第二章 克隆技術章末復習一、植物組織培養和動物細胞培養的比較 植物組織培養動物細胞培養區別理論基礎(原理)細胞的全能性細胞增殖(有絲分裂)培養基固體或半固體培養基，需一定營養物質、激素、光照等條件液體培養基，營養物質、維生素、動物血清、ph等過程結果獲得新個體或細胞產品大量產生細胞或細胞產物用途快速繁殖名貴花卉和果樹；培養無病毒植物、轉基因植物；大規模生產藥物、食品添加劑、香料、色素等生產蛋白質制品如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等；檢測有毒物質；研究藥理病理；移植治療相同點都需人工條件下的無菌操作特別提醒(1)動物細胞培養基成分特有的動物血清含有蛋白質、氨基酸、葡萄糖、激素等多種成分。(2)兩技術手段培養過程中都進行有絲分裂，都是無性繁殖，都可稱為克隆，都不涉及減數分裂。(3)植物組織培養最終產生新個體，體現全能性；動物細胞培養產生大量細胞，不形成新個體，故不能體現全能性。訓練1下列屬于動物細胞培養與植物組織培養主要區別的是()a培養基成分不同b動物細胞培養不需要在無菌條件下進行c動物細胞可以傳代培養，而植物細胞不能d動物細胞能夠大量培養，而植物細胞只能培養成植株二、植物體細胞雜交和動物細胞融合比較項目植物體細胞雜交動物細胞融合(單克隆抗體制備)理論基礎細胞的全能性、細胞膜的流動性細胞膜的流動性、細胞增殖融合處理用纖維素酶、果膠酶除去細胞壁注射特定抗原免疫處理正常小鼠促融(1)物理法：離心、振動、電激； (2)化學法：聚乙二醇(1)物理法：離心、振動、電激；(2)化學法：聚乙二醇；(3)生物法：滅活的病毒過程意義及用途克服遠緣雜交不親和的障礙，大大擴展雜交的親本組合范圍；克服有性雜交的母系遺傳，獲得細胞質基因的雜合子，研究細胞質遺傳制備單克隆抗體；診斷、治療、預防疾病。例如：腫瘤定位診斷，放射性抗體腫瘤；生物導彈治療，抗體抗癌藥物腫瘤特別提醒(1)在誘導劑的作用下進行細胞的誘導融合，形成的雜種細胞有三種：aa型、bb型、ab型，只有ab型才是我們所需要的雜種細胞，所以需要用選擇性培養基進行篩選。(2)植物體細胞融合完成的標志是新細胞壁的生成。(3)植物體細胞雜交的終點是培育成雜種植株，而不是形成雜種細胞就結束。植物體細胞雜交克服了遠緣雜交不親和的障礙，大大擴展了可用于雜交的親本組合范圍。(4)制備單克隆抗體過程中有兩次篩選第一次篩選是將未融合的b淋巴細胞、骨髓瘤細胞以及bb融合、瘤瘤融合的細胞通過選擇培養基淘汰，篩選出b瘤融合的細胞。第二次篩選是將產生特定抗體的b瘤細胞通過細胞培養用相應抗原檢測的辦法篩選出來。因為從體內取免疫過的b淋巴細胞時取出很多種，形成的雜交瘤細胞有多種，所以需篩選出產生特定抗體的雜交瘤細胞。(5)獲取單克隆抗體的場所：若在體外進行雜交瘤細胞培養，則從培養液中提取。若在小鼠或其他動物腹腔中培養，則從腹水中提取。(6)單克隆抗體的優點：特異性強，靈敏度高，并可大量制備。訓練2關于現代生物技術應用的敘述，錯誤的是()a蛋白質工程可合成自然界中不存在的蛋白質b體細胞雜交技術可用于克隆動物和制備單克隆抗體c植物細胞培養技術可用于植物莖尖脫毒d動物細胞培養技術可用于轉基因動物的培育訓練3有性生殖的生物產生后代需進行受精作用，植物體細胞雜交要進行原生質體的融合，單克隆抗體的制備需進行動物細胞融合，可見細胞的融合技術有著廣泛的應用。下列為細胞融合的簡略過程，請據圖回答相關問題。(1)若a、b分別是基因型為hhrr、hhrr兩個煙草品種的花粉，且這兩對基因分別位于兩對同源染色體上。由于一對隱性純合基因(rr或hh)的作用，在光照強度大于800 lx時都不能生長。要想從融合細胞的培養液中分離出基因型為hhrr的雜種細胞，較為簡便的篩選方法是_。(2)若a、b表示兩種植物體細胞，則采用化學法形成c時，一般是用_作為誘導劑。由d細胞形成雜種植株的原理是_，這種育種方法的優點是_。