新感染的證據第1頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五第三章 感染的證據感染是指病原生物入侵宿主，與宿主免疫防御系統相互作用，引起宿主不同程度病理變化的過程。感染性疾病只是感染的一種較為嚴重的結果。第2頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五一、概述-1Evidenceofinfectionincludesclinicalsignsandsymptoms,informationofinfectionepidemiologyandetiologydiagnosis.Learnmoreabouttheknowledgeofclinicalandepidemicofinfectiousdiseasemayhelpthelaboratoryinetiologydiagnosisofinfection.第3頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五概述-2臨床微生物實驗室的主要任務是為感染性疾病的診斷提供病原學證據形態學證據培養與鑒定的證據免疫學證據基于病原體組分檢測的證據（如抗原檢測和核酸檢測）站在檢驗的角度學習感染的臨床和流行病學證據。第4頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五第一節 感染的臨床證據全身感染的常見癥狀和體征發熱（fever）定義分類：感染性平；非感染性熱型與感染性疾病及病原體的關系（提示診斷）（圖1傷寒沙門菌感染？

2漢坦病毒感染？

3瘧原蟲感染？

4登革病毒感染？

5回歸熱螺旋體感染？）第5頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五全身感染的常見癥狀和體征

2發疹（eruption）3肝脾腫大Tertiarysyphilisontheface

Thelesionsofvaricella

Varicella-zostervirusinfection

第6頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五局部感染的常見癥狀和體征呼吸道感染咳痰腸道感染腹瀉泌尿道感染神經系統感染運動系統感染皮膚感染和血液感染…………第7頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五有診斷意義的特殊癥狀和體征 感染性疾病特殊癥狀和體征病原體傷寒無欲貌，傷寒玫瑰疹傷寒沙門菌流行性出血熱酒醉樣面容漢坦病毒狂犬病驚恐不安，對聲、光、風等極為過敏，并伴喉頭緊縮感，傷口附近感覺異常，有麻、癢、痛及蟻咬感狂犬病毒鉤端螺旋體病腓腸肌刀割樣疼痛鉤端螺旋體登革熱劇烈肌肉和骨關節疼痛，呈屈背彎腰的體態登革病毒百日咳陣發性痙攣性咳嗽伴高音調的雞鳴樣吼聲百日咳桿菌霍亂無痛性腹瀉，腹直肌痙攣性腹痛而不伴里急后重，米泔水樣大便，無糞臭霍亂弧菌第8頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五第二節 感染的流行病學證據 一、 感染性疾病流行的基本要素

1. 傳染源（infectionsources） （1） 患者（2） 隱性感染者（3） 病原攜帶者（4） 受感染的動物

2. 傳播途徑(routeoftransmission)

3. 人群易感性（herdsusceptibility）第9頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五第二節 感染的流行病學證據二、 有利于感染診斷的其他要素

1年齡

2職業

3接觸史和生活習慣

4旅行和變遷情況 第10頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五第三節 感染的病原學證據、柯赫法則與感染的病原學證據第11頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五柯赫法則1病原微生物一定于感染性疾病個體中，而在健康的個體中不存在。2一定能分離和純培養所懷疑的病原微生物。3當用分離的病原微生物接種敏感的動物模型時，可以導致相同的疾病。4相同的病原微生物可再次從這種被感染的動物模型中分離到。柯赫法則作為判斷微生物和感染性疾病之間因果關系的標準。第12頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五柯赫法則完善與發展柯赫法則還有待補充和發展1由于技術的限制，目前仍有一些微生物不能在體外獲得純培養。2在些感染目前仍然沒在建立相應的動物模型。3在些細菌本來不致病，但是當菌群失調、獲得了外來的毒力因子、因創傷或手術而到達無菌的深部組織以及宿主免疫缺陷時而變為致病菌。第13頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五瑞沃斯法則（Riverspostulates）柯赫法則和許多病毒感染性疾病的實驗研究結果不符。1在所有患者體內均應該存在并可以分離到該病毒，而在健康者體內并不存在。2該病毒可以從患者體內分離并在實驗室內利用宿主細胞進行體外培養。3可以通過微孔濾膜4當將原先宿主或相關生物體和分離的病毒共培養時，會導致相應感染性疾病的發生。5共培養的宿主體內可再次分離到該病毒。6感染后的宿主體內可以檢測到相應的病毒免疫反應。

