第43講微生物的培養與應用1.微生物的分離和培養2.培養基對微生物的選擇作用3.利用微生物進行發酵來生產特定的產物學生用書p295)一、微生物的實驗室培養1培養基(1)概念：人們按照微生物對營養物質的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養基質。(2)營養構成：一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽。此外還要滿足微生物生長對ph、特殊營養物質以及氧氣的要求。(3)種類：按照物理性質可分為液體培養基、半固體培養基和固體培養基。2無菌技術(1)含義：指在培養微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。(2)關鍵：防止外來雜菌的入侵。(3)方法3大腸桿菌的純化培養(1)制備牛肉膏蛋白胨固體培養基計算稱量溶化滅菌倒平板。(2)純化大腸桿菌關鍵的步驟是接種。純化培養方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法。純化培養原理：在培養基上得到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的菌落，即可獲得較純的菌種。二、土壤中分解尿素的細菌的分離和計數1分離原理：土壤中細菌之所以能分解尿素，是由于它們能合成脲酶，這種物質在把尿素分解成無機物的過程中起催化作用。以尿素為唯一氮源的培養基能促進分解尿素的細菌的生長和繁殖，并抑制或阻止其他微生物的生長，從而將目的菌分離。2統計菌落數目：統計樣品中的活菌一般用稀釋涂布平板法。3實驗流程：土壤取樣制備培養基微生物的培養與觀察細菌的計數。三、分解纖維素的微生物的分離1纖維素酶(1)組成：纖維素酶是一種復合酶，它包括c1酶、cx酶和葡萄糖苷酶。(2)作用2菌種篩選(1)方法：剛果紅染色法。(2)原理 纖維素分解菌 紅色復合物紅色消失、出現透明圈。即：使用以纖維素為唯一碳源的選擇培養基，根據是否產生透明圈來篩選纖維素分解菌。3篩選流程土壤取樣：富含纖維素的環境選擇培養：用選擇培養基培養，以增加纖維素分解菌的數量梯度稀釋涂布平板：將樣品涂布于含cr的鑒別纖維素分解菌的培養基上挑選產生透明圈的菌落：產生纖維素酶的菌落周圍出現透明圈1(2016北京海淀區期末)培養基中一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽四種成分。()2將土壤浸出液涂布在無菌的選擇培養基上分離分解尿素的細菌，是否無菌操作影響較小。()3培養基分裝到培養皿后進行滅菌。()4從有機廢水中分離微生物用于廢水處理時，接種后的培養皿須放在光照培養箱中培養。()5外植體消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對細胞的傷害。()6(2015高考四川卷t3d)用稀釋涂布平板法培養計數，應選擇有30300菌落數的平板。()7(2016山東青島市期末)篩選能分解尿素的細菌所利用的培養基中，尿素是唯一的氮源。()8分解尿素的細菌在分解尿素時，可以將尿素轉化為氨，使得培養基的酸堿度降低。()9土壤中纖維素分解菌的篩選流程中的“選擇培養”是必不可少的。()10在富含纖維素的培養基中加入剛果紅染色劑，若出現周圍存在透明圈的菌落，則說明篩選到了分解纖維素的微生物。()考點一培養基及微生物的純化培養技術學生用書p2961培養基的種類(1)按物理狀態分類培養基種類特點用途液體培養基不加凝固劑工業生產固體培養基加凝固劑(如瓊脂)微生物分離、鑒定，活菌計數，菌種保藏半固體培養基觀察微生物的運動、分類、鑒定(2)按功能分類種類制備方法原理用途舉例選擇培養基培養基中加入某些化學物質依據某些微生物對某些物質的特殊需求或抗性而設計從眾多微生物中分離所需的微生物加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌鑒別培養基培養基中加入某種指示劑或化學藥品產生特定的顏色或其他變化鑒別不同種類的微生物用伊紅美藍培養基鑒別大腸桿菌2.