動物細胞工程生活聯(lián)系：

燒傷病人的治療通常是取燒傷病人的健康皮膚進行自體移植，但對于大面積燒傷病人來講，健康皮膚很有限，所以需要用培養(yǎng)的人細胞構建人造皮膚最基礎的是

——動物細胞培養(yǎng)技術動物細胞工程常用的技術：動物細胞培養(yǎng)動物細胞核移植動物細胞融合單克隆抗體等1、什么叫動物細胞培養(yǎng)？2、動物細胞培養(yǎng)的原理是什么？從動物機體中取出相關組織，將它們分散成單個細胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。細胞增殖（有絲分裂）一、動物細胞培養(yǎng)概念及原理過程是如何進行的?放入二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)過程示意圖

結合問題，閱讀書本，六人一組，討論動物細胞培養(yǎng)的流程圖。（5min)學習活動：結合問題思考流程1、為何動物細胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞呢？2、胰蛋白酶的作用是什么？由此可說明細胞間的物質主要是什么成分？3、培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿的內表面為何要光滑、無毒？分散成單個細胞易培養(yǎng)，營養(yǎng)容易供應，代謝廢物容易排出；也可使細胞水平的相關技術得以實現。水解細胞間的物質，說明細胞間的物質主要是蛋白質。易于細胞貼附放入二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)過程細胞貼壁：懸液中分散的細胞很快貼附在瓶壁上。接觸抑制：當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞就會停止分裂增殖二、動物細胞培養(yǎng)相關概念原代培養(yǎng)：通常將直接從動物體內取出的動物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)的細胞出現接觸抑制后，貼滿瓶壁的細胞需要重新用胰蛋白酶等處理，然后分瓶繼續(xù)培養(yǎng)，讓細胞增殖。這樣即為傳代培養(yǎng)。二、動物細胞培養(yǎng)相關概念細胞株：從原代培養(yǎng)細胞群中篩選出進行傳代培養(yǎng)的細胞，部分可以傳到40-50代，其遺傳物質沒有發(fā)生變化。這部分細胞成為細胞株。細胞系：傳到40-50代后有部分細胞遺傳物質發(fā)生了變化，帶有癌變的特點，可能在培養(yǎng)條件下無限制的傳代下去。這部分細胞稱為細胞系。二、動物細胞培養(yǎng)相關概念動物細胞培養(yǎng)過程總結動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細胞懸浮液胰蛋白酶10代細胞原代培養(yǎng)50代細胞傳代培養(yǎng)細胞株無限傳代細胞系單個細胞加培養(yǎng)液遺傳物質未改變遺傳物質已改變1、選用組織時，一般用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做培養(yǎng)材料，而不用老齡動物的因為幼齡組織或器官上的細胞增殖能力強，有絲分裂旺盛，容易培養(yǎng)。老齡動物的細胞則相反。特別提醒：2、胰蛋白酶處理組織時要注意時間，

不能夠用胃蛋白酶代替嗎

控制好消化時間，太長會消化細胞膜上的蛋白質因為兩者的最適PH不同，而正常組織細胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PH較接近.特別提醒：3、動物細胞培養(yǎng)最終不能培養(yǎng)成新個體動物細胞培養(yǎng)只能使細胞數目增多，不能發(fā)育成新的動物個體特別提醒：無菌、無毒全部的營養(yǎng)物質適宜的溫度和PH值必要的氣體條件3、動物細胞培養(yǎng)的條件動物細胞培養(yǎng)條件：1、無菌、無毒的環(huán)境（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清等。）3、溫度和PH

36.5左右,7.2-7.44、氣體環(huán)境：

O2

和

CO2（95%空氣和5%CO2）補充合成培養(yǎng)基缺乏的營養(yǎng)物質維持培養(yǎng)液中的PH值細胞代謝必需①生物制品的生產②用于基因工程③用于檢測有毒物質④細胞的生理、病理、藥理研究4、動物細胞培養(yǎng)技術的應用1．動物細胞工程常用的技術手段中，最基礎的是A.動物細胞培養(yǎng)B.動物細胞融合C.單克隆抗體D.胚胎核移植

練一練~~~Let'stry!2．貼壁細胞的分裂方式具體是A.無絲分裂B.有絲分裂C.減數分裂D.增殖獲得細胞細胞的全能性植物體培養(yǎng)結果或細胞產物快速繁殖、培育無病毒植株等培養(yǎng)目的葡萄糖、動物血清蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質細胞增殖原理動物細胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目植物細胞和動物細胞培養(yǎng)的比較細胞群體3．關于動物細胞培養(yǎng)的敘述，不正確的是

A.動物細胞培養(yǎng)前要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細胞分散開來B.通常將動物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)C.動物細胞培養(yǎng)只能傳50代左右，所培育的細胞全部衰老死亡D.用于培養(yǎng)的細胞大都取自胚胎或幼齡動物的器官或組織

練一練~~~Let'stry!

根據動物細胞核仍具有全能性的特點,怎樣將動物細胞的全能性表達?

