食源性致病菌PCR檢測(cè)策略的建立和優(yōu)化開題報(bào)告一、背景食源性疾病是指人體因食用了受到污染的食物或飲用水，而導(dǎo)致疾病的一類感染性疾病。食源性疾病不僅嚴(yán)重危害人體健康，還給社會(huì)和經(jīng)濟(jì)帶來巨大損失。據(jù)統(tǒng)計(jì)，僅在中國，每年就有超過2000萬人患上食源性疾病，其中死亡人數(shù)更是不容忽視。為保障公眾健康，保證食品安全，建立快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)方法顯得尤為迫切。在目前人類已知的食源性致病菌中，Salmonella、Listeria、Campylobacter、Escherichiacoli（E.coli）等在食品安全中占據(jù)著重要地位。對(duì)于這些致病菌的快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)，已經(jīng)變成了食品安全領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。現(xiàn)階段，雖然市場(chǎng)上已經(jīng)有一些針對(duì)食源性病原菌的檢測(cè)試劑盒，但大多數(shù)是基于Enzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)和文化方法（通常需經(jīng)過好幾個(gè)小時(shí)甚至幾天才能得到結(jié)果的方法）進(jìn)行檢測(cè)的。在實(shí)際操作和應(yīng)對(duì)突發(fā)情況上存在著很大的不便。反之，PCR技術(shù)卻能夠輕易對(duì)食源性致病菌進(jìn)行準(zhǔn)確、快速的檢測(cè)，不用依賴培養(yǎng)樣品，能夠避免無法培養(yǎng)和多重耐藥菌株的檢測(cè)困難。二、研究目的針對(duì)目前市場(chǎng)上的食源性病原菌檢測(cè)方法在實(shí)際應(yīng)用中存在的不便和困難，以及PCR技術(shù)優(yōu)勢(shì)的明顯性，本文旨在建立一種魯棒的、靈敏度高、特異性強(qiáng)的PCR檢測(cè)方法，以實(shí)現(xiàn)食源性病原菌檢測(cè)工作的快速和準(zhǔn)確。三、研究?jī)?nèi)容和方法1、樣品制備：從市場(chǎng)上購買不同種類的食品樣品，收集病原菌的DNA作為實(shí)驗(yàn)材料。2、引物設(shè)計(jì)：根據(jù)已知的病原菌屬種序列，設(shè)計(jì)合適的引物。3、PCR反應(yīng)：PCR反應(yīng)分別采用標(biāo)準(zhǔn)PCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR，以實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)菌的特異性、靈敏度和快速檢測(cè)等需求。并對(duì)PCR反應(yīng)體系的組成、循環(huán)參數(shù)、酶種類、濃度等條件進(jìn)行摸索和優(yōu)化。4、檢測(cè)結(jié)果：檢測(cè)PCR反應(yīng)后的結(jié)果，利用凝膠電泳或熒光定量PCR技術(shù)對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。四、研究意義實(shí)現(xiàn)食源性病原菌快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)，對(duì)食品安全工作的重要性不言而喻。此項(xiàng)目的研究意義在于：1、探討PCR技術(shù)在食源性病原菌檢測(cè)中的應(yīng)用范圍和可行性；2、建立一種魯棒的、靈敏度高、特異性強(qiáng)的PCR檢測(cè)方法。在檢測(cè)時(shí)間、準(zhǔn)確性等方面相比文化方法和ELISA，都具有優(yōu)勢(shì)；3、為相關(guān)科技工作者提供一定的參考和指導(dǎo)。五、預(yù)期結(jié)果1、建立一種基于PCR技術(shù)的食源性病原菌檢測(cè)方法；2、優(yōu)化PCR反應(yīng)體系和參數(shù)，找到最佳條件；3、通過驗(yàn)證檢測(cè)結(jié)果，發(fā)現(xiàn)和確認(rèn)食品樣品中存在的食源性疾病病原菌。六、研究難點(diǎn)1、如何設(shè)計(jì)特異性好、敏感度強(qiáng)的引物；2、如何在樣品中去除攜帶雜菌的影響，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性；3、如何在PCR反應(yīng)體系和參數(shù)上進(jìn)行優(yōu)化，尋找最佳組合方案；4、如何驗(yàn)證檢測(cè)結(jié)果的可靠性和有效性。七