培養基的配制原則(1)目的要明確：配制時應根據微生物的種類、培養目的等確定配制的培養基種類。(2)營養要協調：注意各種營養物質的濃度和比例。(3)ph要適宜：細菌為6.57.5，放線菌為7.58.5，真菌為5.06.0，培養不同微生物所需ph不同。3消毒與滅菌條件結果常用方法應用范圍消毒較為溫和的物理或化學方法僅殺死物體表面或內部的部分對人體有害的微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高溫的液體化學藥劑消毒法用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源滅菌強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌法接種工具干熱滅菌法玻璃器皿、金屬工具高壓蒸汽滅菌法培養基及容器4.大腸桿菌的純化(1)原理：在培養基上將細菌稀釋或分散成單個細胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是純化的細菌菌落。(2)純化微生物的接種方法比較項目平板劃線法稀釋涂布平板法關鍵操作接種環在固體平板培養基表面連續劃線一系列的梯度稀釋；涂布平板法操作注意事項每次劃線前后均需灼燒接種環稀釋度要足夠高，為確保實驗成功可以增加稀釋度菌體獲取在具有顯著的菌落特征的菌落中挑取菌體從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體優點可以根據菌落的特點獲得某種微生物的單細胞菌落既可以獲得單細胞菌落，又能對微生物計數缺點不能對微生物計數操作復雜，需要涂布多個平板1.認清不同生物需要的營養物質不同(1)微生物需要的營養成分有水、無機鹽、碳源、氮源，有些微生物還需要特殊營養物質，如生長因子。(2)在人和動物中，營養物質包括水、無機鹽、糖類、脂質、蛋白質、維生素六類。(3)在植物中，營養物質包括礦質元素、水、二氧化碳三類。 2平板劃線操作的注意事項(1)操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前都需要對接種環進行火焰灼燒滅菌，劃線操作結束時，仍需灼燒接種環，每次灼燒目的如下表：第一次操作每次劃線之間劃線結束目的殺死接種環上原有的微生物殺死上次劃線后接種環上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端，使每次劃線菌種數目減少殺死接種環上殘存的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者(2)灼燒接種環，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。(3)第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始，能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐漸減少，最終得到由單個細菌繁殖而來的菌落。(4)劃線時最后一區不要與第一區相連。(5)劃線用力大小要適當，防止用力過大將培養基劃破。 (2016山東煙臺市統考)為了調查某河流的水質狀況，某研究小組測定了該河流水樣中的細菌含量，并進行了細菌分離等工作。回答下列問題：(1)該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中的細菌含量。在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養了一段時間，這樣做的目的是_。 (2)該小組采用平板劃線法分離水樣中的細菌，操作時，接種環通過_滅菌。在第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線。這樣做的目的是_。(3)示意圖a和b中，_表示的是用稀釋涂布平板法接種培養后得到的結果。(4)該小組將得到的菌株接種到液體培養基中并混勻，一部分進行靜置培養，另一部分進行振蕩培養。結果發現：振蕩培養的細菌比靜置培養的細菌生長速度快。分析其原因是：振蕩培養能提高培養液中_的含量，同時可使菌體與培養液充分接觸，提高_的利用率。(5)該小組從(3)b培養基中獲得甲、乙、丙三種微生物，并分別用、三種培養基來培養。甲、乙、丙都能在中正常生長繁殖，甲能在中正常生長繁殖，而乙和丙都不能；乙能在中正常生長繁殖，甲、丙都不能。培養基的成分如下：成分粉狀硫10 gkh2po44 gfeso40.5 g蔗糖10 g(nh4)2so40.4 gh2o 100 mlmgso4 9.25 gcacl2 0.5 g則甲是_微生物，乙是_微生物，丙是_微生物。解析：(1)為了檢測培養基平板滅菌是否合格，可在涂布接種前，隨機取滅菌后的空白平板先行培養一段時間。(2)接種環、接種針等金屬用具可直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，以達到迅速徹底滅菌的目的。在第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線，其目的是將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落。(3)比較a和b可以看出：a培養基中細菌的分布呈線性，是用平板劃線法接種培養后得到的結果；b培養基中細菌均勻分布，是用稀釋涂布平板法接種培養后得到的結果。(4)振蕩培養可以提高培養液中溶解氧的含量，還可以使菌體與培養液充分接觸，提高了營養物質的利用率，因此振蕩培養的細菌比靜置培養的細菌生長速度快。(5)從表格中可看出，培養基中無氮源，中無碳源，中為完全培養基。由此可知能在中生存的甲只能是固氮微生物，能在中生存的乙是自養微生物，丙只在中存活，為異養微生物。答案：(1)檢測培養基平板滅菌是否合格(2)灼燒將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落(3)b(4)溶解氧營養物質(5)固氮自養異養考點二微生物的計數方法學生用書p2981兩種計數方法的比較比較項目間接計數法(稀釋涂布平板法)直接計數法(顯微計數法)原理當樣品的稀釋度足夠高時，培養基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，通過統計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少活菌利用特定細菌計數板或血細胞計數板，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數量公式每克樣品中的菌落數(cv)mc：某稀釋度下平板上生長的平均菌落數；v：涂布平板時所用的稀釋液的體積(ml)；m：稀釋倍數每毫升原液所含細菌數：每小格平均細菌數400104稀釋倍數缺點當兩個或多個菌體連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落不能區分細胞死活結果比實際值偏小比實際值偏大2.設置對照和重復比較項目對照重復目的排除非測試因素對實驗結果的影響排除偶然因素對實驗結果的影響實例空白對照：確定培養基制作是否合格同一稀釋度涂布至少3個平板“選擇菌落數在30300的平板”的兩個提醒用稀釋涂布平板法計數微生物時，要求選擇菌落數在30300的平板進行計數。