? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 第 ? 卷第 ? 期 ? 年 ? 月 ? 水?產?學?報 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文章編號? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 收稿日期? ? ?修回日期? ? ? 資助項目?安徽省?十一五?重大科技攻關項目?國家大學生創新性實驗計劃項目?國家星火計劃項目 ? ? ? 通訊作者?陸劍鋒? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 斑點叉尾魚骨膠原多肽螯合鈣的制備及其特征 陸劍鋒?孟昌偉?李?進?宮子慧?林?琳?葉應旺?姜紹通 ?合肥工業大學生物與食品工程學院?安徽 合肥? 摘要? 以斑點叉尾魚骨酶解膠原多肽液和氯化鈣為原料?螯合率為指標?在一定條件下制備 膠原多肽螯合鈣?并考察溫度? ?時間?多肽與鈣的質量比對螯合率的影響? 在單因素實驗 結果的基礎上?采用 ? ? ? ? ? ? 中心組合設計和響應面分析法?確定最佳螯合工藝條件為溫 度? ? ?時間 ? ? ?質量比 ? ?此條件下?螯合率達 ? ? 紫外吸收和傅里葉變 換紅外光譜掃描的結果表明?骨膠原多肽與鈣形成了螯合物?且其氨基酸組成符合典型的膠原 樣蛋白特征? 關鍵詞? 斑點叉尾? 魚骨? 膠原多肽? 鈣? 螯合率 中圖分類號? ? ? ?文獻標志碼? ?斑點叉尾? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?是一種原產 于北美洲的大型淡水魚類?擁有廣泛的國際市場? 我國斑點叉尾養殖業發展迅速? 年產量達 ? 萬 ? 左右?被農業部列為重點產業化開發對 象? 近年來?隨著斑點叉尾魚片出口量的不 斷攀升?加工產生的副產物或下腳料?魚皮?魚 骨?內臟等?逐漸增多?其中魚骨?包括魚頭部分? 占了較大的比例?約 ? 動物骨骼?如牛骨 等?通常含有豐富的蛋白?多肽?氨基酸及鈣?磷 等礦物質?且骨骼蛋白以膠原蛋白為主?約占總蛋 白 ?左右? 而水產動物膠原蛋白由于其優 良的理化性質和生理活性功能?已受到國內外學 者的廣泛關注? 吳緹等?從斑點叉尾魚骨 中提取和純化了骨膠原蛋白?并對其特性進行了 研究? ? ? ? 等?對多種魚骨膠原蛋白進行了提 取和特性研究?并認為魚骨膠原蛋白可以廣泛應 用于食品?藥品和化妝品中? 目前?鈣質缺乏是全球性的營養問題?我國人 民由于以植物性膳食為主?缺鈣的現象更加嚴重? 因此補鈣成為我國膳食營養研究中的重要課 題? 研究表明?動物體內存在著獨立的小肽 轉運系統?是攝入氨基酸的主要途徑?當金屬離子 和一個小肽螯合后能防止肽的水解?同時因為金 屬離子在消化道經過胃及小腸中離子的吸收部位 時都以螯合態存在?因此吸收速度較快? 將骨膠 原多肽與鈣在一定條件下進行螯合?制備出的骨 膠原多肽螯合鈣不僅可以補充人體需要的氨基酸 和鈣?還可以大大提高魚類等下腳料的附加值? 付文雯等?利用胃蛋白酶酶解的酸性環境使牛 骨中的鈣轉變成利于吸收的鈣離子?并將膠原蛋 白初步水解?再進一步調節 ?值后?添加 ? ? 中性蛋白酶使膠原蛋白得到深度水解?同時也促 進了兩者的螯合? ? ? 等? ? ?利用提取的肉食 性魚腸道酶對鱈魚骨進行酶解?并從酶解液中分 離出魚骨磷酸肽?使其與鈣進行螯合?此法得到的 螯合鈣被認為是一種新穎的營養性食品?之后又 對螯合鈣進行小鼠實驗?證明其可以阻止骨質疏 松模型小鼠體內礦物質的流失? 采用堿性蛋白酶和風味蛋白酶?兩步酶解 法?可以制備出純度較高且適用于企業規模化 批量生產的膠原多肽水解液? 在此基礎上?本 文以自制的斑點叉尾魚骨膠原多肽與氯化鈣進 行螯合反應?同時結合 ? ? ? ? ? ? 組合設計和 響應面分析法優化斑點叉尾魚骨膠原多肽鈣的 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 期陸劍鋒?等?斑點叉尾魚骨膠原多肽螯合鈣的制備及其特征? 制備條件?這不僅可以改善水產動物膠原蛋白資 源的營養及功能特性?而且可以減少由于斑點叉 尾魚骨廢棄造成的環境污染?也有助于企業產 生良好的社會效益和經濟效益? ?材料與方法 ? ?材料與試劑 骨膠原多肽水解液?實驗室自制?氯化鈣? 氫氧化鈉?鹽酸?