1、DxI800原理概述概述DxI800是目前世界上最先進，效率最高的全自動化學發光分析儀用于多種體液微量物質的定量、半定量以及定性實驗采用順磁性顆粒，堿性磷酸酶激發的AMPPD，RV穿越系統，試劑盒覆膜技術等分析方式分析方式檢測技術檢測技術分別技術分別技術免疫標志物開展放射性同位素(Radioisotopes) - RIA優秀的靈敏度，抗干擾才干好效期短，重現性差，手工操作，分析時間長，污染物的處置等熒光素(Fluorophores) - FIA穩定，較好的靈敏度和重現性其它熒光物的干擾，線性范圍窄酶(Enzymes) - EIA非常容易運用對定量分析所要求的靈敏度和寬線性難以實現化學發光物質

2、- CLEIA優秀的靈敏度和寬線性，抗干擾才干好類型 閃爍型(flash)，輝光型(glow) 穩定性根據分子構造會有不同表現試劑效期開瓶效期定標周期目前常見的免疫分析發光物質魯米那：1928年，早期開發的發光標志物吖啶酯：直接化學發光，閃爍型吖啶甲酰胺：直接化學發光，閃爍型三聯吡啶釕：電化學發光，閃爍型AMPPD：酶促化學發光，輝光型為什么Beckman采用AMPPD3-2-螺旋金剛烷-4-甲氧基-4-甲基-4-3-磷酸氧基-苯基-1，2-二氧乙烷AMPPD 為什么Beckman采用AMPPDP.A. Bonini et al. “Immunoassay systems標志物類型標志物類型標

3、志物稱號標志物稱號 可到達的檢測限可到達的檢測限/L放射性同位素放射性同位素3H5x10-15 mole 125I5x10-17 mole酶酶 Beta-galactosidase1.5x10-16 mole Horseradish peroxidase3x10-16 mole Alkaline phosphatase5x10-17 mole生物發光生物發光Firefly luciferin/luciferase5.6 x 10-16 photons/min/mg Enzyme enhanced10-19mole Firefly luciferin/luciferase10-19mole熒光熒

4、光Europium(III) ion2x10-17 mole Fluorescein10-13 mole 酶酶/chemiluminescencePeroxidase/luminol/enhancer10-15 mole Glucose-6-phosphate dehydrogenase peoxidase/10-18 mole isoluminol * AMPPD10-21 mole為什么Beckman采用AMPPDAMMPPD良好的輝光特性，發光穩定時間可達1小時，檢測方便穩定。磁微粒子直徑0.08 +/- 0.02 mm ，接觸面積大快速的反響動力學較少的樣品量提高檢測的靈敏度極好的批內

5、重現性可以探針取放，實現自動化有磁性磁顆粒均勻的懸浮于整個反響體系分析物在磁顆粒外表捕獲磁顆粒在磁場中被清洗磁顆粒重新懸浮非常容易清洗QS Disp #1MagAsp#1MixDisp #2MagAsp#2MixDisp #3MagAsp#3MixAddSubIncu-bateRead4 minutes10 x 1 sec.6 minutes分析方式分析方式- 有很多種方式可定義為分析的 “處方設定一個最優化的方式(可變量)去最優化工程的臨床運用 分析方式的變化可變量夾心法(Sandwich) vs.競爭法(competitive)標志物的放置同步(Simultaneous) vs. 分步(s

6、equential)試劑/樣品參與的順序孵育的次數(步驟)清洗分別的次數(步驟)試劑/樣品的體積/濃度孵育的時間孵育的溫度DxI800的分析方式根本分析方式夾心法(Sandwich)競爭結合(Competitive binding)試劑的參與 同步(Simultaneous) (1步, 1次清洗)分步(Sequential) (2步, 2次清洗)“Piggyback (2步, 1次清洗)夾心法分析方式捕捉抗體(Capture antibody)和標志抗體(labeled antibody)每個抗體的存在可以與更多的分析物發生反響分析更可靠,準確,準確和可重現性分析更靈敏由于一切分析物都參與反響

7、每個抗體的不同可以針對不同的抗原決議簇，或二個在同一個抗原決議簇分析更特異由于二個抗體同時反響適宜與檢測大分子物質，分子量大有更多的特異性抗原決議簇可選擇bhCGbhCG hTSH hTSHIgEIgEProlactinProlactinhFSHhFSH hLH hLHFerritinFerritinTnITnI一步三明治法兩步三明治法夾心法定標夾心法定標RLU 隨濃度添加而添加SIGNALCONCENTRATIONLog linear scale競爭法分析方式只需捕捉抗體主要針對小分子物質檢測 沒有足夠外表積的分析物去符合 “夾心法 要求一定量的捕捉抗體使得反響復合物為只是“抽樣性反響時間較

8、短T3 FT3 B12 Digoxin ProgesteroneT4 FT4 Folate Cortisol Estradiol一步競爭法兩步競爭法兩步競爭法標志抗體兩步競爭法標志抗體競爭法定標RLU隨濃度添加而降低規范品 參比物USP (United States Pharmacopia)小分子物質，如，類固醇激素，藥物等質譜分析(mass spectrometry)并規范化WHO 世界衛生組織大分子物質，如，蛋白質/多肽等規范品(Pool)制備，送近 20 參比實驗用免疫學技術進展符值規范品不斷分派到全部用完，后重新制備1st IRP，2nd IRP，3d IRP內部(In-house)參