SARS病原體的發現與柯赫法則第14頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五分子柯赫法則

（MolecularKoch‘s

Postulates）

1致病基因或基因表達產物始終和毒力表型相關聯。2當該致病基因滅活或敲除后，微生物即失去致病能力。3當導入新的野生型致病基因后，微生物又恢復了致病性。4致病基因表達產物誘導產生的抗體可以中和微生物的致病力。第15頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五二、細菌感染的病原學證據（一） 鏡檢證據 （二） 培養鑒定證據 （三） 免疫學證據（四）核酸證據第16頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五（一） 鏡檢證據 大小、形態、分布（排列）和染色特性主要用于細菌的初步分群、臨床痰液標本的質量評估、病原菌的初步診斷和指導進一步的鑒定試驗。第17頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五（一） 鏡檢證據細菌的染色--常用方法種類：正染色法：細菌著色單染色法：一種染料。復合染色法：兩種以上染料革蘭染色、抗酸染色、熒光染色和酶標記抗體染色。負染色法：細菌不著色，背景著色。常用于莢膜和芽胞的觀察第18頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五（一） 鏡檢證據 革蘭染色最常用革蘭染色特征常見病原菌革蘭陽性球形成對或鏈狀排列鏈球菌屬（“矛頭狀”：肺炎鏈球菌），腸球菌屬，消化鏈球菌屬。球形成簇排列葡萄球菌屬，微球菌屬。桿狀桿菌屬（大桿菌，需氧），梭菌屬（厭氧），棒狀桿菌屬（柵欄樣，需氧），丙酸桿菌屬（多形性，厭氧），李斯特菌屬（小桿菌），諾卡菌屬（分枝狀，絲狀，需氧），放線菌屬（分枝狀，絲狀，厭氧）。革蘭陰性

球狀奈瑟菌屬（雙球菌，“腎形”），卡他莫拉菌屬（雙球菌），韋榮球菌屬（厭氧）。桿狀腸桿菌屬（大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌、沙門菌、“別針樣”：鼠疫耶爾森菌），假單胞菌屬，類桿菌屬（厭氧），梭形桿菌屬（厭氧），嗜血桿菌屬（多形性），布氏桿菌屬（球桿菌屬），弧菌屬（彎曲狀），彎曲桿菌屬（“海鷗”樣），螺桿菌屬（彎曲狀）革蘭染色難以分辨病原體軍團桿菌屬、支原體屬、衣原體屬、立克次體屬、分枝桿菌屬、梅毒螺旋體第19頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五革蘭染色-例淋病奈瑟菌光鏡圖破傷風梭菌光鏡圖第20頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五線索細胞光鏡圖革蘭染色-例第21頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五部分可用于初步診斷的鏡檢證據抗酸染色熒光染色女性宮頸涂片沙眼衣原體DFA染色陽性Ziehl–Neelsenacid-faststainofsputumcontaining4+tuberclebacilli

第22頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五抗酸染色抗酸性是指病原體經苯酚復紅初染后能抵抗一定濃度的鹽酸乙醇脫色的特性。1分枝桿菌能抵抗3%的鹽酸乙醇脫色屬強抗酸性。2諾卡菌只能抵抗低濃度的鹽酸乙醇脫色屬部分抗酸性。3部分原蟲也具有抗酸性，但鏡下形態與細菌明顯不同，臨床診斷時要注意鑒別。第23頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五第24頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五（二）培養鑒定證據大多數病原菌的形態與染色并無特征性，因此需要用培養的方法來分離與鑒定細菌。大部分醫學重要的細菌均能夠在半固體營養瓊脂培養基上生長。實驗室應根據不同細菌的營養需要選擇性接種一種或多種培養基，避免漏檢。第25頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五（二）培養鑒定證據 觀察菌落形態溶血性產色素情況培養條件鑒定第26頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五觀察菌落形態菌落大小、形狀、色澤、邊緣、透明度、濕潤度、溶血性、色素情況菌苔第27頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五溶血性