無水乙醇等均為分析純? ? ?儀器與設備 ? ? ? ? ?精密 ?計?上海大普儀器有限公 司? ?數顯恒溫水浴鍋?江蘇金壇市金城國勝 實驗儀器廠? ? ? ? ? 精密恒溫鼓風干燥箱 ?上海三發科學儀器有限公司? ? ? ?臺式高 速冷凍離心機?上海天美生化儀器設備工程有限 公司? ? ? ? ? ? 冷凍干燥機?北京博醫康實驗儀 器有限公司? ? ?旋轉蒸發器?上海亞榮 生化儀器廠? ? ? ? ? ? ? 傅里葉紅外光譜?美國 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 公司? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 氨基酸全自動分析儀?德國 ? ? ?公 司? ? ?骨膠原多肽水解液的制備 稱取 ? ? 或一定量的骨粉?過 ? 目篩?先用 堿性蛋白酶初步酶解?料液比? ? ? ?加酶 量 ?溫度 ? ?酶解 ? ?再用風味蛋白 酶在溫度 ? ?加酶量 ? ?酶解 ? ? 的 條件下進一步酶解?即通過采用兩步酶解法制備 膠原多肽水解液? ? ?螯合實驗 工藝流程?骨膠原多肽 ? 氯化鈣?調節溶 液 ?值?攪拌?水浴?濃縮?無水乙醇? 倍體積?洗滌 ? 次?抽濾?真空冷凍干燥? 螯合率的測定?待螯合反應結束后?準確 移取? ? ?反應液于? ? ?離心管中?加入? ? ? 無水乙醇?震蕩?離心? ? ? ? ? ? ? ? ? ?測定 沉淀物?螯合鈣?中的鈣含量?同時再準確 移取 ? ? ?反應液?直接測定總鈣含量? 螯 合率 ? ? 鈣含量的測定參照 ? ? ? ? ? ?食品中鈣的測定? ? ?單因素實驗設計 單因素實驗的基本條件定為溫度? ?時間 ? ?質量比 ? ? 改變其中一個條件?固定 其它條件以分析各單因素對螯合率的影響? 各因 素水平梯度分別為?溫度 ? ? ?時間 ? ? ? ? ? ?質 量比 ? ? ? ? ? ? ? 每個水平重復 試驗兩次?結果取平均值? ? ?響應面法優化螯合工藝 在單因素試驗基礎上?采用 ? ? ? ? ? ? 中 心組合方法進行三因素三水平試驗設計? 以 ? ? 時間?骨膠原多肽與鈣離子質量比 ? 個因素為自 變量?并以自變量的編碼值 ? ?分別代表自 變量的高?中?低水平?螯合率 ?為響應值?自變量 因素水平及編碼見表 ? 采用 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 軟件對數據進行分析? 表 ? ? ? ? ? ? ? ? ?設計試驗因素?水平及編碼 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 自變量因素 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 編碼 ? ? ? 編碼水平 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 時間? ? ? ? ? ? ? ? 質量比 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?氨基酸組成分析 稱取冷凍干燥后的樣品 ? ? ?放入消化管 中?加入 ? ? ? ? ? ? ?的 ? ? ? ?充入氮氣后旋緊 管蓋?置于? ?烘箱中水解? ? 水解結束冷卻 后移至坩堝?于 ? ?水浴鍋揮發鹽酸?再加入少 量雙蒸水蒸干?重復兩次?用適量 ? ? 的磷酸 鹽緩沖溶液溶解稀釋?最后用 ? ? ? ?微孔濾膜 抽濾?濾液采用氨基酸全自動分析儀進行測定? ? ?紫外光譜? ? ? ? ? ? ?分析 取適量冷凍干燥樣品?用蒸餾水溶解?同時 以蒸餾水作為對照?在 ? ? ? ? 波長范圍 內進行紫外掃描?分辨率 ? ? ? ?傅里葉紅外光譜? ? ? ? ? ?分析 取適量冷凍干燥樣品?用紅外光譜儀對樣品 進行紅外掃描?掃描范圍為 ? ? ? ? ? ? ?采 用 ? ? ? ? ? ? ? 軟件對數據進行分析? ?結果 ? ?單因素實驗 溫度對螯合率的影響?隨著溫度的逐漸增 加?螯合率隨之增加?但增幅不大? ?時螯合率 達到最高?當溫度升高至 ? ?以上時?螯合率隨 著溫度的升高反而下降?表明高溫不利于螯合反 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?水?產?學?