第一節

提取方法與技術一、吸附色譜技術二、分配色譜技術第三節

色譜分離方法與技術三、離子交換色譜技術四、凝膠色譜技術五、大孔吸附樹脂色譜技術學習導入：

1.碳酸鈣---固定相、2.石油醚---流動相、色譜三要素

3.植物色素----被分離物質

第三節

色譜分離方法與技術閱讀材料：1906年俄國某植物學家將碳酸鈣放在豎立的玻璃管中，從頂端倒入植物色素的石油醚浸提液，并用石油醚沖洗。在管的不同部位形成色帶，因而命名為色譜。你能從圖中看出，色譜柱中應該有幾個要素組成呢？

利用被分離物質對固定相和流動相的親和力不同而進行分離。這種分離方法稱色譜法，又叫層析法。第三節

色譜分離方法與技術1.按固定相的作用原理不同可分為：吸附色譜、分配色譜、聚酰胺色譜、離子交換色譜、凝膠色譜法等2.按操作條件和載體不同，可分為：紙色譜、薄層色譜、柱色譜、氣相色譜、高效液相色譜3.按流動相不同，可分為：液相色譜、氣相色譜色譜分離的原理：分類：

指以固體吸附劑為固定相，以液體為流動相的液-固色譜分離技術。第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術

（一）基本原理

利用固定相吸附劑對混合物中的各種組分的吸附能力的差異，以及展開劑對各成分解吸附能力的不同，而使各成分達到分離。第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術

（一）基本原理吸附劑的吸附作用有:固體表面的作用力、氫鍵絡合、靜電引力、范德華力吸附劑對各成分吸附能力的大?。褐饕Q于吸附劑本身的結構和性質、被吸附成分的結構和性質以及洗脫溶劑的極性大小第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術

（一）基本原理吸附劑對組分的吸附能力的越強，組分的遷移速度越慢，反之越慢。若固定相和洗脫劑固定時，吸附能力的大小主要取決于被分離成分的性質，被分離成分的被吸附約牢固，被洗脫的速度，反之越快。第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術（二）構成要素1.吸附劑：要有較大的表面積和適宜的活性，不和洗脫劑、組分反應，顆粒均勻，在各溶劑中不溶解

作用：固定相，有吸附的作用（1）分類：

極性吸附劑：硅膠、氧化鋁、聚酰胺等

非極性吸附劑：活性炭

第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術（二）構成要素1.吸附劑：

（1）分類：

①硅膠（SiO2·xH2O)

酸性的多孔性物質，硅醇基能與許多化合物形成

氫鍵產生吸附作用；硅醇基的數目決定其吸附作用的強弱；硅醇基還易通過氫鍵吸附水分，因此可作為干燥劑第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術（二）構成要素1.吸附劑：

（1）分類：

①硅膠（SiO2·xH2O)

吸附能力：硅膠吸附的水分越多，吸附其他化合物的能力就越小，因此硅膠的含水量與吸附能力成反比?；罨杭訜嵋猿ソ^大多數硅醇基上吸附的水，使硅膠恢復吸附能力的過程稱為活化活化溫度時間：100-110。C，30min適用范圍：分離中性、酸性成分第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術（二）構成要素1.吸附劑：

（1）分類：

①硅膠（SiO2·xH2O)

市售硅膠型號：硅膠G（含煅石膏14%~22%）硅膠H（及不含黏合劑，也不含熒光物質）硅膠F254或F365第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術（二）構成要素1.吸附劑：

（1）分類：

②

氧化鋁吸附性強于硅膠，一般為堿性，適合于中性、堿性成分分離總結硅膠、氧化鋁極性吸附劑的特點：

(1)極性大的物質易被吸附；

(2)吸附力大小與溶劑的極性有關；第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術（二）構成要素1.吸附劑：

（1）分類：

②

聚酰胺

也叫錦綸、尼龍，

是有酰胺聚合而成的

一類高分子化合物。第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術（二）構成要素1.吸附劑：

（1）分類：

③

聚酰胺

吸附強度主要與下列因素有關：1.溶劑的種類2.與化合物的分子結構有關

洗脫能力由弱到強水

甲醇 丙酮

NaOH水溶液甲酰胺二甲基甲酰胺尿素水溶液第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術（二）構成要素1.吸附劑：

（1）分類：③

聚酰胺

吸附強度主要與下列因素有關：1.溶劑的種類2.與化合物的分子結構有關

1）形成氫鍵的基團數目越多，則吸附能力越強。2）成鍵位置對吸附力也有影響。3）分子中芳香化程度高者，共軛雙鍵越多，則吸附性增強；反之，則減弱。4）易形成分子內氫鍵者，其在聚酰胺上的吸附即相應減弱。第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術（二）構成要素1.吸附劑：