(3)若a、b分別為骨髓瘤細胞和b淋巴細胞，則d細胞的特點是_。由d細胞產生的抗體與普通血清抗體相比較，具有_的特點。一般不能通過直接培養b淋巴細胞的方法生產單克隆抗體的主要原因是_。1植物組織培養依據的原理、培養過程的順序及誘導的植物激素分別是()細胞的全能性離體植物器官、組織或細胞根、芽生長素和細胞分裂素生長素和乙烯愈傷組織再分化脫分化植物體a、b、c、d、2在下列自然現象或科學研究成果中，能為“動物細胞具有全能性”觀點提供直接證據的是()a壁虎斷尾后重新長出尾部b蜜蜂的未受精卵細胞發育成雄蜂c用體外培養的皮膚治療燒傷病人d小鼠腺細胞的自我復制3下列關于細胞工程的敘述中，錯誤的是()a植物細胞融合必須先制備原生質體b試管嬰兒技術包括人工授精和胚胎移植兩方面c經細胞核移植培育出的新個體只具有一個親本的遺傳性狀d用于培養的植物器官或組織屬于外植體4下列有關原生質體的敘述中，正確的是()a組成原生質體的主要生命物質是水和蛋白質b原生質體包括細胞膜、液泡膜及兩者之間的原生質c去掉細胞壁的植物裸露細胞是原生質體d原生質體只能用于植物細胞工程5下列關于動物細胞培養的敘述，正確的是()a材料只能取自動物胚胎細胞b培養中的人的b淋巴細胞能夠無限地增殖c人的成熟紅細胞經過培養能形成細胞株d用胰蛋白酶處理肝組織可獲得單個肝細胞6單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細胞和b淋巴細胞誘導融合后，要用特定培養基篩選出雜交瘤細胞。在這種培養基上不能存活增殖的細胞是()b淋巴細胞小鼠骨髓瘤細胞b淋巴細胞自身融合細胞小鼠骨髓瘤細胞自身融合細胞雜交瘤細胞a bc d7動物體內的細胞不易受到外界細菌、病毒等微生物的感染，原代培養的細胞()a對微生物有一定的防御能力b細胞培養環境中可以有一定量的微生物c對微生物已失去了防御能力d剛離體的細胞必須生活在無菌條件下，以后的培養對無菌條件的要求不嚴格8植物體細胞雜交與動物細胞工程中所用的技術與原理不相符的是()a纖維素酶、果膠酶處理和胰蛋白酶處理酶的專一性b植物細胞培養與動物細胞培養細胞的全能性c原生質體融合與動物細胞融合生物膜的流動性d紫草細胞培養和雜交瘤細胞的培養細胞分裂9利用細胞工程方法，以sars病毒核衣殼蛋白為抗原制備出單克隆抗體。下列相關敘述正確的是()a用純化的核衣殼蛋白反復注射到小鼠體內，產生的血清抗體為單克隆抗體b體外培養單個b淋巴細胞可以獲得大量針對sars病毒的單克隆抗體c將等量b淋巴細胞和骨髓瘤細胞混合，經peg誘導融合后的細胞均為雜交瘤細胞d利用該單克隆抗體與sars病毒核衣殼蛋白特異性結合的方法可診斷出病毒感染者10.2009年4月25號，墨西哥爆發了大規模的豬流感疫情。目前，科學家們已經分離出了甲型h1n1病毒。下圖是制備用于預防和治療豬流感單克隆抗體的過程，分析回答：(1)若a細胞是小鼠骨髓瘤細胞，則b細胞是取自_體內的b淋巴細胞，促進d過程的常用誘導劑是_。(2)假設僅考慮某兩個細胞的融合，則可形成_種類型的c細胞，因此需用選擇培養基篩選出具有_特點的d細胞用于培養。d細胞的名稱是_。(3)d細胞的培養方式有_。(4)也有人提出用細胞核移植技術構建重組細胞來生產單克隆抗體。試用相關的圖示及文字表示該過程。11大豆和煙草體細胞染色體數目分別為40、48。它們根尖分生區細胞經過以下流程可獲得“大豆煙草”幼苗。請據圖回答問題：(1)自然條件下，大豆和煙草存在生殖隔離，二倍體“大豆煙草”通常不育。為使其可育，可通過人工誘導產生四倍體“大豆煙草”，植物體細胞雜交技術的意義在于_。(2)大豆和煙草根尖分生區細胞經過_酶處理后可獲得原生質體。但植物體細胞雜交先是細胞質融合再是細胞核融合，最關鍵的是細胞核融合。你認為細胞核融合最可能的時期是()a兩種原生質體接觸時b離心、振蕩時c中細胞第一次有絲分裂d中細胞再分化時(3)為確定中細胞是否有所需的雜種細胞，可用顯微鏡檢測。