報? 卷 應的進行? 但當溫度低于? ?時?對螯合率的影 響也不顯著?所以將螯合溫度設定為 ? ?不帶 入后續的響應面優化試驗?圖 ? 圖 ?溫度對鰲合率的影響 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?時間對螯合率的影響?時間對螯合率影響 較大? 當螯合時間在 ? ? ? ? ? 內?螯合率隨著反 應時間的延長而快速增加?這也說明螯合反應較 為快速? 當反應時間為 ? ? 時? 螯合率達到 ? ?但反應時間大于 ? ? 后?隨著時間延長? 螯合率增加不明顯?基本趨于平緩?故螯合時間以 ? ? 為最佳?圖 ? 圖 ?時間對鰲合率的影響 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?對螯合率的影響?螯合率隨著 ?的 升高而增大?當 ?為 ? ? ? ? ? 時?螯合率達到 最大?此后又隨著 ?的上升而下降?圖? 當溶 液在 ?值較低的酸性條件下?大量的 ?將會與 ? ? ? ?爭奪供電子基團?不利于螯合物的生成?當 溶液在 ?值較高的條件下?羥基可能會爭奪鈣 離子而優先生成氫氧化鈣沉? 本實驗中?當 ?在 ? ? ? ? ? 時?觀察到反應體系中有沉淀慢 慢析出? 螯合率在 ? ? ? ? ? 附近時達到最 大?此時有較多的酸性多肽物質處于等電點附近? 受氫離子和羥基影響較小?可以提供充分的供電 子基團?從而有利于與鈣離子通過配位鍵形成螯 合物?故螯合反應的最佳 ?為 ? ? ? ? ? 圖 ? ?對鰲合率的影響 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?質量比對螯合率的影響?膠原多肽和鈣離 子的質量比與螯合率的大小密切相關? 隨著質量 比的增大?螯合率增加?當達到 ? ? 時?螯合率最 高?質量比再增加?螯合率基本不變? 物料的配比 是影響金屬離子與多肽螯合反應的一個重要因素 ?圖 ? 如果配位比太小?螯合反應即使顯著也 不能形成穩定的環狀結構?即螯合物不穩定?若配 位比太高?則導致多肽利用率下降?即造成多肽的 浪費?不經濟? 綜合考慮選擇質量比 ? ? 較 適宜? 圖 ?質量比對鰲合率的影響 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?響應面分析 本試驗安排了 ? 個試驗點?可分為兩類?其 一是析因點?自變量取值在 ? ?所構成的三 維頂點?共有 ? 個析因點?其二為零點?為區域的 中心點?零點試驗重復 ? 次?用以估計試驗誤差? 試驗安排及結果見表 ? 對表 ? 中的試驗數據進行擬合回歸?以 ? ? ?時間?質量比?為自變量?螯合率 ? ?為因變量?響應值?建立二次多元回歸方程 模型? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 期陸劍鋒?等?斑點叉尾魚骨膠原多肽螯合鈣的制備及其特征? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?對回歸方程進行方差分析?結果見表 ? 回 歸方程中各變量對指標?響應值?影響的顯著性? 由 ?檢驗來判定?概率 ? ? ? ? ? ?的值越小?則相應 變量的顯著程度越高? 由表 ? 可知?回歸方程 達到極顯著水平? ?且失擬項不顯著 ? ? 表明該方程對試驗數據擬合較 好? 總決定系數 ? ? ? ? ? ?表明自變量與 響應值之間線性關系顯著?即該模型預測值與實 際試驗值擬合較好?因此可利用該回歸方程代替 試驗真實點對結果進行分析? 回歸方程各項系數的顯著性分析結果表明? 因素 ? ?的線性效應和平方效應對螯合率的影響 極顯著? ? ? ? 的線性效應對螯合率的影 響顯著? ? ? 利用 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 軟件 在設定的因素水平內對回歸方程進行數學規劃? 得到螯合率最高的優化組為 ? ?時間 ? ? ? 膠原多肽與鈣的質量比為 ? ? 此條件下?螯合 率的理論值達到 ? ? 表 ?響應面試驗方案及結果 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 試驗號 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 螯合率? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 表 ?回歸方程的方差分析 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 方差來源 ? ? ? ? 自由度 ? 平方和 ? ?均方 ? ? ? ? ? ? ? ? 顯著性 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 模型 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 殘差 ? ? ? ? ? ? ? ? 失擬 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 純誤差 ? ? ? ? ? ? ? 總和 ? ? ? ? ? ? 注?顯著水平為 ? ? ?極顯著水平為 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?驗證試驗 在最佳螯合條件?溫度 ? ? ?時間 ? ? ?膠原多肽與鈣的質量比為 ? ?下?螯合率 的理論值達到 ? ? 當膠原多肽與鈣的質量 比設 為 ? ? 時? 螯 合 率 的 理 論 值 雖 略 低 ? ?但膠原多肽和鈣的螯合利用率較高 ?見單因素試驗? 故采用質量比為 ? ? 進行驗 證試驗?螯合率的實際值達到 ? ?與理論值 相符?且與質量比為 ? ? 的理論值相差不大? ? ?螯合物的氨基酸組成分析 除色氨酸由于酸水解的破壞而未能正常檢測 外?斑點叉尾魚骨膠原多肽螯合鈣的氨基酸含 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?水?產?學?報? 卷 量非常豐富?其中以甘氨酸含量最高? ? 谷氨酸?丙氨酸?脯氨酸?天冬氨酸和羥脯氨酸含 量相對較高?而半胱氨酸?蛋氨酸?異亮氨酸?酪氨 酸?苯丙氨酸和組氨酸含量相對較少? 因此其符 合典型的膠原蛋白氨基酸組成特征?表明螯合 試驗所用的膠原多肽含量相當高?表 ? 表 ?螯合物的氨基酸組成 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 氨基酸 ? ? ? ? ? ? ? ? 含量? ? ? ? ? ? 氨基酸 ? ? ? ? ? ? ? ? 含量? ? ? ? ? ? 天冬氨酸 ? ? ? ?蛋氨酸 ? ? ? 蘇氨酸 ? ? ?異亮氨酸 ? ? ? ? 絲氨酸 ? ? ? ?亮氨酸 ? ? ? ? 谷氨酸 ? ? ? ?酪氨酸 ? ? ? 甘氨酸 ? ? ? ?苯丙氨酸 ? ? ? 丙氨酸 ? ? ? ?組氨酸 ? ? ? ? 半胱氨酸 ? ? ?賴氨酸 ? ? ? 纈氨酸 ? ? ? ?精氨酸 ? ? ? ? 脯氨酸 ? ? ? ?羥脯氨酸 ? ? ? 注?由于酸水解導致 ? ? ? 被破壞?所以未能檢測到 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?螯合物的紫外吸收光譜分析 在螯合物中?不僅過渡金屬離子會吸收可見 ?或紫外?區的某一部分波長的光而發生躍遷?配 合體內部也可能因吸收可見?或紫外?區的光而 發生電子的躍遷? 形成螯合物時中央離子與配位 體的鍵合使配位體內部有關軌道的能量改變?因 此螯合物中的配合體內部電子的躍遷與游離配位 體內部電子的躍遷時要求的能量不相同?即吸收 光的波長不相同? 周元臻等?研究了殼聚糖與 ? ? ? ?之間的 配合作用?結果表明其產物的紫外吸收光譜發 生了紅移? 同時指出在反應過程中可以根據螯 合物最大吸收峰的大小來判斷反應程度?而利 用分光光度法還可以測定螯合物的穩定常數? 判斷螯合物的配位比? 由圖 ? 可知?螯合后的骨 膠原多肽?即膠原多肽螯合鈣?的紫外吸收光譜 同樣存在紅移現象?表明有新物質生成?這也證 實骨膠原多肽與鈣離子之間可能發生了螯合 反應? ? ?螯合物的紅外吸收光譜分析 在膠原多肽溶液中主要是氨基酸殘基之間的 酰胺鍵?也有少量的末端或側鏈氨基和羧基存在? 因此在紅外光譜中存在氨基的伸縮振動?變角振 動和羧基的伸縮振動等吸收峰?而當膠原多肽與 ? ? ? ?螯合后?必然會引起其吸收峰位的偏移或 變化? 由圖 ? 可知?骨膠原多肽紅外光譜圖的特征 區中? ? ? ? ?的吸收峰在 ? ? ? ? ? ?是由 ? ? 的伸縮振動引起? ? ? ? ? ?