第28頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五產色素情況第29頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五鑒定第30頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五（三） 免疫學證據1抗原檢測有些細菌即使用生化反應也難以區別，但其細菌抗原成分卻不同，利用已知的特異抗體測定有無相應的細菌抗原可以確定菌種慬菌型。培養方法不能檢出的細菌，因尚有抗原存在，在短期內仍可被檢出，從而有助于明確病因。個別情況下還可利用噬菌體對細菌抗原進行型別分析，用于流行病學追蹤調查。第31頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五（三） 免疫學證據方法和技術常用的方法玻片凝集試驗其他如對流免疫電泳、放射免疫、酶免疫、氣相色譜等方法臨床應用注意事項第32頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五（三） 免疫學證據常用的方法和技術臨床應用注意事項第33頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五（三） 免疫學證據2抗體檢測人體受細菌感染后，經一定時間產生抗體，抗體的滴度隨病原菌感染的過程而增多。因此，用巳知的細菌或抗原檢測患者體液中有無相應抗體及抗體滴度的動態觀察，可輔助診斷。血清學試驗適用于抗原性較強的病原菌。肥達試驗傷寒預防接種回顧性診斷早期診斷傳統細菌檢測方法的補充第34頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五（四）核酸證據

通過檢測細菌遺傳物質來證明感染的存在也許是病原體檢查最為直接的方法。基因探針PCR基因芯片第35頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五（四）核酸證據基因探針PCR基因芯片應用優缺點….軍團桿菌屬、支原體屬、衣原體屬、立克次體屬、分枝桿菌屬、梅毒螺旋體第36頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五（四）核酸證據基因探針制備核酸探針雜交標記物信號知道雜交結果并判斷病原體的性質。2.

PCR特異引物擴增瓊脂糖電泳觀察擴增結果，檢出病原體。第37頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五三、真菌感染的病原學證據真菌的病原學診斷方法包括 鏡檢培養 血清學試驗核酸檢測以鏡檢、培養最為常用

第38頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五（一） 鏡檢證據 鏡檢是獲取真菌感染證據最簡單、快速和高效的實驗室診斷方法。高倍鏡、油鏡菌絲、孢子分直接涂片法

10%－30%NaOH染色涂片法革蘭染色、乳酸酚棉籃染色、印度墨汁染色、剛果白染色、果莫里六胺銀染色、過腆酸錫夫染色第39頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五

鏡檢證據 真菌染色方法和應用染色方法臨床應用革蘭染色屬細菌鑒別染色法，也用于真菌。假絲酵母菌和隱球菌呈革蘭陽性。乳酸酚棉籃染色適合真菌染色的強酸性染料，主要用于絲狀真菌及其培養后特征性的分生孢子的染色。印度墨汁染色在黑色的背景中使細菌莢膜或真菌孢子周圍呈現透亮區，常用于自腦脊液標本的產莢膜的細菌和隱球菌。剛果白染色熒光素與真菌細胞壁上的纖維素結合，在紫外光激發下，發出籃白色熒光。適用于各種臨床標本的真菌檢測。與KOH合用，熒光色更亮。果莫里六胺銀染色常用于真菌和肺囊蟲的包囊期染色。主要用于鑒定肺、支氣管組織中的肺囊蟲和各種組織和細胞中的真菌，是測定真菌各成分的最好方法。過腆酸錫夫染色可以使真菌各成分著色，迅速鑒定菌絲型霉菌和酵母，諾卡氏菌難染色，皮炎芽生菌呈多色。第40頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五真菌染色方法和應用-例第41頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五（二）培養證據真菌的確診需要培養和鑒定。培養基普通培養基特殊培養基溫度25－28度雙相性真菌可隨溫度變化而發生菌落形態及結構的變化，26度時為菌絲相，37度時為酵母相。真菌培養過程中所表現出的生長速度以及培養后的大小、形態、顏色、質地和氣味等均有利于真菌的初步鑒定，純培養菌落的進一步染色鏡檢和生化試驗有利于真菌的確診。第42頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五（二）培養證據培養證據培養方法培養溫度菌落形態雙相真菌免疫學證據核酸證據第43頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五（三）其他證據血清學試驗有助于侵襲性真菌的診斷DNA探針技術可以縮短雙相真菌的培養時間第44頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五四、病毒感染的病原學證據 病毒感染的病原學證據包括

鏡檢證據培養證據免疫學證據核酸證據。第45頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五四、 病毒感染的病原學證據 （一） 鏡檢證據 光學顯微鏡檢查電子顯微鏡檢查適應癥 單純皰疹病毒感染患者的宮頸巴氏涂片SARS-CoV（PUMC01株）病毒顆粒電鏡負染照片（18000）第46頁，共52頁，2023年，2月20日，星期五（二） 培養的證據培養細胞中是否有病毒復制的方法有:①觀察病毒感染細胞后出現的細胞病變效應（cytopathiceffects，CPE）。②觀察病毒感染細胞的紅細胞吸附現象（hemadsorption）。③檢測病毒感染細胞分泌的干擾素④通過熒光抗體技術檢測病毒感