    X=Am(2)式中:X試樣中桔青霉素含量,單位為微克每千克(g/A樣液中桔青霉素的峰面積;標準工作液中桔青霉素的濃度,單位為微克每升(g/L);V樣液最終定容體積,單位為毫升(標準工作液中桔青霉素的峰面積;m最終樣液所代表的試樣量,單位為克(g)。計算結果需扣除空白值,測定結果用平行測定的算術平均值表示,結果保留兩位有效數字。14 精密度在重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平