9、比物廠家產生的主定標曲線覺得節省的校正型 2 點定標會添加定標的頻率對非線性的規范曲線能夠會有問題(大多數的免疫分析產生的是非線性的規范曲線)多點定標曲線定量 典型的是6個程度, 定性 典型的是2個程度可以到達最大的靈敏度,準確性和精細度可以有更長的定標周期間隔DxI800 擬合定標曲線數學模型加權4參數邏輯曲線4PLC加權拐點平滑樣條加權非拐點平滑樣條直線速率定標接受過程每個定標點反復做2次或更多，獲取RLU值DxI800用前述數學模型擬合數據點系統嘗試經過調整曲線參數，最小化數據點到曲線的間隔 。假設嘗試次數超越預設仍無法確定曲線，定標失敗假設一切定標測試中有2個或2個以上點有致命旗標，定

10、標也失敗有些測試還要調查S0的CV系統利用數據點到獲得的曲線間隔 以及曲線的外形，在曲線兩側計算出濃度接受范圍假設任何一個數據點計算濃度超出濃度范圍，定標失敗1、X軸：分析物濃度；2、Y軸：RLUs3、誤差區 4、呼應精度5、濃度精度曲線類型一條有效定標曲線總是向上或向下DxI 800定標分類定量多點定標，曲線，上行/下行，經過生成曲線可將相對光單位RLU轉化為濃度。測試結果為數值型。半定量多點定標，曲線，RLU轉化為數值型報告，可以將數值結果以定性方式報告定性定標提供cutoff值，每個測試RLU與cutoff值比較，分層報告。定標報告定標數據評價根據APF協議系統決議定標能否經過定標失敗處

11、置假設定標數據不滿足APF協議要求，將報失敗。尋覓定標失敗緣由是處理問題的關鍵。常見定標失敗緣由定標液次序放反。運用錯誤批號的定標液。定標液或試劑處置不當，或失效。儀器未執行日常保養發生系統錯誤。定標液試劑儀器定標失敗代碼RLUDose0No Value“No Value Results for S0 or S5 Typically one replicate of the SO calibrator for sandwich assays will give “no value as a result (May happen at S5 also)This does not mean the

12、 replicate was badThe software simply does not assign values S5案例 1定標失敗代碼：Insuff Data 緣由分析 Insuff Data 意味著定標短少至少兩個定標數據點數據點缺乏常見緣由為定標液缺乏，或由于系統錯誤導致某些定標測試被取消。察看本案例定標數據，發現沒有S5的數據。經查，S5定標液脫漏案例 2定標錯誤代碼：No Fit 分析1、NO FIT 意味系統無法擬合出曲線，緣由常見于違反運算法那么。對于no fit 案例，首先察看曲線的外形能否符合估計的外形，比如此案例鐵蛋白應為平滑上升曲線，但實踐一切的點都近乎在一個平

13、面。2、檢查定標點的RLU。發現一切的點都在6000左右。闡明根本沒有發生反響。3、檢查試劑，發現試劑缺乏。案例 3定標失敗代碼：Bad fit；沒有旗標、報警 分析1、bad fit的緣由是曲線無法滿足接受限2、察看曲線外形，正常。各程度RLU值，根本符合。但是定標點CV值明顯太大，應為導致bad fit緣由3、運轉system check。發現mean偏低，CV增大4、檢查發現底物管道破裂，導致氣泡。Washed Mean 4920 ()%CV 15.19 ()SubstrateMean 4579 ()%CV 8.21 ()Ratio 0.99UnwashedMean 3713543 ()

14、%CV 6.57 ()試劑、定標液嚴厲按照闡明書要求進展儲存。有些定標液需求復溶。混勻試劑要留意：悄然倒轉混勻，勿產生氣泡，不要適用渦旋混勻器。不要用除霜冰箱進展保管。底物易污染S0不含該物質的小牛血清非常容易受底物和緩沖液質量的影響何時需求定標定標曲線過期定標曲線過期新批號試劑新批號試劑QCQC失控失控重要部件維修重要部件維修/ /改換改換結果標注致命性錯誤Fatal Error不會報告結果非致命性錯誤Non-fatal Error僅標明測試進展的情況，結果依然報告常見致命性結果標注AEX：汲取的樣本曾經過期，通常由于耗材缺乏引起。處置：重新加載樣本，假設測試懇求仍為requested，直接編號標本裝載即可；假設測試懇求曾經被cancelled，重新編程。CLT：樣本堵塞。處置：清潔樣品針，和四根試劑針；重新加載樣本，假設測試懇求仍為requested，直接編號標本裝載即可；假設測試懇求曾經被cancelled，重新編程。IDN：RLU結果太低夾心法或太低/太高競爭法，無法和系統誤差區別。處置：檢查日志，看能否同時有報警。檢查試劑盒，重新運轉標本。QNS：樣本量缺乏。處置：檢查日志，能否有報警。重新運轉標本QSB：底物分配錯誤。處置：重新底物四次。