屬于酰胺?帶? 是由 ?的伸縮振動引起? ? ? ? ? ?屬 于酰 胺 ? 帶? 是 由 ?的 變 形 振 動 引 起? ? ? ? ? ? ?處出現? ? ? ? ? 吸收峰? ? ? ? ?處則是由 ?面外變形振動引起? 加入 鈣離子后?氨基的伸縮振動吸收峰出現偏移?向 高波位移動 ? 個波數?且吸收峰變強? 酰胺? 帶吸收變得很弱?可能是由于和鈣結合后 ? 的伸縮振動受到遏制?這意味著 ? ?和鈣離子 之間存在某種化學作用?配合鍵形成的可能性 最大? 在 ? ? ? ? ? ?處的? ? ? ? ? 吸收 峰向低波位發生了偏移?且吸收峰增強?推測 ? ? ? ?與 ? ? ? ? 之間存在較強的結合作用?這 也與米蛋白態鋅的紅外吸收光譜相似? 由紅 外吸收峰的偏移或變化?進一步證實骨膠原多 肽和鈣離子之間形成了螯合物? 圖 ?紫外吸收光譜圖 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 圖 ?傅里葉紅外光譜圖 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 期陸劍鋒?等?斑點叉尾魚骨膠原多肽螯合鈣的制備及其特征? ?結論 通過單因素和響應面優化實驗?得到膠原多 肽液和鈣離子的最佳螯合條件為溫度 ? ? ? ?時間 ? ? ?膠原多肽與鈣的配比為 ? ?此 條件下的鈣螯合率為 ? ? 對螯合物進行氨 基酸分析?其甘氨酸?丙氨酸?脯氨酸和羥脯氨酸 含量較高?符合典型的膠原樣蛋白氨基酸組成特 征?即該螯合物在補充鈣的同時也能起到補充膠 原蛋白的作用? 對骨膠原多肽及其鈣螯合物進行 紫外吸收和傅里葉變換紅外光譜掃描?結果表明? 螯合前后兩者在化學結構上存在一定的變化?較 好地證明了鈣螯合物的形成? 參考文獻? ? ? ?張偉偉?陸劍鋒?焦道龍?等? 鉀法提取斑點叉尾 內臟油的工藝研究? ? 食品科學? ? ? ? ? ? ?胡軍景?劉景圣?張大力?等? 復合酶分步酶解法提 取牛骨膠原蛋白工藝的研究? ? 肉類研究? ? ? ? ? ? ?焦道龍?陸劍鋒?張偉偉?等? 水產動物膠原蛋白的 研究現狀及發展趨勢 ? ? ? 食品科學? ? ? ? ? ? ?吳緹?陳舜勝? 斑點叉尾魚骨制取膠原蛋白和骨 粉的試驗研究? ? 南方水產? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?宋俊梅?曲靜然? 促進骨鈣生物可利用性的研究 ? ? 食品科技? ? ? ? ? ?謝靜?李宗軍? 補鈣理論創新?膠原多肽與鈣結合 物? ? 國際中醫中藥雜志? ? ? ? ? ?付文雯?馬美湖?蔡朝霞? 牛骨蛋白分步酶解制取 膠原多肽螯合鈣的研究? ? 食品工業? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?孟昌偉?陸劍鋒?宮子慧?等? 斑點叉尾魚骨膠原 多肽的制備工藝研究? ? 肉類工業? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?張紅漫?儀明君?陸小華?等? 復合氨基酸銅螯合物的 研究? ? 氨基酸和生物資源? ? ? ?孫莉潔?梁金鐘? 響應面法優化大豆肽與鈣離子螯 合的研究? ? 中國糧油學報? ? ? ?楊姍姍? 羅非魚皮多肽鋅螯合鹽的制備及性質研 究? ? 南昌?南昌大學? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?管海躍? 甘氨酸微量元素螯合物的合成與表征研 究? ? 杭州?浙江大學? ?周元臻?魏永鋒?張維平?等? 殼聚糖? ? ? ?配位 聚合物的合成及其性能表征? 食品科學? ? ? ? ?付文雯?馬美湖?蔡朝霞? 牛骨蛋白酶解制取肽鈣 的研究進展? ? 食品與發酵科技? ? ? ? ?祝德義? 利用灰堿皮廢料制備膠原多肽鈣? ? 濟 南?山東輕工業學院? ?夏松養?謝超?霍建聰?等? 魚蛋白酶水解物的鈣螯 合修飾及其功能活性? ? 水產學報? ? ? ? ?張全才? 米蛋白態鋅的制備工藝及產品特性研究 ? ? 南昌?南昌大學? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?水?產?學?報? 卷 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?