再想一想利用動物體細胞核移植技術理論基礎：動物的細胞核具有全能性二、動物體細胞核移植技術

1、概念：將動物的一個細胞的細胞核，移入一個已經去掉細胞核的卵母細胞中，使其重組并發(fā)育成一個新的胚胎，這個新的胚胎最終發(fā)育成動物個體。

用核移植的方法得到的動物稱克隆動物二、動物體細胞核移植技術2、核移植的種類胚胎細胞核移植體細胞核移植（易）（難）學習活動三：思考探究1997年，美國威斯康星州的一個奶牛場有一頭名叫盧辛達的奶牛，年產奶量為30.8t，創(chuàng)造了世界奶牛產奶量的最高記錄。目前世界各國高產牛奶場的奶牛，平均每年產量為十幾噸，而我國平均水平僅有3－4噸。

你能想辦法繁殖盧辛達的后代，使年產奶量為30.8t嗎？供體細胞培養(yǎng)（MⅡ卵母細胞）減數第二次分裂中期去核的卵母細胞供體細胞注入去核卵母細胞激活受體細胞，完成分裂、發(fā)育胚胎移植代孕牛子宮克隆牛3、過程：供體細胞（供核）細胞培養(yǎng)體細胞卵巢卵母細胞（MⅡ中期：供質）去核無核卵母細胞注入細胞融合重組細胞構建重組胚胎胚胎移植代孕母體生出與供體奶牛遺傳基礎相同的犢牛歸納:1.共分成兩大階段：核移植和胚胎移植2.取卵細胞作受體細胞的原因是:它是最大的細胞,易操作,它發(fā)育可直接表達性狀3.嚴格來說新個體有卵巢母細胞的細胞質所以有兩個親本的性狀核移植過程①加速家畜遺傳改良進程，促進優(yōu)良畜群繁育②保護瀕危物種，增加存活數量③克隆動物作為生物反應器，生產醫(yī)用蛋白④可以作為異種移植的供體4、應用前景：⑤可以用于組織器官的移植5、存在問題：①成功率低②克隆動物存在健康問題③克隆動物食品的安全性問題存有爭議從母羊甲的體細胞中取出細胞核，注入到母羊乙的去核卵母細胞中，融合后的細胞經卵裂形成早期胚胎，再將胚胎移到另一只母羊丙的子宮內，出生的小羊大多數性狀

A.難以預測 B.像甲C.像乙D.像丙

練一練~~~Let'stry!2.下列有關克隆的敘述，不正確的是

A.生物體通過體細胞進行的無性繁殖B.將某種瘤細胞體外培養(yǎng)繁殖成大量細胞C.扦插和嫁接實質上也是克隆

D.將雞的某個DNA片段整合到小鼠的DNA中練一練~~~Let'stry!1、動物細胞培養(yǎng)的過程：

幼齡動物取動物器官和組織剪碎組織胰蛋白酶處理細胞培養(yǎng)單個細胞加培養(yǎng)液細胞懸液10代細胞原代培養(yǎng)50代細胞傳代培養(yǎng)無限傳代遺傳物質未改變遺傳物質已改變1、動物細胞培養(yǎng)的過程：問題1、植物組織培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的嗎？２、動物細胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的嗎？３、為何動物細胞培養(yǎng)過程將組織分散成單個細胞的呢？４、如何將動物組織分散成單個的細胞呢？５、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說明細胞間的物質是什么成份？沒有是成塊的組織細胞靠在一起,彼此限制了細胞的生長和增殖先用剪刀剪碎,后用蛋白酶處理胰蛋白酶水解蛋白質細胞間的成份是蛋白質(膠原蛋白等)思考題６、細胞膜的主要成份是什么？７、胰蛋白酶能將細胞消化掉嗎？８、既然胰蛋白酶能將細胞消化掉，那將動物組織分散成單個細胞要注意什么問題呢？９、能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？為什么？10、動物細胞培養(yǎng)取材時，一般是取胚胎組織或幼齡動物的組織或器官，請解釋原因？蛋白質和磷脂能注意時間的控制不能，因為兩者的最適PH不同，而正常組織細胞的生存環(huán)境與胰蛋白酶的最適PH較接近胚胎組織或幼齡動物的組織或器官分裂、增殖旺盛11、貼附性細胞培養(yǎng)瓶內表面為何要光滑、無毒？12、培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng)到什么時候就不再分裂、增殖？13、如果此時細胞數量并未達到人們的需求，應該怎樣辦？細胞株和細胞系通常是培養(yǎng)多少代的細胞?易于培養(yǎng)細胞貼壁，進行生長增殖

當貼壁細胞分裂生長到表面相互接觸時，細胞分裂就會停止分裂增殖，這種現象叫接觸抑制。

將貼滿瓶壁的細胞用胰蛋白酶處理，然后繼續(xù)增殖。這樣的過程叫做傳代培養(yǎng)思考題14、如何理解原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)？15、傳代培養(yǎng)的細胞能一直傳代下去嗎？16、有些為何能一直傳下去嗎？動物細胞培養(yǎng)就是為了得到這些細胞嗎？17、人類一般保存的是哪類細胞呢？為什么？用于植皮的細胞培養(yǎng)應該不多于多少代？

上述過程中，在第一培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)就