解題時易出現以下誤解：(1)只得到1個菌落數在30300的平板是錯誤的。錯誤的原因是不符合實驗的重復原則，易受到偶然因素的影響。(2)得到3個或3個以上菌落數在30300的平板，也不一定正確，這可能有兩種情況：不同平板間差異較大，如得到3個平板，菌落數分別為230、34、240，雖然菌落數均在“30300”，這也是不正確的，因為“34”與“230”“240”差異太大，應重新實驗找出原因。不同平板之間差異不大，是符合要求的，用其平均值作為估算的最終結果。可見，并不是只要得到3個“菌落數在30300的平板”即可，而應該是涂布的同一稀釋度的平板均符合“菌落數在30300的平板”且無較大差異，說明實驗操作合格，才能按照計算公式進行計算。 牛奶是微生物生長的良好培養基。牛奶在飲用前都要經過巴氏消毒，以殺死有害微生物。為檢測消毒前后牛奶中細菌含量變化情況，做如圖所示操作。用無菌吸管從錐形瓶中吸取1 ml生牛奶稀釋液至盛有9 ml無菌水的試管中，混合均勻，如此再重復2次。請回答下列有關問題：(1)巴氏消毒的方法是_，使用這種方法對生鮮牛奶進行消毒的好處是_。(2)取最終的牛奶稀釋液0.1 ml滴在培養基上進行涂布，應選擇的涂布工具是下圖中的_。(3)圖中所示方法為稀釋培養法，理想情況下，培養一段時間后可在培養基表面形成菌落。若用該方法培養設置了3個培養皿，菌落數分別為35個、33個、34個，則可以推測生牛奶中每毫升含細菌數為_個，運用這種方法統計的結果往往較實際值_(填“偏大”或“偏小”)，原因是_。(4)從生牛奶取樣培養得到的菌落中，混有各種雜菌，從中檢測大腸桿菌的方法是在培養基中加入_，菌落具有_特征的可以認定為大腸桿菌。答案：(1)7075 煮30分鐘(或80 煮15分鐘)牛奶的營養成分不被破壞(2)b(3)3.4106偏小個別菌落可能是由2個或多個細菌形成的(4)伊紅美藍(金屬光澤的紫)黑色考點三微生物的篩選與鑒別學生用書p2991微生物的鑒別方法(1)菌落特征鑒別法：根據微生物在固體平板培養基表面形成的菌落的形狀、大小、隆起程度和顏色等特征進行鑒別。(2)指示劑鑒別法：如以尿素為唯一氮源的培養基中加入酚紅指示劑，培養某種微生物后，培養基變紅說明該種微生物能夠分解尿素。(3)染色鑒別法：如利用剛果紅染色法，根據培養基中出現以纖維素分解菌為中心的透明圈來篩選分解纖維素的微生物。2篩選微生物的三種方法(1)單菌落挑取法：利用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種到固體平板培養基表面，直接根據微生物菌落的特征利用單菌落挑取的方法獲得目的微生物。(2)選擇培養法：利用選擇培養基對微生物進行選擇培養，直接獲得目的微生物。(3)鑒定培養法：利用鑒別培養基使目的微生物菌落呈現特有的特征，然后篩選目的微生物。3篩選微生物的兩個實例比較比較項目土壤中分解尿素的細菌的分離分解纖維素的微生物的分離方法利用以尿素為唯一氮源的選擇培養基進行選擇培養利用富含纖維素的選擇培養基進行選擇培養原理只有分解尿素的細菌能夠合成脲酶，才能在以尿素為唯一氮源的培養基上生長因為培養基中含有豐富的纖維素，因此能夠分解纖維素的微生物具有更多的生存機會而大量繁殖鑒別在培養基中加入酚紅指示劑，指示劑變紅說明菌落中的菌體為分解尿素的細菌剛果紅染色法，周圍出現透明圈的菌落為分解纖維素的微生物的菌落(2016陜西長安一中等五校一模)研究者初步篩選到能合成纖維素酶的菌株mc1，回答以下問題：(1)為了獲得能合成纖維素酶的單菌落，可采用_法將初篩菌液接種在以纖維素為唯一碳源的固體培養基上，這種培養基屬于_培養基。(2)下列關于制備固體培養基的敘述，錯誤的是_。a制備固體培養基時可以加入瓊脂b操作的順序為計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌c待培養基冷卻至50 左右時進行倒平板d待平板冷卻凝固約510 min后將平板倒過來放置(3)實驗過程中如何防止其他微生物的污染？