（1）分類：④

活性炭

非極性的吸附劑，有較強的吸附力，適合于水溶性物質的分離。第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術（二）構成要素2.洗脫劑

1.作用：作為流動相，有解吸附的作用。2.組成：由一種或幾種按一定比例組成的溶劑系統

在薄層色譜稱:展開劑

3.流動相

在柱色譜稱:洗脫劑4.洗脫能力（1）流動相的解吸附能力與極性有關（2）對于極性吸附劑，流動相的極性越大，解吸附能力越強。反之，第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術問題1：實驗操作視頻中，為什么二甲基橙（黃色）和羅丹明B（紅色）的混合液，通過硅膠柱色譜，在無水乙醇的洗脫下得到了分離？在柱色譜中，固定相硅膠是極性吸附劑，對極性越大的組分吸附力越強，由實驗可知，羅丹明B被吸附的力較大，所以遷移速度較慢，二甲基橙被吸附的力較弱，所以遷移速度較快。在此分離過程中，由于組分的極性大小不同，遷移速度不同，所以可以被分離第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術問題2：在實驗中，收集二甲基橙（黃色）洗脫液之后，羅丹明B（紅色）在柱子上部，無水乙醇的洗脫較難洗脫，如何快速的洗脫下該組分？羅丹明B極性較大，被硅膠吸附的力較強，無水乙醇極性較小，難以洗脫下該組分，可以用極性較大的含水乙醇洗脫該組分。第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術（三）操作技術1.薄層色譜法

步驟：

鋪板計算Rf值活化點樣展開顯色結果判斷第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術（三）操作技術1.薄層色譜法

步驟：

鋪板干法鋪板(軟板）濕法鋪板（硬板）：吸附劑＋黏合劑黏合劑：羧甲基纖維素納（0.5％～1％）（ＣＭＣ－Ｎa）第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術（三）操作技術1.薄層色譜法

步驟：

活化105℃，30min干燥器貯存第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術（三）操作技術1.薄層色譜法

步驟：

點樣定性時用普通毛細管定量時用微量注射器或微量定量毛細管應注意原點的直徑不得超過2-3mm.第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術（三）操作技術1.薄層色譜法

步驟：

展開第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術（三）操作技術1.薄層色譜法

步驟：

可見光顯色

紫外光顯色

顯色劑顯色顯色第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術（三）操作技術1.薄層色譜法

步驟：

計算Rf值第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術（三）操作技術1.薄層色譜法

步驟：

應用：

根據Rf值，

可鑒別真偽；

根據斑點的顏色深淺、大小，

可做含量分析。

結果分析第三節

色譜分離方法與技術

一、吸附色譜技術（三）操作技術2.柱色譜法

將分離材料裝入柱狀容器中，以適當洗脫液進行洗脫而使不同成分分離的色譜分離方法。柱色譜法分離樣品量大，大多數情況下均為準備性分離。步驟：

裝柱上樣洗脫收集第三節

色譜分離方法與技術

二、分配色譜技術

思考：硅膠的作用是什么？硅膠所含的水起到什么作用？

乙醚的作用是什么？A成分和B成分的極性大小比較？該色譜是正相還是反相色譜？第三節

色譜分離方法與技術

二、分配色譜技術原理：利用混合物中的各種成分在互不相溶的兩相溶劑中的分配系數不同而將混合物進行分離的方法。概念：以液體為固定相，用與其不相混溶的（或很少混溶）的溶劑做流動相的色譜法稱分配色譜。

第三節

色譜分離方法與技術

二、分配色譜技術（一）基本原理：當流動相流經固定相時，各成分在兩相之間不斷發生分配，易溶于流動相的成分隨流動相流動遷移速度就快，易溶于固定相的成分流動流動就慢，這樣就可以分離。分析圖示：柱色譜中硅膠所含的水作為固定相，當流動相乙醚流經固定相水的時候，A.B兩個成分在水和乙醚中的溶解度不一樣，易溶于乙醚的B成分隨著乙醚快速流出，易溶于水的A成分流出較慢。根據相似相溶的原理，可知A的極性較大，B的極性較小。

第三節

色譜分離方法與技術

二、分配色譜技術（一）基本原理：（二）載體1、含義：分配色譜中負載（或支持）固定相溶液的物質，也稱支持劑或擔體。2、常用載體

硅膠、硅藻土、

色譜濾紙

第三節

色譜分離方法與技術

二、分配色譜技術（三）固定相和流動相

固定相流動相用于分離的成分遷移速度正相分配色譜極性較大，水、酸堿、鹽的緩沖液、甲醇等極性較小，與固定相不相混溶的有機溶劑親水性成分弱親脂性成分極性小的成分快反相分配色譜親脂性成分第三節

色譜分離方法與技術

二、分配色譜技術分配色譜按操作形式可分為：