若觀察到細胞核中有_條染色體，說明有所需的雜種細胞。(只考慮細胞兩兩相融)。(4)培養基中需要加入營養物質(有機營養和無機營養)和植物激素(主要為_)，由愈傷組織獲得雜種植物主要通過_過程，利用的主要原理是_。(5)試管中a結構主要由_的細胞組成。第10課時章末復習答案訓練1a考查動物細胞培養與植物組織培養的主要區別。動物細胞培養與植物組織培養有許多相似之處，也有許多不同點。其主要不同點是它們的培養基的成分不同。動物細胞培養的培養液中通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽和維生素，另外還有動物血清。植物組織培養所需要的培養基包含植物生長和發育的全部營養成分，如礦質元素、蔗糖、維生素、植物激素和有機添加物，沒有動物血清。2b蛋白質工程與基因工程不同，基因工程產生的是自然界中原有的蛋白質，而蛋白質工程可合成自然界中不存在的蛋白質，a項正確。體細胞雜交技術是植物細胞工程中培養雜種植株的一項技術，動物細胞工程中克隆動物常利用細胞核移植技術，而制備單克隆抗體常利用動物細胞融合技術，b項錯誤。用莖尖進行植物組織培養可獲得脫毒苗，因為莖尖的細胞剛分裂產生還未被病毒感染，c項正確。動物細胞培養技術可為動物的轉基因技術提供受體細胞等，d項正確。3(1)在大于800 lx的光照下培養(2)聚乙二醇(peg)細胞全能性克服不同生物遠緣雜交不親和的障礙 (3)既能無限繁殖，又能產生特定的抗體特異性強、靈敏度高、化學性質單一b淋巴細胞高度分化，不能無限增殖解析若a、b表示兩種植物體細胞，則采用化學法形成c時，一般是用聚乙二醇(peg)作為誘導劑。由d細胞形成雜種植株的原理是細胞的全能性，這種育種方法的優點是克服不同生物遠緣雜交不親和的障礙。課后作業1a植物組織培養過程為：離體植物器官、組織或細胞脫分化,愈傷組織再分化,根、芽植物體。在植物組織培養中，生長素用于誘導細胞的分裂和根的分化，細胞分裂素的主要作用是促進組織細胞分裂或從愈傷組織和器官上分化出不定芽。組織培養過程中，兩者協同調控，當生長素含量高于細胞分裂素時，主要誘導植物組織脫分化和根原基的形成；當生長素含量低于細胞分裂素時，則主要誘導植物組織再分化和芽原基的形成。2b細胞全能性是指已分化的細胞仍然具有發育成完整個體的潛能，表現則是由某個細胞經過一定階段發育成個體。只有b項表現的是細胞全能性的過程，a、c、d三項都只表現了動物細胞的分裂、分化能力。3c在細胞核移植培育新個體的過程中，要同時考慮供核與受體細胞質的遺傳，細胞質基因也會影響后代性狀，所以c選項是錯誤的。4c5d動物細胞培養的材料不一定要取自動物胚胎細胞，其他合適細胞也可以；正常動物細胞不能無限地增殖，只有癌細胞在適宜的條件下才能無限增殖；人的成熟紅細胞沒有細胞核，所以不能用于動物細胞培養；用胰蛋白酶處理肝組織可獲得單個肝細胞。6a單克隆抗體的制備過程中，骨髓瘤細胞和b淋巴細胞融合時，發生了以下三種情況：未發生融合的細胞(b淋巴細胞、小鼠骨髓瘤細胞)；自身融合的細胞(b淋巴細胞自身融合、小鼠骨髓瘤細胞自身融合)；骨髓瘤細胞與單個b淋巴細胞融合的雜交瘤細胞。雜交瘤細胞是制備單克隆抗體必需的，因此將其篩選出來。7c動物體具有一定免疫力，是因為動物體具有非特異性免疫系統和特異性免疫系統，對各種病原微生物有一定的防御能力。而離體的動物細胞失去了對各種微生物的防御能力，因此，動物細胞體外培養的環境中不能存在微生物，否則，動物細胞就會死亡。8b植物細胞培養利用植物細胞的全能性培育成完整植株，而動物細胞培養利用細胞的增殖獲得細胞株、細胞系，無法培育成完整的個體，不能體現細胞的全能性。9d用純化的核衣殼蛋白反復注射到小鼠體內，小鼠血清中的抗體會有多種，不能稱為單克隆抗體。b淋巴細胞是高度分化的細胞，在體外培養的條件下不能無限分裂，故不能獲得大量針對sars病毒的抗體。將等量的b淋巴細胞和骨髓瘤細胞混合，