_。(4)下表的培養液ph均為4.8，若對mc1中纖維素酶的活力進行測定，則不能選擇表中的_培養液。(多選)培養液abcd纖維素25 g/l25 g/l25 g/l纖維素酶1g/lnano33 g/l3 g/l牛肉膏3 g/lk2hpo41 g/l1 g/l1 g/l1 g/lkcl0.5 g/l0.5 g/l0.5 g/l0.5 g/lmgso47h2o1 g/l1 g/l1 g/l1 g/lfeso40.01 g/l0.01 g/l0.01 g/l0.01 g/l(5)分離獲得了具有較高纖維素酶活性的菌株mc1，為了在此基礎上獲得纖維素酶活性更高的菌株，最可行的做法是_。(6)某同學在培養過程中發現培養基上感染了幾種細菌。若在以尿素為唯一氮源的培養基中加入_指示劑培養幾種菌后，指示劑變紅就可以鑒定其中含有能夠分解尿素的細菌；若在以纖維素為唯一碳源的培養基中加入_染料，培養后，培養基中出現透明圈，就可以鑒定其中含有纖維素分解菌。答案：(1)涂布平板選擇(2)b(3)培養基滅菌、接種過程中進行無菌操作(4)a、b、c(5)人工誘變(紫外線照射等)處理菌株，再進行篩選(6)酚紅剛果紅,學生用書p300)1(2015高考全國卷)已知微生物a可以產生油脂，微生物b可以產生脂肪酶。脂肪酶和油脂可用于生物柴油的生產。回答有關問題：(1)顯微觀察時，微生物a菌體中的油脂通常可用_染色。微生物a產生的油脂不易揮發，可選用_(填“萃取法”或“水蒸氣蒸餾法”)從菌體中提取。(2)為了從自然界中獲得能產生脂肪酶的微生物b的單菌落，可從含有油料作物種子腐爛物的土壤中取樣，并應選用以_為碳源的固體培養基進行培養。(3)若要測定培養液中微生物b的菌體數，可在顯微鏡下用_直接計數；若要測定其活菌數量，可選用_法進行計數。(4)為了確定微生物b產生的脂肪酶的最適溫度，某同學測得相同時間內，在35 、40 、45 溫度下降解10 g油脂所需酶量依次為4 mg、1 mg、6 mg，則上述三個溫度中，_ 條件下該酶活力最小。為了進一步確定該酶的最適溫度，應圍繞_ 設計后續實驗。解析：(1)油脂可被蘇丹染液染成橘黃色，被蘇丹染液染成紅色，因此油脂通常用蘇丹或蘇丹染色。不易揮發的物質大多采用萃取法進行提取，水蒸氣蒸餾法一般用來提取易揮發的物質。(2)能產生脂肪酶的微生物b能利用脂肪(油脂)作為碳源，所以在制備選擇微生物b的培養基時，應將油脂作為唯一的碳源。(3)用顯微鏡直接對微生物進行計數，需要用血細胞計數板。如果對活菌進行計數，則要用稀釋涂布平板法涂布平板，培養后統計菌落數目，然后計算出活菌數量。(4)降解等量的油脂，需要的酶量越多，說明此溫度下的酶的活力越小。所以三種溫度中45 下酶的活力最小。從三種溫度下的實驗結果可知，40 下酶的活力最大，所以要想測定該酶的最適溫度，應圍繞該溫度設計不同溫度梯度，進行后續實驗。答案：(1)蘇丹(或蘇丹)萃取法(2)油脂(3)血細胞計數板稀釋涂布平板(4)45402(2015高考江蘇卷，31，8分)人工瘤胃模仿了牛羊等反芻動物的胃，可用來發酵處理秸稈，提高秸稈的營養價值。為了增強發酵效果，研究人員從牛胃中篩選纖維素酶高產菌株，并對其降解纖維素能力進行了研究。請回答下列問題：(1)在樣品稀釋和涂布平板步驟中，下列選項不需要的是_(填序號)。酒精燈培養皿顯微鏡無菌水(2)在涂布平板時，滴加到培養基表面的菌懸液量不宜過多的原因是_。(3)向試管內分裝含瓊脂的培養基時，若試管口粘附有培養基，需要用酒精棉球擦凈的原因是_。(4)剛果紅可以與纖維素形成紅色復合物，但并不與纖維素降解產物纖維二糖和葡萄糖發生這種反應。研究人員在剛果紅培養基平板上，篩到了幾株有透明降解圈的菌落(見下圖)。圖中降解圈大小與纖維素酶的_有關。圖中降解纖維素能力最強的菌株是_(填圖中序號)。(5)研究人員用篩選到的纖維素酶高產菌株j1和j4，在不同溫度和ph條件下進行發酵， 測得發酵液中酶活性的結果見下圖，推測菌株_更適合用于人工瘤胃發酵，理由是_。解析：(1)在樣品稀釋和涂布平板過程中，需要在酒精燈火焰附近進行操作，培養皿用于盛放培養基并培養細菌，無菌水做稀釋的溶劑，此處唯一用不到的是顯微鏡。(2)在涂布平板時，要取少量菌懸液滴加到培養基表面，因為如果滴加菌懸液過多，菌懸液就會堆積在培養基表面影響分離效果。(3)在向試管內分裝含瓊脂的培養基時，如果試管口粘附有培養基，就很容易使棉塞受到污染，因此，需要用無菌的酒精棉球將試管口擦拭干凈。(4)因為剛果紅可以與纖維素形成紅色復合物，且不與纖維素降解產物反應。所以在剛果紅培養基平板上，菌落周圍有透明降解圈是纖維素被降解的結果，降解圈大小由纖維素酶的活性和量決定。圖中菌落周圍的降解圈最大，因此其降解纖維素的能力最強。(5)考慮到人工瘤胃的發酵過程會使發酵液酸性增加，溫度升高，在這個前提下觀察在不同溫度和 ph 條件下測得的發酵液中酶活性的結果圖，從圖中可以看出，在高溫和低ph條件下都是j4菌株中的纖維素酶的活性較高，因而該菌株更適合用于人工瘤胃發酵。答案：(1)(2)培養基表面的菌懸液會出現積液，導致菌體堆積，影響分離效果(3)避免培養基污染棉塞(4)量與活性(5)j4發酵過程會產熱和產酸，j4菌株在較高溫度和酸性環境下酶的活性更高3(2014高考四川卷，10，11分)有機農藥苯磺隆是一種除草劑，長期使用會污染環境。研究發現，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分離降解苯磺隆的菌株和探索其降解機制的實驗過程如圖甲、乙所示。(1)微生物生長繁殖所需的主要營養物質有碳源、水、_四類，該實驗所用的選擇培養基只能以苯磺隆作為唯一碳源，其原因是_。(2)與微生物培養基相比，植物組織培養的培養基常需添加生長素和_，這些植物激素一般需要事先單獨配制成_保存備用。(3)純化菌株時，通常使用的劃線工具是_。劃線的某個平板培養后，第一劃線區域的劃線上都不間斷地長滿了菌，第二劃線區域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能的操作失誤有_。(4)為探究苯磺隆的降解機制，將該菌種的培養液過濾離心，取上清液做圖乙所示實驗。該實驗的假設是_，該實驗設計是否合理？為什么？_。解析：(1)微生物生長繁殖需要的主要營養物質包括碳源、氮源、水和無機鹽四類。根據題意可知，土壤中某些微生物有降解苯磺隆的能力，該實驗的目的是探索其降解機制，因此，需要分離出有降解苯磺隆能力的土壤中的某些微生物，故選擇培養時為了排除其他碳源的干擾，培養基中唯一碳源只能是苯磺隆。(2)與微生物培養基相比，植物組織培養的培養基需要添加生長素和細胞分裂素，用于調節植物細胞再分化；這些植物激素一般需要事先單獨配制成母液保存備用。(3)純化菌株時，通常使用的劃線工具是無菌接種環。劃線的平板培養后，發現第一劃線區域的劃線上不間斷地長滿了菌，第二劃線區域所劃的第一條線上無菌落，而其他劃線上有菌落。造成此現象的原因可能有兩個：一是接種環灼燒后未冷卻，菌種接觸到高溫的接種環而死亡；二是劃第二劃線區域第一條線時未從第一區域末端開始。(4)根據圖乙所示實驗中的上清液加入蛋白酶溶液推測，實驗目的是探究目的菌株是否能分泌降解苯磺隆的蛋白質，實驗設計不合理之處是缺少不加蛋白酶溶液、其他條件同圖乙的空白對照。答案：(1)氮源和無機鹽只有能利用苯磺隆的微生物能正常生長繁殖(2)細胞分裂素母液(3)接種環接種環灼燒后未冷卻；劃線未從第一區域末端開始(4)目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白質不合理，缺少空白對照1(2016廣西四市第一次聯考)如圖是某細菌純化培養過程中劃線接種的培養結果。回答問題：(1)在_(填圖中編號)區域出現了單個菌落，產生每個菌落的最初細菌數目是_個。據圖分析，在培養基上劃線接種時，劃線的順序依次是_(用編號表示)。(2)下表是某微生物培養基的成分。編號成分含量編號成分含量粉狀硫10 g(nh4)2so40.4 gk2hpo44 gmgso49.25 gfeso40.5 gcacl20.5 gh2o100 ml若培養從土壤中分離出來的自生固氮菌，該培養基應添加_，去除_。若要鑒別纖維素分解菌，可用_法，若要鑒別尿素分解菌，可在培養液中加入_。解析：(1)從圖中可知，號區域出現了單個菌落；1個菌落由1個細菌繁殖形成；根據菌落數量可判斷，劃線的順序依次是。(2)自生固氮菌是異養生物，它可固定大氣中的n2，因而培養基中應添加碳源去掉氮源。鑒別纖維素分解菌可用剛果紅染色法，要鑒別尿素分解菌，可在培養液中加入酚紅指示劑。答案：(1)1(2)碳源氮源剛果紅染色酚紅指示劑2(2016武漢調研)如表所示為培養某種微生物的培養基配方，請回答有關問題：kh2po4na2hpo4mgso47h2o葡萄糖尿素蒸餾水1.4 g2.1 g0.2 g10.0 g1.0 g定容至1 000 ml(1)該培養基只允許分解尿素的細菌生長，這種培養基稱為_培養基。該培養基會抑制其他種類微生物生長，其原因是該培養基_。(2)若要通過統計培養基中菌落數來估計樣品中的細菌數，上述培養基中還需要添加的成分是_，接種時應采用_法，該方法接種培養后的菌落，不可能是下圖中的_。(3)從土壤中分離出分解尿素的細菌后，要對其做進一步的鑒定，可在上述培養基中加入_指示劑，培養該菌后，如果指示劑變_，可初步鑒定該種細菌能夠分解尿素。(4)某同學用0.1 ml稀釋液在稀釋倍數為106的平板中測得菌落數的平均值為163，則每ml樣品中的細菌數是_。答案：(1)選擇以尿素為唯一的氮源(2)瓊脂稀釋涂布平板d(3)酚紅紅(4)1.631093(2016河北邯鄲一模)某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機化合物a。研究人員用化合物a、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養基，成功篩選到能高效降解化合物a的細菌(目的菌)。實驗的主要步驟如圖所示。請分析回答下列問題：(1)培養基中加入化合物a的目的是_，這種培養基屬于_培養基。(2)“目的菌”生長所需的氮源和碳源是來自培養基中的_。實驗需要振蕩培養，由此推測“目的菌”的代謝類型是_。(3)在上述實驗操作過程中，獲得純凈“目的菌”的關鍵是_。(4)轉為固體培養基時，常采用平板劃線的方法進行接種，此過程中所用的接種工具是_，操作時采用的滅菌方法是_。(5)實驗結束后，使用過的培養基應該進行滅菌處理才能倒掉，這樣做的目的是_。(6)某同學計劃統計污水池中“目的菌”的總數，他選用104、105、106稀釋液進行平板劃線，每種稀釋液都設置了3個培養皿，從設計實驗的角度看，還應設置的一組對照實驗是_，此對照實驗的目的是_。解析：(1)該實驗的目的是篩選“目的菌”，故培養基中添加的化合物a起選擇作用。(2)微生物正常生長需要碳源、氮源、無機鹽等，由培養基中添加的物質種類知：化合物a應該給微生物生長提供碳源、氮源。培養過程需振蕩，說明目的菌是需氧型微生物。(6)統計污水池中的“目的菌”時應設置空白對照，以用于檢驗培養基是否滅菌嚴格。答案：(1)篩選目的菌選擇(2)化合物a異養需氧型(3)防止外來雜菌污染(4)接種環灼燒(5)防止造成環境污染(6)不接種的空白培養基檢驗培養基滅菌是否合格4(2016山東濰坊一模)地球上植物產生的纖維素中有40%60%被土壤中的某些微生物利用，從土壤中分離并研究這些微生物有利于人們更有效地利用植物秸稈中的纖維素。請回答：(1)分離纖維素分解菌，宜從_的土壤中取樣。纖維素分解菌之所以能夠利用纖維素，是因為其細胞內含有_。(2)培養基除含有碳源、氮源、水和多種無機鹽外，還應含有_。